Charakterisierung von beta-Untereinheiten humaner Kaliumkanäle:
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1998
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
.YY.
.V
1.
EINLEITUNG.
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
YY
.5
2.0.1
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
.
YY.YY
-
YYYYYY.YY.5
2.0.2
VEKTOREN
.
YY
.
YYYY.14
2.0.3
ZELLINIEN
UND
BAKTERIENSTAEMME.
._
14
2.0.4
CDNA
UND
GENOMISCHE
BIBLIOTHEK.
.
.14
2.1
DNA-TECHNIKEN.
.
15
2.1.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
.
15
2.1.2
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
BAKTERIEN.
_
.
15
2.1.3
DNA-ISOLIERUNG.
.
YY.YY.YY.15
2.1.3.1
PLASMID-ISOLIERUNG
AUS
2
ML-KULTUREN
.
YY.YY15
2.1.3.2
PLASMID-ISOLIERUNG
AUS
50
ML-KULTUREN
.
.16
2.1.3.3
ISOLIERUNG
VON
BAC-DNA
.
YYYY.16
2.1.3.4
ISOLIERUNG
VON
PAC-DNA
.
-
.
YY.17
2.1.3.5
ISOLIERUNG
VON
X-PHAGEN-DNA.
.
-
-
17
2.1.4
POLYMERASE-KETTENREAKTION
.
YY
.
18
2.1.5
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
.
-
YYYY.18
2.1.6
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
.
.
.19
2.1.7
PHOSPHORYLIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN.
.
-
-
.
-
.19
2.1.8
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN.
.
.
-
.
-
19
I
NHALTSVERZEICHNIS
2.1.9
AUFFULLEN
UEBERHAENGENDER
5
'-ENDEN
.
19
2.1.10
GELELEKTOPHORESE
VON
DNA
.
20
2.1.10.1
ELEKTOPHORESE
VON
DNA-FRAGMENTEN
BIS
15
KB
.
20
2.1.10.2
PULS-FIELD
GELEKTROPHORESE
(PFGE)
GROSSER
DNA-FRAGMENTE
.
20
2.1.11
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
.
20
2.1.12
MIKRODIALYSE
VON
DNA
.
21
2.1.13
DURCHMUSTERN
VON
X-PHAGEN-BIBLIOTHEKEN
.
21
2.1.13.1
KOMPETENTE
ZELLEN
FUER
DIE
PHAGENINFEKTION
.
21
2.1.13.2
AUSPLATTIEREN
VON
X-PHAGEN
UND
HERSTELLUNG
VON
FILTERABZUEGEN
.
21
2.1.13.3
ISOLIERUNG
VON
POSITIVEN
X-PHAGEN
.
21
2.1.14
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
22
2.1.14.1
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
MIT
HILFE
VON
NONANUKLEOTIDEN
.
22
2.1.14.2
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
PER
PCR.
.
22
2.1.14.3
DNA-SEQUENZIERUNG.
.
23
ZI.
15
SOUTHERN
BLOT
ANALYSEN
.
24
2.1.15.1
SOUTHERN-BLOT-ANALYSE
NACH
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
.
24
2.1.15.2
DOT-BLOT
.
24
2.1.16
FISH-ANALYSE
AN
HUMANEN
METAPHASECHROMOSOMEN
.
25
2.1.16.1
AUFARBEITUNG
VON
SYNCHRONISIERTEN
GESAMTBLUT-KULTUREN
.
25
2.1.16.2
BIOTIN-MARKIERUNG
VON
IN
SITU
HYBTIDISIERUNGSPROBEN
.
25
2.1.16.3
HYBRIDISIERUNG
AN
METAPHASE-CHROMOSOMEN
.
25
2.2
RNA-TECHNIKEN
.
.26
22.1
RNA-ISOLATION
AUS
GEWEBE
.
26
2.2.2
RNA-HERSTELLUNG
DURCH
IN
TRO-TRANSKRIPTION
.
27
2.2.3
GELELEKTROPHORESE
VON
RNA
.
27
2.2.4
NORTHEM-BLOT-ANALYSE.
.
28
22.5
IN-SITN
HYBRIDISIERUNG.
.
28
22.5.1
ANFERTIGEN
VON
GEWEBESCHNITTEN
.
28
2.25.2
HERSTELLUNG
VON
CRNA-SONDEN
.
