Hemmwirkung des menschlichen MxA-Proteins auf Bunyamwera- und LaCrosse-Virus:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Beschreibung: | Freiburg (Breisgau), Univ., Diss., 1998 |
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INHALTSANGABE
INHALTSANGABE:
1. EINLEITUNG J
1.1. BUNYAVIREN
1
1.1.1. BUNYAMWERA VIRUS
1
1.1.2. LACROSSE-VIRUS 2
1.1.3. KLINIK DER BUNYAVIRIDAE 2
1.2. INTERFERONE
3
1.3. MX-PROTEINE UND IHRE ANTIVIRALE WIRKUNG 4
2. ZIEL DER ARBEIT 7
3. MATERIAL 9
3.1. CHEMIKALIEN
9
3.2. SONSTIGE MATERIALIEN 10
3.3. KIT SYSTEME 10
3.4. ZELLKULTURMATERIAL 10
3.5. EUKARYOTISCHE ZELLEN
11
3.6. VIREN
11
3.7. PLASMIDE 12
3.8. BUNV-HYBRIDISIERUNGS-SONDEN
13
3.9. ANTIKOERPER 14
4. METHODEN 15
4.1. ZELLKULTURARBEITEN 15
4.1.1. ZELLKULTIVIERUNG 15
4.1.2. ANLEGEN EINES VIRUSSTOCKS 15
4.1.3. VIRUSVERMEHRUNG IN DER GESAMTKULTUR ("VIRUS YIELD") 15
4.1.4. QUANTITATIVE VIROLOGISCHE METHODEN 16
TCID50-BESTIMMUNG
PLAQUEESSAY
4.1.5. PICKEN EINES VIRUSPLAQUES 17
4.1.6. INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ 17
4.2. PROTEINTECHNIKEN 18
4.2.1. AUFARBEITEN DER ZELLEN FUER DIE WESTEMBLOTANALYSE 18
4.2.2. PROTEINBESTIMMUNG NACH LOWRY 18
4.2.3. DENATURIERENDE GEL-ELEKTROPHORESE 19
4.2.4. WESTEMBLOT-VERFAHREN 20
4.3. RNA-METHODEN 20
4.3.1. ISOLIERUNG DER RNA 20
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSANGABE
4.
3
.
2
. KI\A-ANALYSE DURCH NORTHERN BLOT ~JY
4.4. "LYSATE RIBONUCLEASE PROTECTION ASSAY" 24
4.5. DNA-METHODEN
4.5.1. RESTRIKTIONSVERDAU
4.
5
.
2
. AGAROSE-GEL-ELEKTROPHORESE
26
4.5.3. GENE-CLEAN-METHODE
97
4.5.4. AUFFUELLEN VON 5'-UEBERSTEHENDEN DNA-ENDEN 27
4.
5
.
5
. PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION 28
4.5.6. ETHANOLFAELLUNG
28
4
.
5
.
7
. LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN 28
4.5.8. TRANSFORMATION
29
4.5.9. MINIPRAEPARATION VON PLASMID-DNA 30
4.5.10. MAXIPRAEPARATION VON PLASMID-DNA
30
4.5.11. SEQUENZIERUNG VON DNA NACH SAENGER
31
5. ERGEBNISSE
33
5.
1
. CHARAKTERISIERUNG DER MXA-EXPRIMIERENDEN VERO-ZELLEN
33
5.1.1. ANWESENHEIT DES MXA-PROTEINS IN
VA9- UND VA12-ZELLEN
33
5.1.2. FUNKTIONALITAET DES MXA-PROTEINS
34
5.2. HEMMT MXA DIE REPLIKATION DES BUNYAMWERA VIRUS?
35
5.2.1. RNA-ANALYSEN
35
5.2.2. PROTEINEXPRESSION
37
5.2.3. MENGE INFEKTIOESER VIRUSPARTIKEL
40
5.3. MECHANISMUS DER MXA-WIRKUNG
45
5.3.
1
. UNTERSUCHUNG DER PRIMAERTRANSKRIPTION
46
5.3.2. UNTERSUCHUNG DER INITIATION BZW. DER ELONGATION DER
TRANSKIPTION
47
6. DISKUSSION
51
6.1. MOLEKULARER WIRKUNGSMECHANISMUS VON MXA
53
6.1.1. MXA-BEEINFLUSSTE REPLIKATIONSSCHRITTE
53
6.1.2. LACV WIRD DURCH MXA GEHEMMT
53
6.1.3. BUNV WIRD DURCH MXA GEHEMMT
54
6.2. VIRUS- UND ZELLSPEZIFITAET DES MX-PROTEINS
56
7. ZUSAMMENFASSUNG
59
8
. LITERATURVERZEICHNIS
61
9. DANKSAGUNG
67
10. LEBENSLAUF
69 |
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