Molekulare Mechanismen der Gliazellaktivierung im zentralen Nervensystem:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Hieronymus
1998
|
| Ausgabe: | Als Typoskript gedr. |
| Schriftenreihe: | Medizin
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Techn. Univ., Diss., 1997 |
| Beschreibung: | 120 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 3933083710 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
5
1
EINLEITUNG
1.1
DIE
ROLLE
VON
GLIAZELLEN
IN
DER
NERVENREGENERATION
.
8
1.2
MOLEKULARE
MEDIATOREN
DER
GLIAZELLREAKTION
.
9
1.2.1
CALCITONIN
GENE-RELATED
PEPTIDE
UND
GALANIN
.
9
1.2.2
EXTRAZELLULAERES
ADENOSINTRIPHOSPHAT
(ATP
E
)
.
11
1.3
MECHANISMEN
DER
SIGNALTRANSDUKTION
UND
DER
TRANSKRIPTIONALEN
AKTIVIERUNG
.
12
1.4
FRAGESTELLUNG
DER
ARBEIT
.
15
2
MATERIAL
2.1
CHEMIKALIEN,
MEDIEN
UND
GERAETE
.
18
2.2
PHARMAKA
.
20
2.3
ENZYME
UND
KITS
.
21
2.4
ANTIKOERPER
.
21
2.5
RADIOCHEMIKALIEN
.
21
2.6 LOESUNGEN
UND
PUFFER
.
22
3
METHODEN
3.1
PRIMAERE
ZELLKULTUREN
.
24
3.1.1
ASTROZYTENKULTUREN
.
24
3.1.2
MIKROGLIAKULTUREN
.
25
3.2
ZYTOCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
KULTUREN
.
25
3.2.1
IMMUNZYTOCHEMIE
.
25
3.2.2
LEKTIN-FAERBUNG
.
26
3.3
BESTIMMUNG
VON
CAMP
IM
RADIOIMMUNOASSAY
(RIA)
.
26
3.3.1
STIMULATION
DER
ZELLEN
.
26
3.3.2
EXTRAKTION
DES
CAMP
.
27
3.3.3
CAMP-RADIOIMMUNOASSAY
.
27
3.4
MESSUNG
DER
INTRAZELLULAEREN
CALCIUMKONZENTRATION
.
28
3.5
BESTIMMUNG
DER
AKTIVIERUNG
VON
PROTEIN
KINASEN
.
29
3.5.1
STIMULATION
DER
ZELLEN
UND
PROTEINEXTRAKTION
.
29
3.5.2
PARTIELLE
REINIGUNG
DURCH
SAEULENCHROMATOGRAPHIE
.
29
3.5.3
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.
30
3.5.4
BESTIMMUNG
DER
AKTIVIERUNG
VON
PROTEIN
KINASE
A
.
30
3.5.5
BESTIMMUNG
DER
AKTIVIERUNG
VON
PROTEIN
KINASE
C
.
31
3.6
PHARMAKOLOGISCHE
INHIBITION
VON
PROTEIN
KINASEN
.
32
3.7
ISOLIERUNG
VON
CDNA-FRAGMENTEN
ALS
HYBRIDISIERUNGSPROBEN
.
32
3.7.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
PLASMID-DNA
.
33
3.7.2
ALKOHOLISCHE
FAELLUNG
UND
RESTRIKTIONSVERDAU
.
33
3.7.3
PRAEPARATIVES
AGAROSEGEL
.
33
3.7.4
ELUTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
MIT
HILFE
DES
GENE
CLEAN*-KITS
.
34
3.8
HERSTELLUNG
RADIOAKTIV
MARKIERTER
NUKLEINSAEUREN
.
34
3.8.1
RANDOM
HEXAMER
PRIMING
.
34
3.8.2
IN
VITRO-TRANSKRIPTION
.
35
3.8.3
ENTFERNUNG
VON
MONO
UND
OLIGONUKLEOTIDEN
MIT
YYNICK-COLUMNS
"
.
35
3.8.4
3
'
-ENDMARKIERUNG
.
35
3.9
QUANTITATIVE
YYNORTHERN
BLOT
"
-ANALYSE
.
36
3.9.1
PRAEPARATION
ZELLULAERER
GESAMT-RNA
.
