Charakterisierung und Anwendung neuer Markerproteine für die Prostatasekretion und das Prostatakarzinom:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Marburg
Görich und Weiershäuser
1998
|
| Schriftenreihe: | Wissenschaft in Dissertationen
369 |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | 142 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1.1.
MORPHOLOGIE
DER
HUMANEN
PROSTATA
2
1.1.1.
PRAE
UND
POSTNATALE
ENTWICKLUNG
DER
PROSTATA
2
1.1.2.
PATHOLOGIE
DER
HUMANEN
PROSTATA:
BENIGNE
PROSTATAHYPERPLASIE
(BPH)
UND
PROSTATAKARZINOM
3
1.2.
MARKERPROTEINE
DER
HUMANEN
PROSTATA
5
1.2.1.
DAS
PROSTATA-SPEZIFISCHE
ANTIGEN
(PSA)
6
1.2.2.
DIE
SAURE
SEKRETORISCHE
PROSTATA
PHOSPHATASE
(PAP)
6
1.2.3.
DIE
PROSTASOMEN
ALS
SEKRETORISCHE
VESIKEL
DER
HUMANEN
PROSTATA
7
1.2.4.
DAS
PROSTATA-SPEZIFISCHE
MEMBRANANTIGEN
(PSM)
8
1.2.5.
DAS
LYSOSOMEN-ASSOZIIERTE
MEMBRANPROTEIN
(LAMP-2)
8
1.2.6.
DER
MACROPHAGE
MIGRATIONS-INHIBIERENDE
FAKTOR
(MIF)
9
1.3.
SEKRETIONSMECHANISMEN
IN
DER
PROSTATA
10
1.4.
PROSTATA
UND
KOAGULATIONSDRFISE
DER
RATTE
11
1.5.
ZIELSETZUNGEN
DER
ARBEIT
13
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
2.1.
REAGENZIEN
UND
VERSUCHSMATERIAL
14
2.1.1.
HUMANES
SEMINALPLASMA,
GEWEBE
UND
ZELLINIEN
15
2.1.2.
VERSUCHSTIERE
15
2.2.
ZELL
UND
ORGANKULTURMETHODEN
15
2.2.1.
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
15
2.2.2.
STIMULATIONSVERSUCHE
AN
LNCAP
ZELLEN
16
2.2.3.
CALCIUMFLUX-MESSUNGEN
AN
ZELLEN
MIT
DER
FURA
2/AM-METHODE
16
2.2.4.
KURZZEIT-ORGANKULTUREN
DER
RATTENKOAGULATIONSDRUESE
18
2.3.
BIOCHEMISCHE
METHODEN
19
2.3.1.
ISOLIERUNG
DER
LEUKOZYTENFRAKTION
AUS
HUMANEM
VOLLBLUT
19
2.3.2.
ISOLIERUNG
DER
PROSTASOMEN
19
2.3.3.
ISOLIERUNG
APIKALER
EPITHELZELLMEMBRANEN
19
2.3.4.
PEPTIDSYNTHESE
UND
IMMUNISIERUNG
DER
PSM-SEQUENZEN
20
2.3.5.
PROTEINBESTIMMUNG
21
2.3.6.
IMMUNPRAEZIPITATION
21
2.3.7.
GELELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
21
2.3.8.
SILBERFARBUNG
DER
PROTEINGELE
22
2.4.
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
23
2.4.1.
PROTEIN-TRANSFER
AUF
TRAEGERMENBRANEN(WESTEM-BLOTTING)
23
2.4.2.
WESTERN
BLOT-ANALYSE
24
2.4.3.
IMMUNAFFINITAETSREINIGUNG
VON
ANTISEREN
25
2.4.4.
REINIGUNG
VON
KANINCHEN
IMMUNGLOBULIN
(IGG)-FRAKTIONEN
26
2.4.5.
BIOTINYLIERUNG
DER
IGG-FRAKTIONEN
26
2.4.6.
ENZYME-LINKED-IMMUNOSORBENT-ASSAY
(ELISA)
26
2.4.7.
PROTEINVERDAU
AUS
DEM
SDS-GEL
28
2.4.8.
PROTEINSEQUENZIERUNG
28
2.5.
