Genetische und molekulare Analyse des AtPIN2-Gens aus Arabidopsis thaliana L.:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Köln, Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | VIII, 183 S. Ill., graph. Darst. |
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| adam_text | 0 GENETISCHE UND MOLEKULARE ANALYSE DES/UP/IVZ-GENS AUS ARABIDOPSIS
THALIANA L. INAUGURAL-DISSERTATION ZUR ERLANGUNG DES DOKTORGRADES DER
MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET DER UNIVERSITAET ZU KOELN
VORGELEGT VON ANDREAS MUELLER AUS KOELN KOELN 1997 INHALTSVERZEICHNIS
ABKURZUNGSVERZEICHNIS 1 1.1 1.2 1.3 1.3.1 1.3.2 1.3.3 1.3.3.1 1.4 1.5 2
2.1 2. 2. 2. 2. ES 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. 2. ES 2. ES 2. .1 1.2 1.3 1.4
.5 1.6 1.7 .8 1.9 1.10 .11 1.12 .13 1.14 .14.1 .14.2 1.14.3 2.1.14.4 2.
1.15 EINLEITUNG PHYTOHORMONE ALS KORRELATIONSFAKTOREN AUXIN
AUXINTRANSPORT DER LATERALE AUXINTRANSPORT DER NICHT-POLARE
AUXINTRANSPORT DER POLARE AXINTRANSPORT MOLEKULARE GRUNDLAGE DES POLAREN
TRANSPORTS STRATEGIE ZUR ANALYSE DES POLAREN AUXINTRANSPORTS ZIELSETZUNG
DER ARBEIT MATERIAL UND METHODEN MATERIAL PFLANZENMATERIAL BAKTERIEN
BAKTERIOPHAGEN PLASMID-VEKTOREN NUKLEINSAEURE-BAENKE AUS ARABIDOPSIS
THALIANA (PHAGENBAENKE) YAC-BAENKE ENZYME SYNTHETISCHE OLIGONUKLEOTIDE
CHEMIKALIEN WEITERE MATERIALIEN SAEULEN UND SAEULENMATERIAL GERAETE
COMPUTERPROGRAMME KULTURMEDIEN PFLANZENMEDIEN PHAGENMEDIEN
BAKTERIENMEDIEN HEFEMEDIEN ANTIBIOTIKA, HORMONE UND ANDERE STAMMLOESUNGEN
VI 1 2 3 5 8 8 9 11 16 20 21 21 21 21 22 22 22 22 22 23 25 27 28 28 30
30 30 31 31 32 33 INHALTSVERZEICHNIS 2.2 METHODEN 34 2.3 METHODEN ZUR
KULTIVIERUNG UND AUFARBEITUNG VON PFLANZEN 3 4 2.3.1
OBERFLAECHENSTERUEISIERUNG VON SAMEN 34 2.3.2 PFLANZENANZUCHT UND
KULTIVIERUNG VON ARABIDOPSIS THALIANA 34 2.3.3 ANZUCHT VON WURZELN IN
FLUESSIGKULTUR 34 2.3.4 ANZUCHT UND KULTIVIERUNG EINER SUSPENSIONSKULTUR
34 2.3.5 PRAEPARATION VON MIKROSOMEN UND PLASMAMEMBRANEN VON ARABIDOPSIS
THALIANA 35 (2-PHASEN-SYSTEM) 2.4 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN 36 2.4.1
DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN AUS PFLANZEN 36 2.4.1.1
DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN AUS PFLANZEN, CTAB-METHODE 36 2.4.1.2
DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN AUS PFLANZEN (NACH DELLAPORTAE/A/., 1983) 36
2.4.1.3 DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN AUS PFLANZEN FIIRPCR 37 2.4.2
DNA-PRAEPARATIONSMETHODEN AUS BAKTERIEN 37 2.4.2.1 ISOLIERUNG VON
PLASMID-DNA AUS BAKTERIEN NACH *BOILING TRITON 37 2.4.2.2 ISOLIERUNG
VON PLASMID-DNA MIT DEM QIAGEN-KIT (MINI-PRAEPARATION) 37 2.4.2.3
ISOLIERUNG VON PLASMID-DNA FUER DIE SEQUENZIERUNG 38 2.4.3 PRAEPARATION
VON PHAGEN-DNA 38 2.4.3.1 DNA-ISOLIERUNG AUS X-PHAGEN DURCH DIE
*PLATTENLYSE 38 2.4.3.2 DNA-ISOLIERUNG DURCH *FLUESSIGLYSE 39 2.4.3.2.1
HERSTELLUNG EINES PHAGEN-KLEINLYSATS 39 2.4.3.2.2 ISOLIERUNG VON DNA AUS
LAMBDA (MINI-PRAEPARATION) 39 2.4.3.2.3 ISOLIERUNG VON PHAGEN-DNA
(GROSSE-PRAEPARATION) 40 2.4.3.2.4 ISOLIERUNG VON LAMBDA-DNA MIT DEM
QIAGEN-KIT (MIDI-PRAEPARATION) 41 2.4.4 ISOLIERUNG VON HEFE-DNA 41 2.4.5
RNA-ISOLIERUNG AUS ARABIDOPSIS THALIANA 42 2.4.6 ISOLIERUNG VON
GESAMT-RNA AUS SUSPENSIONSKULTUREN VON ARABIDOPSIS THALIANA 42 2.4.7
REINIGUNG UND FAELLUNG VON DNA 43 2.4.8 GELELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG
VON DNA UND RNA 43 2.4.8.1 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON DNA IN
AGAROSEGELEN 43 2.4.8.2 ELEKTROPHORETISCHE AUFTRENNUNG VON RNA 43 2.4.9
ELUTION VON DNA AUS AGAROSEGELEN 44 2.4.9.1 QIAEX AGAROSE GEL EXTRAKTION
44 2.4.9.2 FREEZE SQUEEZE 45 2.4.9.3 ELEKTROELUTION VON DNA AUS
AGAROSEGELEN 45 2.4.10 DETEKTION UND GROESSENBESTIMMUNG VON
NUKLEINSAEUREFRAGMENTEN 45 2.4.11 KONZENTRATIONSBESTIMMUNG VON
NUKLEINSAEUREN 45 2.4.11.1 DNA-LOESUNGEN 45 2.4.11.2 RNA-LOESUNGEN 45
2.4.12 TRANSFER VON DNA- UND RNA-FRAGMENTEN AUF MEMBRANEN 46 2.4.12.1
SOUTHERN-BLOT 46 2.4.12.2 MODIFIZIERTER TRANSFER VON DNA ( DOWNWARD
ALKALINE SOUTHEM-BLOT ) 46 2.4.12.3 TRANSFER VON RNA ( NORTHERN-BLOT )
46 2.4.12.4 *PLAQUE-BLOT VON NUKLEINSAEUREN 47 2.4.12.5
*KOLONIE-BLOT VONCO//-KLONEN 47 2.4.13 NACHWEIS VON
NUKLEINSAEUREFRAGMENTEN DURCH MARKIERTE SONDEN 48 2.4.13.1 RADIOAKTIVE
MARKIERUNG VON DNA: RANDOM-PRIME 48 2.4.13.2 SYNTHESE
DIGOXYGENIN-MARKIERTERRNA-SONDEN 48 II INHALTSVERZEICHNIS 2.4.13.3
2.4.13.4 2.4.13.5 2.4.13.6 2.4.13.7 2.5 2.5.1 2.5.2 2.5.3 2.5.4 2.5.5
