Chimärisierung der monoklonalen Antikörper BER-H2 (ANTI-CD30) und TÜK3 (ANTI-CD34):
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1998
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II
INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.V
1.
EINLEITUNG
.
01
1.1.
HUMORALE
IMMUNITAET
.
01
1.2.
STRUKTUR
DER
IMMUNGLOBULINE
.
01
1.3.
STRUKTUR
VON
ANTIKOERPERGENEN
UND
ENTSTEHUNG
DER
ANTIKOERPER-DIVERSITAET
.
02
1.4.
IMMUNGLOBULIN-KLASSEN
.
05
1.5.
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
.
06
1.5.1.
DIAGNOSTISCHE
UND
THERAPEUTISCHE
ANWENDUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER.
.
07
1.5.2.
UMSTRUKTURIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
.
08
1.5.2.1.
CHIMAERISIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
.
10
1.5.2.2.
"HUMANISIERUNG"
VON
ANTIKOERPERN
UND
GEZIELTE
MUTAGENISIERUNG
.
11
1.5.2.3.
EXPRESSION
VON
ANTIKOERPERFRAGMENTEN
IN
E.
COLI
.
11
1.5.2.4.
HUMANE
ANTIKOERPER
.
13
1.5.3.
EFFEKTORFUNKTIONEN
MONOKLONALER
UND
REKOMBINANTER
ANTIKOERPER
.
14
1.5.3.1.
ANTIKOERPER-VERMITTELTE
ZELLULAERE
TOXIZITAET
UND
KOMPLEMENTAKTIVIERUNG
.
14
1.5.3.2.
VERMITTLUNG
NATUERLICHER
EFFEKTORFUNKTIONEN
DURCH
CHIMAERISIERUNG
ODER
HU
MANISIERUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
.
15
1.5.3.3.
BISPEZIFISCHE
ANTIKOERPER
.
16
1.5.3.4.
IMMUNOTOXINE
.
17
1.6.
CD30
UND
BER-H2
.
18
1.7.
CD34UNDTUEK3
.
21
1.8.
ZIEL
DER
ARBEIT
.
21
2.
MATERIAL
.
23
2.1
ZELLINIEN
.
23
2.2.
BAKTERIENSTAEMME
.
23
2.3.
PLASMIDE
.
23
2.3.1.
VERWENDETE VEKTOREN
ZUR
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
.
23
2
3.2.
HYBRIDVEKTOREN
.
25
2.4
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
.
26
2.4.1
CDNA-SYNTHESE
.
26
2.4.2.
AMPLIFIKATION
GENOMISCHER
DNA
.
27
2.4.3.
SEQUENZIERUNGS-OLIGONUKLEOTIDE
.
27
2.5.
ENZYME
.
27
2.6.
CHEMIKALIEN
UND
ANDERE
MATERIALIEN
.
27
2.6.1
LOESUNGEN
.
28
2.7.
NAEHRMEDIEN
.
33
III
2.7.1.
KULTURMEDIEN
FUER
EUKARYOTISCHE
ZELLEN
.
33
2.7.2.
KULTURMEDIEN
FUER
BAKTERIEN
.
33
2.8.
GERAETE
.
34
3.
METHODEN
.
35
3.1.
KULTIVIERUNG
VON
MYELOMHYBRIDZELLEN
.
35
3
1.1.
ANZUCHT
DER
ZELLEN
.
35
3.1.2.
ERNTEN
DER
ZELLEN
.
35
3.2.
NUKLEINSAEUREPRAEPARATION
.
35
3.2.0.1.
ETHANOL-FAELLUNG
.
35
3.2.O.2.
PIC-EXTRAKTION
.
36
3.2.1.
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREFTAKTIONEN
.
36
3.2.2
PLASMIDPRAEPARATION
AUS
E.COLI
.
37
3.2.2.I.
MINI-PRAEPARATION
.
37
3.2.2.2.
MIDI-PRAEPARATION
.
37
3.3.
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
38
3.3.1.
AGAROSEGELE
.
38
3.3.1.1.
ANALYTISCHE
RNA-GELELEKTROPHORESE
.
38
3.3.1.2.
ANALYTISCHE
DNA-GELELEKTROPHORESE
.
39
3.3.1.3.
PRAEPARATIVE
GELE
UND
DNA-REISOLIERUNG
.
