Anwendung der Affinitätsmembranchromatographie zur Isolierung von menschlichen Immunglobulinen und monoklonalen Antikörpern:
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1998
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INHALTSVERZEICHNIS
1
ABBKUERZUNGEN
5
1
EINLEITUNG
6
ID
P
RO
T
GINRGI
.
NI
G.U
N
K
&
1.1.1
BEDEUTUNG
DER
PROTEINREINIGUNG
6
1.1.2
AFFINITAETSREINIGUNG
6
1.2
AFFINITAETSMEMBRANFILTRATION
FI
L2
STRUKTUR
UND
EIGENSCHAFTEN
SYNTHETISCHER
MEMBRANEN
12
1.3.1
AUFBAU
DER
GRUNDMATRIX
SYNTHETISCHER
MEMBRANEN
10
1.3.2
EIGENSCHAFTEN
DER
GRUNDMATRIX
II
1.4
MEMBRANMODULE
12
L5
F
Y
NK
TIONALISKRUN
G
DER
M
ATRIX
12
1.5.1
LONENAUSTAUSCHMEMBRANEN
14
1.5.2
MEMBRANEN
MIT
PSEUDOBIOSPEZIFISCHEN
LIGANDEN
14
1.5.3
MEMBRANEN
MIT
BIOSPEZIFISCHEN
LIGANDEN
15
1.6
MATHEMATISCHE
ASPEKTE
DER
AFFINITAETSMEMBRANFILTRATION
12
1.6.1
REAKTIONSKINETIK
DER
KOMPLEXBILDUNGSREAKTION
17
1.6.2
DIFFUSION
IN
DER
MATRIX
19
1.7
AUFGABENSTELLUNG
UND
ZIELE
DER
ARBEIT
21
2
MATERIAL
UND
METHODEN
22
2D
LA&Q&HUMIKALKN
22
2.2
AFFINITAETSMEMBRANCHROMATOGRAPHIE
22
2.2.1
VERWENDETE
PUFFERLOESUNGEN
23
2.2.2
VERWENDETE
MEMBRAN
23
2.2.3
VERWENDETE
MEMBRANMODULE
24
2.2.4
VERWENDETE
CHROMATOGRAPHISCHE
EINHEIT
25
2.2.5
VERWENDETE
PROBEN
25
2.2.6
PROBENVORBEREITUNG
26
2.2.7
ABLAUF
DER
AFFINITAETSMEMBRANCHROMATOGRAPHIE
26
2X3
NACHWEISVERFAHREN
FUER
PROTEINE
22
2.3.1
BESTIMMUNG
VON
PROTEINKONZENTRATIONEN
27
2.3.1.1
PHOTOMETRIE
27
2.3.1.2
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
27
2.3.1.3
ELISA
ZUR
BESTIMMUNG
DER
KONZENTRATION
VON
IMMUNGLOBULINKLASSEN
UND
IGG-SUBKLASSEN
28
2.3.2
QUALITATIVER
UND
SEMIQUANTITATIVER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
29
2.3.2.1
SDS-ELEKTROPHORESE
29
2.3.2.2
GRADIENTENGELELEKTROPHORESE
30
2.3.2.3
WESTERN
BLOT
31
2.3.2.4
IMMUNELEKTROPHORESE
32
2.3.2.5
IMMUNDIFFUSION
NACH
OUCHTERLONY
33
2*4
PRAEPARATION
VON
IMMUNGLOBULIN
2
AUS
PLASMA
33
2X5
FRAGMENTIERUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
G
DURCH
PROTEASENVERDAU
34
2.6
PRAEPARATION
VON
IMMUNGLOBULIN
2
AN
PROTEIN
A
SEPHAROSE
34
2X2
BESTIMMUNG
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
UND
DER
MAXIMALKAPAZITAET
DER
MEMBRAN
FUER
IMMUNGLOBULIN
2
DURCH
FRONTALANALYSE
35
3
ERGEBNISSE
37
3X1
SPEZIFITAET
DER
MEMBRANBINDUNG
32
3.1.1
AFFINITAETSMEMBRANCHROMATOGRAPHIE
VON
NORMALPLASMA
37
3.1.2
SPEZIFITAET
DER
BINDUNG
GEGENUEBER
IMMUNGLOBULINKLASSEN
39
3.1.3
SPEZIFITAET
DER
BINDUNG
GEGENUEBER
IMMUNGLOBULIN
G-SUBKLASSEN
39
3.1.4
SPEZIFITAET