2.5.6 2.6 2.6.1 2,6.2 2A3 2.6.4 2.7 2.8 2.9 2.10 2.10.1 2.10.2 2.10.2.1
2.10.2.2 2.10.3 2.10.4 2.10.5 2.10.6 2.10.7 2.10.8 2.10.8.1 2.10.8.1.1
2.10.8.1.2 2.10.8.2 2.10.8.3 2.10.9 2.10.10 2.10.11 2.10.11.1 2.HU1.2
2.10.12 2.10.13 AUFREINIGUNG DER RADIOAKTIV MARKIERTEN SONDE DURCH DAS
QIAQUICK PCR PURIFICATION KIT NACHWEIS FILTERGEBUNDENER
NUKLEINSAUREFRAGMENTE IN »7U-HYBRIDISIERUNG MIT GEWEBESCHNITTEN IN
/-HYBRIDISIERUNG MIT GANZEN KEIMLINGEN (*WHOLE-MOUNTS ) ENTFERNUNG
GEBUNDENER SONDEN-DNA VON NYLONFILTERN ENZYMATISCHE METHODEN
RESTRIKTIONSSPALTUNG VON DNA DEPHOSPHORYIIERUNG VON DNA AUFFIILLREAKTION
MIT DNA-POLYMERASE I (KLENOW-FRAGMENT) LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN PCR
AMPLUEIZIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN LIGATION VON PCR-PRODUKTEN
TRANSFORMATION VON BAKTERIEN HERSTELLUNG ELEKTROKOMPETENTERE CO/F-ZELLEN
ELEKTROTRANSFORMATION VON E COLI SELEKTION VON BAKTERIENKLONEN DURCH
A-KOMPLEMENTATION LAGERUNG UND VERMEHRUNG VON BAKTERIENKLONEN SYNTHESE
UND REINIGUNG VON OLIGONUKLEOTIDEN DNA-SEQUENZIERUNG 49 49 49 50 51 51
51 51 51 52 52 53 53 53 53 53 54 54 54 ISOLIERUNG EINER
EN-INSERTIONSMUTANTE DURCH *REVERSE GENETIC PCR SCREENING 54 ALLGEMEINE
METHODEN ZUR PROTEINANALYSE 55 BESTIMMUNG DER PROTEINKONZENTRATION 55
AUFTRENNUNG UND DETEKTION VON PROTEINEN IN SDS-POLYACRYLAMIDGELEN
(SDS-PAGE) 55 AUFTRENNUNG VON PROTEINEN IN SDS-POLYACRYLAMIDGELEN 55
COOMASSIE-FAERBUNG 56 TRANSFER VON PROTEINEN (WESTEM-NASS-BLOT) 56
TRANSFER VON PROTEINEN (HALBTROCKEN-WESTERN-BLOT) 56 PONCEAU-FAERBUNG 56
IMMUNFAERBUNG VON WESTERN-BLOTS MIT DEM PHOSPHATASE-SYSTEM 57
IMMUNFAERBUNG VON WESTERN-BLOTS MIT DEM PEROXIDASE-SYSTEM 57 HERSTELLUNG
UND AFFINITAETSREINIGUNG VON ANTI-PEPTID ANTIKOERPERN 58 PEPTIDSYNTHESE 58
PEPTIDAUSWAHL 58 PEPTIDSYNTHESE UND REINIGUNG 58 KOPPLUNG DES
GEREINIGTEN PEPTIDES AN KLH 59 REINIGUNG DER ANTIKOERPER 59 HETEROLOGE
EXPRESSION VON PIN2P2-PROTEIN IN K COLI 60 ANREICHERUNG VON
HIS-TAG-PROTEINEN DURCH NI 2+ -NTA 60 REINIGUNGUNG VON HIS-TAG-PROTEINEN
DURCH NI 2 *-NTA-SAEULE 61 REINIGUNGUNG DER HIS-TAG-PROTEINE 61 REINIGUNG
DER SAEULEN 61 AFFINITAETSREINIGUNG VON ANTI-PROTEIN ANTIKOERPERN 62
IMMUNISIERUNG VON KANINCHEN 62 M INHALTSVERZEICHNIS 2.10.14