39
3.3.2.
POLYACRYLAMID-GELE
.
40
3.3.2.1.
ANALYTISCHE
GELE
.
40
3.3
2.2.
PRAEPARATIVE
GELE
UND
DNA-REISOLIERUNG
.
40
3.3.2.3.
CDNA-SYNTHESE-GELE
.
41
3.3.2.4.
SEQUENZIERGELE
.
42
3
4.
CDNA-SYNTHESE
.
43
3.5.
AMPLIFIKATION
VON
DNA
.
43
3.5.1.
TERMINALE
DESOXYNUKLEOTIDYLTRANSFERASE-REAKTION
.
43
3.5.2.
POLYMERASE-KETTEN-REAKTION
(PCR)
.
44
3
5.2.1.
ANKER-PCR
.
44
3
5.2
2.
PCR
MIT
GENOMISCHER
DNA
.
45
3
6
KLONIERUNG
.
46
3
6.1
PLASMID-AUFBEREITUNG
.
46
3.6.2.
INSERTIONS-DNA-AUFBEREITUNG
.
46
3.6
3.
LIGATION
.
46
3
6.4.
TRANSFORMATION
.
47
3.6
4.1.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.COLI-BAKTERIEN
.
47
3.64.2.
TRANSFORMATION
.
47
3
7
HYBRIDISIERUNG
.
47
IV
3.7.1.
"NORTHERN
BLOTTING"
.
48
3.7.1.1.
RNA-TRANSFER
.
48
3.7.1.2.
HERSTELLUNG
DER
HYBRIDISIERUNGSSONDE
.
48
3.7.1
3
HYBRIDISIERUNG
NACH
CHURCH
.
49
3.7.2.
"SOUTHERN
BLOTTING"
.
50
3.7.3.
KOLONIEHYBRIDISIERUNG
MIT
NITROZELLULOSEFIITEM
.
50
3.8.
SEQUENZIERUNGEN
.
50
3.8.1.
DIE
DIDESOXYMETHODE
NACH
SANGER
.
51
3.8.2.
PCR-SEQUENZIERUNG
MIT
32
P-ENDMARKIERTEN
PRIMERN
("CYCLE
SEQUENCING")
.
52
3.9.
STABILE
PLASMID-TRANSFEKTION
IN
MYELOMHYBRID-ZELLEN
.
53
3.10.
ELISA
("ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
1
')
.
54
3
11.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
54
4.
ERGEBNISSE
.
56
4.1.
ANZUCHT
DER
MYELOMHYBRIDZELLEN
.
56
4.2.
CDNA-SYNTHESE
.
56
4.3.
CDNA-AMPLIFIKATION
UND
SUBKLONIERUNG
.
58
4.4.
SEQUENZIERUNG
DER
CDNA-PCR-PRODUKTE
.
61
4.5.
AMPLIFIKATION
UND
KLONIERUNG
FUNKTIONELL
REARRANGIERTER
GENOMISCHER
V(D)J-GENSEGMENTE
.
61
4.6.
UMKLONIERUNG
DER
L
BZW.
H-KETTEN-DNA
IN
EXPRESSIONSVEKTOREN
.
71
4.7.
TRANSFEKTION
UND
EXPRESSION
DER
CHIMAERISIERTEN
ANTIKOERPER
.
72
5.
DISKUSSION
.
76
5.1.
CHIMAERISIERTE
ANTIKOERPER
.
76
5.1.1.
STRATEGIEN
ZUR
KONSTRUKTION
UND
EXPRESSION
CHIMAERER
ANTIKOERPER
.
76
5.1.2.
ISOLIERUNG
VON
V(D)J-GENEN
MIT
HILFE
DER
PCR
.
76
5.1.3.
EXPRESSION
DER
CHIMAERISIERTEN
ANTIKOERPER
BER-H2
UND
TUEK3
.
78
5.2.
SEQUENZANALYSEN
.
79
5.2.1.
TUEK3K-KETTE
.
80
5.2.2.
TUEK3Y-KETTE
.
83
5.2.3
BER-H2K-KETTE
.
83
5.2.4
BER-H2Y-KETTE
.
83
5.3.
AUSBLICK
.
83
6.
ZUSAMMENFASSUNG
.
86
7.
LITERATURVERZEICHNIS
.
88
8.
ANHANG
.
100 |
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