Mikroexplantatkulturen septalen Gewebes des Rattenhirnes: ein in-vitro-Modell zur Charakterisierung selektiver neurotropher und neurotoxischer Effekte
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| Sprache: | German |
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1998
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| Beschreibung: | Leipzig, Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | 88 Bl. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
\
1. EINLEITUNG 1
1.1 MODELLE ZUR KULTIVIERUNG VON ZELLEN UND GEWEBE 1
1.2. KOMPLEXE KULTURSYSTEME VOM HIMGEWEBE DER RATTE 5
1.3 NEUROPATHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN AM BASALEN VORDERHIM BEI 7
NEURODEGENERATIVEN ERKRANKUNGEN
\
_
2. AUFGABENSTELLUNG 11
3. MATERIALIEN UND METHODEN 12
3.1 MATERIALIEN - 12
3.1.1 LOESUNGEN UND MEDIEN 12
3.1.1.1 ZELLKULTURMEDIUM, SERUMSUBSTITUIERT (SSM) 12
3.1.1.2 ZELLKULTURMEDIUM, CHEMISCH DEFINIERT (CDM) 12
3.1.1.3 TRYPSINIERUNGSLOESUNG 12
3.1.1.4 PHOSPHATGEPUFFERTE SALZLOESUNG (PBS) 12
3.1.1.5 ISOTONE PUFFERLOESUNG DULBECCO'S PBS 12
3.1.2 ANTIKOERPER 13
3.2 METHODEN 14
3.2.1 MIKROEXPLANTATKULTUREN 14
3.2.1.1 PRAEPARATION DER MIKROEXPLANTATE VOM SEPTUM DES RATTENHIMS 14
3.2.1.2 KULTURMATERIALIEN 15
3.2.1.3 KULTURBEDINGUNGEN 15
3.2.2 ASTROZYTENDISSOZIATIONSKULTUR 16
3.2.2.1 GEWEBEPRAEPARATION 16
3.2.2.2 TRYPSINIERUNG 16
3.2.2.3 ZELLZAEHLUNG 16
3.2.2.4 KULTURBEDINGUNGEN 17
3.2.2.5 GEWINNUNG VON GLIAKONDITIONIERTEM MEDIUM 17
3.2.3 TESTMEDIEN UND ZUSAETZE 18
3.2.3.1 FIBROBLASTENWACHSTUMSFAKTOR 18
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.23.2 OKADAINSAEURE
18
3.2.33 GLIAKONDITIONIERTES MEDIUM
18
3.2.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE NACHWEISPIETHODEN 19
3.2.4.1 FIXATION DES ZELLMATERIALS 19
3.2.4.2 BLOCKUNG 19
3.2.43 ANTIKOERPEREINSATZ 19
3.2.4.4 DETEKTION 20
3.2.5 VIDEOTECHNISCHE DOKUMENTATION 20
3.2.6 QUANTITATIVE DES WACHSTUMSANALYSE ~ 21
3.2.6.1 MORPHOMETRISCHE PARAMETER 21
3.2.7 STATISTISCHE AUSWERTUNG 22
4. ERGEBNISSE ^ 23
4.1 BESCHREIBUNG DES LICHTMIKROSKOPISCHEN BILDES DER
MIKROEXPLANTATKULTUR 23
4.1.1 ANHEFTUNGPHASE 23
4.1.2 DIFFERENZIERUNGSPHASE 26
4.1.3 IMMUNHISTOCHEMISCHE NACHWEISMETHODEN AN DEN ZELLEN DER SEPTALEN 27
MIKRBEXPLANTATKULTUREN
4.1.3.1 NEURONALE ZELLEN IN MIKROEXPLANTATKULTUREN DES SEPTUMS 27
4.13.2 ASTROZYTEN IN DEN SEPTALEN MIKROEXPLANTATKULTUREN. 34