IMMUNDETEKTION VON PROTEINEN IN GEWEBESCHNITTEN 2.10.14.1 FIXIERUNG,
EINBETTUNG UND SCHNEIDEN VON GEWEBESTUECKEN 2.10.14.2 NACHWEIS VON
PROTEINEN IN GEWEBESTUECKEN 2.10.15 IMMUNODETEKTION VON PROTEINEN IN
ARABIDOPSIS THALIANA KEIMLINGEN CWHOLEMOUNTS ) 62 62 63 64 3 ERGEBNISSE
65 3.1 IDENTIFIZIERUNG UND ANALYSE DER ATPIN2-CDNA. 65 3.1.1 ISOLIERUNG
DER ATPIN2-CJYTIA MIT HILFE VON ATPINL- UND EST-GENSEQUENZEN 65 3.1.2
ISOLIERUNG DES 5 -ENDES DER ATPIN2-CDNA 68 3.2 ANALYSEN ZUR
ATPIN2-PROTEINSTRUKTUR 75 3.2.1 ANALYSEN DER ATPIN2-AMINOSAEURENSEQUENZ
75 3.2.2 ANALYSEN ZUR ATPIN2-TOPOLOGIE 76 3.2.3 MOTIVSUCHE IN DER
ATPIN2-PROTEINSEQUENZ 79 3.3 VERGLEICH DER AMINOSAEURENSEQUENZEN DER
PIN-PROTEINE 79 3.3.1 VERGLEICH DER PROTEINE ATPINL UND ATPIN2 82 3.3.2
VERGLEICHE ZWISCHEN PIN-PROTEINEN AUS ARABIDOPSIS THALIANA UND ORYZA
SATIVA 82 3.4 ISOLIERUNG UND CHARAKTERISIERUNG DES ATPIN2-GENS 8 3 3.4.1
ISOLIERUNG DES ATPIW2-GENS 83 3.4.2 ANALYSEN ZUR GENOMISCHEN
ORGANISATION DES ATPIN2-GENS 86 3.4.3 DER PROMOTOR DES ATPIN2-GENS 88
3.4.3.1 ANALYSE DER PROMOTORSEQUENZ 90 3.4.4 KARTIERUNG DES ATPIN2-GENS
IM GENOM VON ARABIDOPSIS THALIANA 92 3.5 EXPRESSIONSANALYSE DES
ATPIN2-GENS 94 3.5.1 NORTHERN-BLOT-ANALYSEN 94 3.5.2 LOKALISATION DER
ATPIN2-MKTIA IM GEWEBE DURCH IN YA-HYBRIDISIERUNG 98 3.5.2.1
HERSTELLUNG DER/L/P/JV2-SPEZIFISCHEN SONDE 98 3.5.2.2 NACHWEIS DER
ATPIN2-EXPRESSION DURCH *WHOLE MOUNT - IN IVVW-HYBRIDISIERUNG 99 3.6
ISOLIERUNG EINER /J(P//I2-INSERTIONSMUTANTE 100 3.6.1 NUTZUNG DER
*REVERSEN GENETIK ZUR ISOLIERUNG EINER ATPIN2-MUTANTE 101 3.6.2
ISOLIERUNG DER I4#WI2::N5245-INSERTIONSMUTANTE 102 3.6.2.1 UEBERPRUEFUNG
DER PRIMERQUALITAET 102 3.6.2.2 ISOLIERUNG DER
^(P/N2::W32 /5-INSERTIONSMUTANTE 104 3.6.2.3 CHARAKTERISIERUNG DER
^(P/2::W52-/5-INSERTIONSMUTANTE 105 3.6.2.3.1 LOKALISATION DER
EN-INSERTION 105 3.6.2.3.2 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER
ATPIN2::EN3245-MUTANTE 107 3.6.3 ISOLIERUNG DER
I4^P//I2:: J70Y-INSERTIONSMUTANTE 109 3.6.3.1 UEBERPRUEFUNG DER
PRIMERQUALITAET 110 3.6.3.2 UNTERSUCHUNGEN ZUR TRANSPOSONMOBILITAET 110
3.6.3.3 ISOLIERUNG DER ^(PI2;: I70/-INSERTIONSMUTANTE 111 3.6.3.4
CHARAKTERISIERUNG DER ^(P/2:: I70Y-INSERTIONSMUTANTE 113 3.6.3.4.1