MORPHOLOGISCHE
METHODEN
29
2.5.1.
OBJEKTTRAEGERBESCHICHTUNG
29
2.5.2.
PARAFFINEINBETTUNG
VON
GEWEBEN
(RORNEIS,
1968)
29
2.5.3.
HERSTELLUNG
VON
KRYOSTATSCHNITTEN
30
2.5.4.
HERSTELLUNG
VON
SPERMIEN-AUSSTRICHPRAEPARATEN
30
2.5.5.
EINBETTUNG
IN
EPON-KUNSTHARZ
31
2.5.6.
HERSTELLUNG
VON
SEMIDUENNSCHNITTEN
32
2.5.7.
HERSTELLUNG
DER
ULTRADUENNSCHNITTE
32
2.6.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
METHODEN
32
2.6.1.
PEROXIDASE-ANTI-PEROXIDASE
(PAP)
REAKT'ON
NACH
STEMBERGER
32
2.6.2.
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
ANTI-ALKALISCHE
PHOSPHATASE
(APAAP)-METHODE
33
2.6.3.
AVIDIN-BIOTIN-KOMPLEX
(ABC)-TECHNIK
34
2.6.4.
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
34
2.6.5.
DOPPELFLUORESZENZ-MARKIERUNG
IN
SEMIDUENNEN
KRYOSTATSCHNITTEN
35
2.6.6.
FLUORESZENZ-KEMFIRBUNG
35
2.7.
IMMUNELEKTRONENMIKROSKOPIE
35
2.8.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
37
2.8.1
RNA-PRAEPARATION
MIT
RNEASY
37
2.8.2.
RNA-ISOLIERUNG
MIT
TRIZOL
37
2.8.3.
PLASMID
DNA-PRAEPARATION
38
2.8.4.
SPEKTROPHOTOMETRISCHE
QUANTIFIZIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
38
2.8.5.
REINIGUNG
DER
GESAMT
RNA-PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
38
2.8.6.
POLY
(A)
-RNA
ISOLIERUNG
AUS
GESAMT-RNA
39
2.8.7.
RNA-GELELEKTROPHORESE
39
2.8.8.
OLIGONUKLEOTID-PRIMER
40
2.8.9.
REVERSE-TRANSKRIPTASE-POLYMERASE-KETTENREAKTION
(RT-PCR)
41
2.8.10.
AMOC-VERFEHREN
ZUR
ERHOEHUNG
DER
CDNA-AUSBEUTE
42
2.8.11.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
42
2.8.12.
DNA-GELELEKTROPHORESE
43
2.8.13.
TRANSFER
VON
DNA
AUF
TRAEGERMEMBRANEN
(SOUTHERN
BLOT)
44
2.8.14.
KLONIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
45
2.8.15.
VERDAU
MIT
RESTRIKTIONS-ENDONUKLEASEN
46
2.8.16.
ANLEGEN
EINER
GLYZERINKULTUR
46
2.8.17.
SEQUENZIERUNG
DER
KLONIERTEN
PCR-FRAGMENTE
46
2.8.18.
RNA-SONDENHERSTELLUNG
47
2.8.19.
TRANSFER
VON
RNA
AUF
POSITIV
GELADENE
NYLONMEMBRANEN
(NORTHERN
BLOT)
47
3.
ERGEBNISSE
3.1.
CHARAKTERISIERUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
AUS
PROSTASOMEN
48
3.1.1.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
VON
PROSTASOMEN
AUS
HUMANEM
SEMINALPLASMA
49
3.1.2.
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
PROSTASOMEN
50
3.1.3.
WESTERN
BLOT-ANALYSE
DER
PROSTASOMENFRAKTION
51
3.1.4.
IMMUNPRAEZIPITATION
DES
100
KDA-ANTIGENS
AUS
PROSTASOMEN
52
3.1.5.
PROTEOLYTISCHER
VERDAU
DES
100
KDA-ANTIGENS
UND
AMINOSAEURE-SEQUENZIERUNG
52
3.2.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
BEFUNDE
MIT
DEM
ANTI-100
KDA-ANTIKOERPER
54
3.2.1.
VERTEILUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
IN
DER
NORMALEN
ADULTEN
PROSTATA
54
3.2.2.