28
2.25.3
HYBRIDISIERUNG
VON
CRNA-SONDEN
AN
GEHIMSCHNITTE
.
29
2.3
TECHNIKENAUFPROTEIN-EBENE
.
29
23.1
MEMBRANPRAEPARATION
AUS
GEWEBE
.
29
I
NHALTSVERZEICHNIS
2.3.2
DISKONTINUIERLICHE
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
.
YY
.
-
.30
2.3.3
FAERBUNG
VON
POLYACRYLAMIDGELEN
.
-
.
30
2.3.4
WESTERN-BLOT-ANALYSE
.
.
31
2.3.5
SILBEMITRATFOERBUNG
NACH
WESTERN-BLOT
.
-
.31
2.3.6
WESTEM-BLOT-HYBRIDISIERUNG
UND
DETEKTIONSMETHODEN
_
_
._.31
2.4
COMPUTERGESTUETZTE
SEQUENZANALYSEN
.
_
.
32
3
ERGEBNISSE
.
33
3.1
KLONIERUNG
DER
HUMANEN
KVSSL.L-CDNA
.
.
-
33
3.2
GENOMISCHE
STRUKTUR
DES
HKVSSL-GENS
.
.33
3.3
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DES
HUMANEN
KVSSL-GENS
.
-
.42
3.3.1
PCR
ANALYSE
VON
HYBRID-ZELLINIEN-DNA.
.
.42
3.3.2
FISH-ANALYSE
AN
HUMANEN
METAPHASE
CHROMOSOMEN
.
.
-
.43
3.3.3
IDENTIFIZIERUNG
EINES
POLYMORPHEN
MARKERS
FUER
DAS
HKVSSL-GEN.
-
.44
3.4
TRANSKRIPTANALYSE
DES
HUMANEN
KVSSL-GENS
.
-
.
-
.45
3.5
FUNKTIONELLE
EXPRESSION
DER
HKVSSL.L
UND
HKVSSL.2-UNTEREINHEITEN
_
.46
3.6
KLONIERUNG
DER
HKVSS2.
1
-CDNA
.
47
3.7
GENOMISCHE
STRUKTUR
DES
HUMANEN
KVSS2-GENS
.
YY
.
-
49
3.8
TRANSKRIPTANALYSE
DES
HUMANEN
KVSS2-GENS
.
-
.
-
.
-
.52
3.9
KLONIERUNG
DER
HUMANEN
KVSS3.1-CDNA
.
56
3.10
GENOMISCHE
STRUKTUR
DES
HUMANEN
KVSS3-GENS.
-
.
.58
3.11
CHROMOSOMALE
LOKALISATION
DES
HKVSS3-GENS
.
-
.
-
58
3.11.1
PCR
AUF
SOMATISCHER
HYBRID-ZELLINIEN
DNA
.
-
.59
3.11.2
ELEKTRONISCHE
PCR.
.
-
_
YY60
3.12
TRANSKRIPTANALYSE
DES
HUMANEN
KVSS3-GENS
.
-
.62
3.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
AN
KVSSL.L
KNOCK-OUT
MAEUSEN.
-
62
3.1.1
NORTHERN
BLOT
ANALYSE.
.
-
.62
3.1.2
IN
SITU
HYBRIDISIERUNG.
.
.YY
.
-
63
3.1.3
WESTERN
BLOT
ANALYSE
.
-
_
-
65
I
NHALTSVERZEICHNIS
4
DISKUSSION
.
68
4.1
KLONIERUNG
VON
KVSS-UNTEREINHEITEN
DES
MENSCHEN
.
68
4.2
GENOMISCHE
ORGANISATION
DER
HKVSS-UNTEREINHEITEN
.
71
4.3
PHYSIOLOGISCHE
RELEVANZ
VON
KVSS-UNTEREINHEITEN
.
79
4.4
AUSBLICK
.
82
5
ZUSAMMENFASSUNG
.
83
6
LITERATURVERZEICHNIS
.
85
7
ANHANG
.
93
7.1
VERWENDETE
SONDEN
.
93
7.2
KLONIERUNGSSCHEMA
DER
ZUR
CRNA-SYNTHESE
EINGESETZTEN
KONSTRUKTE
.
94
7.3
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDE
.
94
7.4
NUKLEINSAEURESEQUENZ
DES
HKVSS3-GENS
.
97
7.5
VEROEFFENTLICHUNGEN
.
101
7.6
LEBENSLAUF.
.
102 |
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