36
3.9.2
AUFTRENNUNG
VON
RNA
IM
DENATURIERENDEN
AGAROSEGEL
.
37
3.9.3
NORTHERN
TRANSFER
.
37
3.9.4
NORTHERN
HYBRIDISIERUNG
.
37
3.9.5
STRIPPEN
VON
MEMBRANEN
.
38
3.9.6
QUANTIFIZIERUNG
DER
MRNA
AUF
NORTHERN
BLOTS
.
38
2
3.10
IN
SFTN-HYBRIDISIERUNGSHISTOCHEMIE
.
39
3.10.1
IN
S/ZU-HYBRIDISIERUNG
(ISH)
.
39
3.10.2
YYEMULSION
DIPPING
"
.
40
3.11
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
40
4
ERGEBNISSE
4.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLKULTUREN
.
44
4.1.1
IDENTIFIZIERUNG
DER
GLIAZELLEN
MIT
HILFE
VON
MONO
KLONALEN
ANTIKOERPERN
.
44
4.1.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
GLIAZELLKULTUREN
DURCH
NORTHERN
HYBRIDISIERUNG
.
44
4.2
CGRP
UND
ATP
C
IN
DER
TRANSKRIPTIONALEN
AKTIVIERUNG
VON
MIKROGLIA
.
45
4.2.1
INDUKTION
VON
IEG
MRNA
DURCH
PHORBOLESTER
UND
FORSKOLIN
.
45
4.2.2
WIRKUNGEN
VON
CGRP,
GALANIN
UND
ADPSSS
AUF
DIE
LEG-EXPRESSION
IN
MIKROGLIA
.
46
4.2.3
ZELLULAERE
LOKALISATION
VON
JUNB
UND
C-JUN
MRNA
IN
MIKROGLIAKULTUREN
.
47
4.2.4
CHARAKTERISIERUNG
DES
PURINERGEN
REZEPTORS
AUF
MIKROGLIAZELLEN
.
47
4.2.5
SIGNALTRANSDUKTION
VON
CGRP
UND
ADPSSS
IN
MIKROGLIA
.
48
4.3
CGRP,
GALANIN
UND
ATP
E
IN
DER
TRANSKRIPTIONALEN
AKTIVIERUNG
VON
ASTROZYTEN
.
49
4.3.1
INDUKTION
VON
IEG
MRNA
DURCH
PHORBOLESTER
UND
FORSKOLIN
.
49
4.3.2
WIRKUNGEN
VON
CGRP,
GALANIN
UND
ADPSSS
AUF
DIE
LEG-EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
.
49
4.3.3
SIGNALTRANSDUKTION
VON
CGRP,
GALANIN
UND
ADPSSS
IN
ASTROZYTEN
.
50
3
4.3.4
INTRAZELLULAERE
YYCROSS-TALK
"
-EREIGNISSE
DURCH
CGRP,
GALANIN
UND
ADPSSS
IN
ASTROZYTEN
.
51
4.3.4.1
ADPSSS
POTENZIERT
DEN
CAMP-ANSTIEG
DURCH
CGRP.
.52
4.3.4.2
PMA
POTENZIERT
DEN
CAMP-ANSTIEG
DURCH
CGRP
UND
FORSKOLIN
.
52
4.3.4.3
GALANIN
INHIBIERT
DEN
CAMP-ANSTIEG
DURCH
CGRP
.
52
4.3.4.4
ADPSSS
POTENZIERT
DIE
C-FOS
MRNA-EXPRESSION
DURCH
CGRP
.
53
4.3.5
WIRKUNGEN
VON
PROTEIN
KINASE-INHIBITOREN
AUF
DIE
IEG
EXPRESSION
IN
ASTROZYTEN
.
53
5
DISKUSSION
5.1
MIKROGLIA:
SIGNALTRANSDUKTION
UND
TRANSKRIPTIONALE
AKTIVIERUNG
.
90
5.2
ASTROZYTEN:
SIGNALTRANSDUKTION
UND
TRANSKRIPTIONALE
AKTIVIERUNG
.
93
5.3
NEUE
ERKENNTNISSE
UEBER
DIE
REGULATION
DER
LEG-EXPRESSION
.
98
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
100
7
LITERATURVERZEICHNIS
.
102
DANKSAGUNG
.
119
LEBENSLAUF
.
121
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
122
4 |
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