KOLOKALISATION
VON
100
KDA-ANTIGEN
UND
PSA
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
55
3.2.3.
IMMUNELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
LOKALISATION
DES
100
KDA-ANTIGENS
56
33.
VERTEILUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
WAEHREND
DER
HUMANEN
PROSTATA
ENTWICKLUNG
57
3.3.1.
NACHWEIS
VON
PSA
UND
PAP
UND
100
KDA-ANTIGEN
WAEHREND
DER
HUMANEN
PROSTATAENTWICKLUNG
61
3.4.
VERTEILUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
IN
DER
PATHOLOGISCH
VERAENDERTEN
PROSTATA62
3.5.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
VERTEILUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
IN
VERSCHIEDENEN
HUMANEN
GEWEBEN
64
3.5.1.
VERTEILUNG
DES
100
KDA-ANTIGENS
AN
HUMANEN
SPERMIEN
67
3.6.
DAS
PROSTATA-SPEZIFISCHE
MEMBRANANTIGEN
(PSM)
68
3.6.1.
PRODUKTION
POLYKLONALER
ANTISEREN
GEGEN
SYNTHETISCHE
PEPTIDE
DES
PSM
68
3.6.2.
ANTIBODY
CAPTURE
ELISA
MIT
DEM
ANTI-PSM
PEPTID-ANTISERUM
69
3.6.3.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
VERTEILUNG
DES
PSM
ANTIGENS
IN
DER
PROSTATA
70
3.7.
UNTERSUCHUNG
ZUR
EXPRESSION
DES
PSM
71
3.7.1.
SEQUENZIERUNG
DER
KLONIERTEN
PCR-FRAGMENTE
DES
PSM
71
3.7.2.
EXPRESSION
DES
PSM
IN
MENSCHLICHEN
STROMALEN
PROSTATAZELLEN
UND
PROSTATA
ZELLINIEN
72
3.7.3.
EXPRESSION
DES
PSM
IM
MAENNLICHEN
GENITALTRAKT
73
3.7.4.
EXPRESSION
DES
PSM
IN
VERSCHIEDENEN
MENSCHLICHEN
GEWEBEN
74
3.8.
UNTERSUCHUNG
DES
LAMP-2-ANTIGENS
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
75
3.8.1.
WESTERN
BLOT-ANALYSE
MIT
DEM
ANTI-LAMP-2-ANTIKOERPER
75
3.8.2.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
VERTEILUNG
DES
LAMP-2-ANTIGENS
IN
DER
PROSTATA
76
3.8.3.
IMMUNELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
DARSTELLUNG
DES
LAMP-2-ANTIGENS
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
77
3.9.
MIF-VERTEILUNG
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
79
3.9.1.
MIF-EXPRESSION
UND
LOKALISATION
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
80
3.9.2.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
LOKALISATION
VON
MIF
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
81
3.12.4.
SEQUENZIERUNG
DER
APIKALEN
MEMBRANPROTEINE
3.9.3.
UEBERPRUEFUNG
DER
M1F-RT-PCR
SPEZIFITAET
DURCH
RESTRIKTIONSANALYSE
82
3.9.4.
NORTHERN
BLOT-ANALYSE
HUMANER
PROSTATAKARZINOM-ZELLINIEN
(LNCAP,
PC-3,
DU
145)
UND
PRIMAEREN,
STROMALEN
PROSTATAZELLEN
(P21)
FUER
DAS
MIF-GEN
83
3.9.5.
RT-PCR
NACHWEIS
EXPRESSION
VON
MIF-MRNA
IN
HUMANEN
PROSTATA-ZELLINIEN
(LNCAP,
PC-3,
DU
145)
UND
PRIMAEREN,
STROMALEN
PROSTATAZELLEN
(P21)
84
3.9.6.
EXPRESSION
VON
MIF-MRNA
IN
PROSTATAKARZINOMEN
85
3.9.7.
STEROIDHORMON-STIMULATIONSVERSUCHE
AN
LNCAP
ZELLEN
86
3.9.8.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
TRANSDUKTION
VON
MIF-INDUZIERTEN
INTRAZELLULAEREN
SIGNALEN
MIT
DER
FURA
2/AM
METHODE
87
3.10.