4.1.4 BESCHREIBUNG WEITERER STRUKTUREN IM MIKROEXPLANTATMODELL 37
4.1.5 ZUR ANORDNUNG UND VERTEILUNG DER NEURONALEN ZELLEN IM SYSTEM 37
4.2 MORPHOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN AN DEN MIKROEXPLANTATKULTUREN 39
4.2.1 EINSATZ DES WACHSTUMSFAKTORS BFGF IN DER MIKROEXPLANTATKULTUR 39
4.2.1.1 ERGEBNISSE BEI EINSATZ VON BFGF IN MIKROEXPLANTATKULTUREN (PT 2)
39
4.2.1.2 ERGEBNISSE BEI EINSATZ VON BFGF IN MIKROEXPLANTATKULTUREN (PT5)
40
4.2.2 EINSATZ VON GLIAKONDITIONIERTEM MEDIUM IN DEN
MIKROEXPLANTATKULTUREN 42
4.2.2.1 ERGEBNISSE DER MORPHOMETRISCHEN UNTERSUCHUNGEN ZUR WIRKUNG VON
42
GLIAKONDITIONIERTEM MEDIUM IN MIKROEXPLANTATKULTUREN DES
PRAEPARATIONSALTER PT2 BZW. PT4
4.2.2.2 VERGLEICHENDE UNTERSUCHUNGEN BEI EINSATZ VON HOMOLOGEM 45
UND HETEROLOGEM GCM
4.2.2.2.1 ERGEBNISSE DER MORPHOMETRISCHEN UNTERSUCHUNGEN BEI
45
NUTRITION MIT HOMOLOGEM UND HETEROLOGEM GCM
4.2.3 UNTERSUCHUNGEN DES WACHSTUMS IN DEN SEPTALEN
MIKROEXPLANTATKULTUREN 47
BEI ZUSATZ VON OKADAINSAEURE \
4.2.3.1 ERGEBNISSE DER MORPHOMETRISCHEN UNTERSUCHUNGEN BEI EINSATZ 47
VON OKADAINSAEURE IN MIKROEXPLANTATKULTUREN DES PRAEPARATIONSALTERS PT2
4.3 VERLAUFSDOKUMENTATION DES ZELLVERHALTENS IN DEN
MIKROEXPLANTATKULTUREN 49
4.3.1 BESCHREIBUNG DES LICHTMIKROSKOPISCHEN BILDES VON UNBEEINFLUSSTEN 49
MIKROEXPLANTATKULTUREN IN SEQUENZAUFNAHMEN
4.3.2 LICHTMIKROSKOPISCHE BESCHREIBUNG DER SEPTALEN
MIKROEXPLANTATKULTUREN 50
UNTER CHRONISCHEM EINFLUSS VON OKADAINSAEURE
4.3.3 BESCHREIBUNG DES ZELLVERHALTENS BEI KURZZEITIGEM EINSATZ VON 50
OKADAINSAEURE IN SEQUENZAUFNAHMEN AM PHASENKONTRASTMIKROSKOP
5. DISKUSSION 54
5.1 DISKUSSION DER METHODEN 54
5.1.1 ZUR AUSWAHL DES KULTURSYSTEMS 54
5.1.2 MIKROEXPLANTATKULTURTECHNIK 55
5.1.3 EINFLUSS DES KULTURMEDIUMS 56
5.1.4 IMMUNHISTOCHEMISCHE METHODEN 57
5.1.5 VIDEODOKUMENTATION 60
5.2 DISKUSSION DA* ERGEBNISSE 62
5.2.1 QUANTITATIVE AUSWERTUNG DER MIKROEXPLANTATENTWICKLUNG 62
5.2.1 BEWERTUNG DER WIRKUNG DES WACHSTUMSFAKTORS BFGF 62
5.2.2 WIRKUNG DES GLIAKONDITIONIERTEN MEDIUMS 64
5.2.3 WIRKUNG DES ZUSATZES VON OKADAINSAEURE 65
5.2.4 NERVENZELLDICHTE IM MIKROEXPLANTATMODELL 67
5.2.5 WERTIGKEIT DER QUANTITATIVEN AUSSAGEN 67
5.2.6 WIRKUNGEN DER OKADAINSAEURE AUF NEURONE DES BASALEN VORDERHIMS 68
6. ZUSAMMENFASSUNG 73
7. LITERATURVERZEICHNIS 76 |
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