LOKALISATION DER EN-INSERTION BEI DER/4(PW2.:/I70/-MUTANTE 113
3.6.3.4.2 PHAENOTYPISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ATPIN2::EN701-LA AAN S 1
13 IV INHALTSVERZEICHNIS 3.7 LOKALISIERUNG DES ATPIN2-PROTEINS 120 3.7.1
AUSWAHL DER ATPIN2-PROTEINSEQUENZEN ZUR ANTIKOERPERHERSTELLUNG 120 3.7.2
HERSTELLUNG ATPIN2-SPEZIFISCHER ANTI-PEPTID ANTIKOERPER 121 3.7.3
HERSTELLUNG DER POLYKLONALEN ANTI-ATPIN2 ANTIKOERPER 123 3.7.3.1
HERSTELLUNG DES HETEROLOG EXPRIMIERTEN FUSIONSPROTEINS 123 3.7.3.1.1
HETEROLOGE/W2P/-EXPRESSION IM PQE- VEKTOR 123 3.7.3.1.2
HETEROLOGEPM2P2-EXPRESSION IM VEKTOR PT7H6(GS)2 124 3.7.3.2 AUFREINIGUNG
DES HETEROLOG EXPRIMIERTENPIN2P2-PROTEINS 126 3.7.4 IMMUNLOKALISATION
DES ATPIN2-PROTEINS 128 3.7.4.1 CHARAKTERISIERUNG DER ANTI-PEPTID
ANTIKOERPER 129 3.7.4.2 CHARAKTERISIERUNG DER POLYKLONALEN ANTI-PIN2P2
ANTIKOERPER 132 3.7.4.3 IMMUNDETEKTION DES ATPIN2-PROTEINS DURCH
WESTERN-BLOT-ANALYSEN 134 3.7.4.4 ZELLULAERE LOKALISATION DES
ATPIN2-PROTEINS 136 3.7.4.4.1 NACHWEIS DES ATPIN2-PROTEINS IM STENGEL
VON ARABIDOPSIS THALIANA 136 3.7.4.4.2 NACHWEIS DES ATPIN2-PROTEINS IN
DER WURZEL VON ARABIDOPSIS THALIANA 140 4 DISKUSSION 4.1
DAS/4F/ /JV.2-GEN 4.2 DAS ATPIN2-PROTEIN 4.3 DIE ATPIN2::EN
70/-INSERTIONSMUTANTE 4.4 MODELL EINER ATPIN2-FUNKTION 144 145 151 158
161 PERSPEKTIVEN 166 ZUSAM MENFASSUNG 168 LITERATURVERZEICHNIS 170
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| spelling | Müller, Andreas 1968- Verfasser (DE-588)120310201 aut Genetische und molekulare Analyse des AtPIN2-Gens aus Arabidopsis thaliana L. vorgelegt von Andreas Müller 1997 VIII, 183 S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Köln, Univ., Diss., 1998 Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 gnd rswk-swf Genklonierung (DE-588)4123275-6 gnd rswk-swf Auxine (DE-588)4143728-7 gnd rswk-swf Stofftransport Biologie (DE-588)4443397-9 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Ackerschmalwand (DE-588)4141299-0 s Auxine (DE-588)4143728-7 s Stofftransport Biologie (DE-588)4443397-9 s Genklonierung (DE-588)4123275-6 s DE-604 GBV Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008193395&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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