EXPRESSION
UND
LOKALISATION
VON
MIF
IN
DER
RATTENPROSTATA
89
3.10.1.
IMMUNHISTOCHEMISCHE
LOKALISATION
VON
MIF
IN
DER
RATTENPROSTATA
89
3.10.2.
EXPRESSION
VON
MIF
IN
DER
DORSALEN,
LATERALEN
UND
VENTRALEN
PROSTATA
DER
RATTE
90
3.11.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
MECHANISMUS
DER
APOKRINEN
SEKRETION
IN
DER
DORSALEN
PROSTATA
UND
DER
KOAGULATIONSDRUESE
DER
RATTE
91
3.11.1.
VERTEILUNG
VON
TRANSGLUTAMINASE
UND
SS-AKTIN
IN
DER
DORSALEN
PROSTATA
DER
RATTE
91
3.11.2.
VERTEILUNG
VON
TRANSGLUTAMINASE
UND
SS-AKTIN
IN
DER
DORSALEN
PROSTATA
DER
RATTE
NACH
ANDROGENENTZUG
93
3.11.3.
VERTEILUNG
VON
GELSOLIN
IN
DER
DORSALEN
PROSTATA
DER
RATTE
94
3.11.4.
EINFLUSS
VON
CYTOCHALASIN
B
UND
BREFELDIN
A
AUF
DIE
SEKRETION
IN
DER
KOAGULATIONSDRUESE
95
3.12.
ISOLIERUNG
DER
APIKALEN
EPITHELZELLMEMBRANEN
AUS
DER
KOAGULATIONSDRUESE
DER
RATTE
97
3.12.1.
GELELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
AUFARBEITUNGSSCHRITTE
AUS
DER
EPITHELZELHNEMBRAN-ISOLIERUNG
DER
KOAGULATIONSDRUESE
97
3.12.2.
WESTERN
BLOT-ANALYSE
VON
KOAGULATIONSDRUESENHOMOGENAT
UND
EPFTHELZELL-
FRAKTIONEN
MIT
DEM
ANTISERUM
GEGEN
DAS
203
KDA
PROTEIN
99
3.12.3.
WESTERN
BLOT-ANALYSE
VON
KOAGULATIONSDRUESENSEKRET
MIT
DEM
ANTISERUM
GEGEN
DAS
203
KDA
PROTEIN
100
100
3.13.
KLINISCHE
STUDIE:
MOLEKULARE
DIAGNOSTIK
DES
PROSTATAKAZINOMS
DURCH
NACHWEIS
VON
PROSTATA-ZELLEN
IM
BLUT
101
3.13.1.
PSA-MRNA
EXPRESSION
IN
VERSCHIEDENEN
LEUKOZYTEN-CDNA-PRAEPARATIONEN
101
3.13.2.
PSM-TNRNA
EXPRESSION
IN
VERSCHIEDENEN
LEUKOZYTEN-CDNA-PRAEPARATIONEN
102
3.13.3.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
RT-PCR
ERGEBNISSE
FUER
PSA
UND
PSM
102
4.
DISKUSSION
4.1.
DAS
100
KDA-ANTIGEN
DER
HUMANEN
PROSTATA
103
4.2.
UNTERSUCHUNG
DER
LAMP-2
LOKALISATION
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
111
4.3.
APOKRINE
SEKRETION
SEKRETORISCHER
VESIKEL
IN
DER
HUMANEN
PROSTATA
112
4.4.
APOKRINE
SEKRETION
IN
DER
DORSALEN
PROSTATA
UND
KOAGULATIONSDRUESE
DER
113
RATTE
4.5.
NEUE
MARKERPROTEINE
IN
DER
PROSTATA
115
4.5.1.
DER
MAKROPHAGEN
MIGRATIONS-INHIBIERENDE
FAKTOR
(MIF)
116
4.5.2.
DAS
PROSTATA-SPEZIFISCHE
MEMBRANANTIGEN
(PSM)
119
4.6.
MOLEKULARBIOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROSTATA-ZELLEN
IM
BLUT
121
4.6.1.
MOLEKULARE
DIAGNOSTIK
VON
PROSTATAERKRANKUNGEN
122
5.
ZUSAMMENFASSUNG
124
6.
LITERATURVERZEICHNIS
126 |
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