DER
BINDUNG
GEGENUEBER
DEM
TYP
DER
LEICHTEN
KETTE
DER
IMMUNGLOBULINE
40
3.1.5
SPEZIFITAET
DER
BINDUNG
GEGENUEBER
F,
B
-
UND
F
C
-FRAGMENTEN
DES
IMMUNGLOBULINS
G
42
3.1.6
ELUTION
VON
IMMUNGLOBULINEN
DURCH
ADENOSINTRIPHOSPHAT
43
3.1.7
BINDUNG
WEITERER
PLASMAPROTEINE
AN
DIE
AFFINITAETSMEMBRAN
44
3.1.8
BINDUNG
VON
PLASMINOGEN
AN
DIE
AFFINITAETSMEMBRAN
46
3.1.9
SELEKTIVE
ELUTION
VON
PLASMINOGEN
UND
IMMUNGLOBULIN
47
2
3.1.10
12
3.2.1
3.2.2
3.2.3
3.2.4
11
3.3.1
3.3.2
14
3.4.1
3.4.2
3.4.3
15
3.5.1
3.5.2
3.5.3
16
3.7
3.7.1
3.7.2
3.7.3
4
VERGLEICH
DER
PRAEPARATION
VON
IMMUNGLOBULINEN
AN
PROTEIN
A
SEPHAROSE
UND
DER
AFFINITAETSMEMBRAN
48
AFFINITAETSMEMBRANCHROMATOGRAPHIE
ABHAENGIGKEIT
DER
BINDUNGSKAPAZITAET
VON
DER
PUMPGESCHWINDIGKEIT
ABHAENGIGKEIT
DER
BINDUNGSKAPAZITAET
VOM
PH-WERT
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
SALZE
AUF
DIE
BINDUNGSKAPAZITAET
ABHAENGIGKEIT
DER
BINDUNGSEFFIZIENZ
VON
DER
AUSGANGSKONZENTRATION
DER
PROBE
42
49
51
52
53
BINDUNGSKINETIK
FRONTALANALYSE
ZUR
BESTIMMUNG
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTEN
UND
DER
MAXIMALKAPAZITAET
DER
MEMBRAN
FUER
DIE
BINDUNG
VON
IGG
BESTIMMUNG
DES
DURCHBRUCHSPUNKTES
FUER
IMMUNGLOBULIN
G
LARGE-SCALE-CHROMATOGRAPHIE
LARGE-SCALE-CHROMATOGRAPHIE
VON
PLASMA
IMMUNGLOBULINKLASSEN
UND
IGG-SUBKLASSENSPEZIFITAET
FUER
DIE
LARGE-SCALE
CHROMATOGRAPHIE
ABHAENGIGKEIT
DER
BINDUNGSEFFIZIENZ
VON
DER
PUMPGESCHWINDIGKEIT
REINIG
UN
G
VON
PARAOROTEINEN
ALS
MODELL
FUER
DIE
SEPARATION
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
CHARAKTERISIERUNG
DER
VERWENDETEN
PARAPROTEINAEMIE-SERUMPROBEN
BINDUNGSVERHALTEN
DER
PARAPROTEINE
GEGENUEBER
DER
AFFINITAETSMEMBRAN
BESTIMMUNG
DER
MAXIMALKAPAZITAET
UND
DER
DISSOZIATIONSKONSTANTE
FUER
DIE
BINDUNG
EINES
IGG
1
-PARAPROTEINS
UNTERSUCHUNG
DER
SPEZIFITAET
DER
MEMBRAN
GEGENUEBER
TIERISCHEN
IMMUNGLOBULINEN
STABILITAET
DER
MEMBRAN
55
55
56
SS
58
60
61
62
62
63
65
66
62
EINFLUSS
DER
NUTZUNGSHAEUFIGKEIT
AUF
DIE
BINDUNGSKAPAZITAET
EINFLUSS
DER
DAMPFSTERILISATION
AUF
DIE
BINDUNGSKAPAZITAET
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
CHEMIKALIEN
AUF
DIE
BINDUNGSKAPAZITAET
67
68
68
DISKUSSION
70
3
4.1
SPEZIFITAET
DER
MEMBRANBINDUNG
IQ
4.2
PHVSIKOCHEMIE
DER
BINDUNG
VON
IMMUNGLOBULIN
G
AN
DIE
MEMBRAN
75
4.3
VERGLEICH
DER
BINDUNGSEIGENSCHAFTEN
VON
PROTEIN
A
MIT
DER
AFFINITAETSMEMBRAN
4.4
SEPARATION
VON
PARAOROTEINEN
ALS
MODELL
FUER
DIE
REINIGUNG
HUMANER
ZUSAMMENFASSUNG
IS
IS
12
4 |
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