Wachstumsverhalten und klonale Proliferation renaler Fibroblasten am Modell der Unilateralen Ureterligatur der Rattenniere:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITEN
1. EINLEITUNG 4
1.1. ALLGEMEINE GRUNDLAGEN ZUM BINDEGEWEBE 8
1.2. ANATOMIE DES NIERENINTERSTITIUM 9
1.3. NIERENSCHAEDIGUNGSMODELLE ZUR FIBROSEINDUKTION 10
1.4. EINSEITIGE CHRONISCHE NIERENSCHAEDIGUNG DURCH UNILATERALE
URETERLIGATUR 14
1.5. AUFGABENSTELLUNG 16
2. MATERIAL UND METHODEN 17
2.1. VERSUCHSTIERE UND TIERHALTUNG 17
2.1.1. NARKOSE 17
2.1.2. OPERATIONSDURCHFIIHRUNG 18
2.1.3. ORGAN-UND BLUTENTNAHME 19
2.2. BIOCHEMISCHE BESTIMMUNGSMETHODEN 20
2.2.1. PRAEPARATION DER NIERENFRAKTIONEN FUER DIE
FIBROSEPARAMETERBESTIMMUNG 20
2.2.2. BESTIMMUNG DER NIERENFUNKTIONSWERTE 21
2.2.3. BESTIMMUNG DER HYALURONSAEURE IM SERUM 21
2.2.4. BESTIMMUNG DER HYDROXYPROLINKONZENTRATION IM NIERENGEWEBE 21
2.2.5. BESTIMMUNG DER GLUKOSAMINOGLYKANKONZENTRATION IM NIERENGEWEBE 23
2.2.6. BESTIMMUNG DER KOLLAGENPEPTIDASEAKTIVITAET IM NIERENGEWEBE 24
2.2.7. BESTIMMUNG DER N-ACETYL-SS-D-GLYKOSAMINIDASEAKTIVITAET IM
NIERENGEWEBE 25
2.2.8. BESTIMMUNG DER GLUKOSAMIN-6-PHOPHAT-SYNTHETASEAKTIVITAET IM
NIERENGEWEBE 25
2.3. HISTOCHEMISCHE BEARBEITUNG 27
2.4. ZELLKULTURUNTERSUCHUNGEN 30
2.4.1. VERWENDETE MATERIALIEN 30
2.4.2. ZELLKULTUREN AUS NIERENEXPLANTATEN 32
2.4.3. GEWINNUNG VON NIERENZELLEN DURCH DESINTEGRATION MITTELS
KOLLAGENASE 33
2.4.3.1. PASSAGIEREN DER ZELLEN MIT TRYPSIN-EDTA 33
2.4.3.2. ERMITTLUNG DER ZELLZAHL UND DER VITALITAET DER ZELLEN 34
2.4.4. KULTIVIERUNG DER ZELLEN IN "DUENNEN MASSENKULTUREN" UND
"KLONKULTUREN" 34
2.4.4.1. DUENNE MASSENKULTUREN 35
2.4.4.2. KLONKULTUREN 35
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2A.4.3. ISOLATION VON FIBROBLASTENKLONEN 35
2.4.5. EINFLUSS VON KONDITIONIERTEN MEDIEN AUF DIE
PROLIFERATIONSGESCHWINDIGKEIT
VON NIERENZELLEN IN KULTUREN 36
2.4.6. FIXIEREN UND FAERBEN DER ZELLKULTUREN 37
2.4.7. AUSWERTUNG DER GEFAERBTEN ZELLKULTUREN 38
2.4.7.1. AUSWERTUNG DER GEFAERBTEN KLONKULTUREN 38
2.4.7.2. AUSWERTUNG DER GEFAERBTEN DUENNEN MASSENKULTUREN 38
2.5. STATISTISCHE METHODEN 39
3. ERGEBNISSE 40
3.1. BIOCHEMISCHE PARAMETER ZUR CHARAKTERISIERUNG DER INTERSTITIELLEN
FIBROSE IN DER RATTENNIERE 40
3.1.1. VERGLEICH DER ABSOLUTEN NIERENGEWICHTE NACH 5 UND 25 TAGEN 40
3.1.2. VERGLEICH DER RELATIVEN NIERENGEWICHTE NACH 5 UND 25 TAGEN 41
3.1.3. NIERENFUNKTIONSWERTE ( KREATININ, HARNSTOFF NATRIUM UND KALIUM )
42
3.1.4. HYALURONSAEURE IM SERUM 44
3.1.5. GLUKOSAMINOGLYKANE IM NIERENGEWEBE 45
3.1.6. GLUKOSAMIN-6-PHOSPHATSYNTHETASEAKTIVITAET IM NIERENGEWEBE 46
3.1.7. N-ACETYL-SS-GLUKOSAMINIDASEAKTIVITAET IM NIERENGEWEBE 47
3.1.8. HYDROXYPROLIN IM NIERENGEWEBE 48
3.1.9. KOLLAGENPEPTIDASEAKTIVITAET IM NIERENGEWEBE 49
3.2. HISTOLOGISCHE BEFUNDE 50
3.3. ZELLVERSUCHE 55
3.3.1. B EURTEILUNG DER PROLIFERATION IN DEN PRIMAERKULTUREN NACH
DESINTEGRATION 5 5
3.3.2. DURCHSCHNITTLICHE POPULATIONSVERDOPPLUNGSZEIT IN
FIBROBLASTENKULTUREN 56
3.3.3. EXPLANTATKULTUREN-ERMITTLUNG DER ZELLZAHLEN ZU VERSCHIEDENEN
ZEITPUNKTEN 5 7
3.3.4. VERGLEICH DER ZAHLENVERHAELTNISSE AUSGEWACHSENER ZELLEN AUS
LIGIERTEN UND
DEN KONTRALATERALEN NIEREN ZU VERSCHIEDENEN ZEITPUNKTEN 58
3.3.5. EINFLUSS VON KONDITIONIERTEN MEDIEN AUF DIE
PROLIFERATIONSGESCHWINDIGKEIT
VON NIERENZELLEN IN KULTUR 59
3.3.6. ANZAHL DER KLONE AUS ZELLEN VON LIGIERTEN UND KONTRALATERALEN
NIEREN 60
3.3.7. UNTERSCHEIDUNG DER MITOTISCHEN FIBROBLASTENDIFFERENZIERUNGSSTUFEN
DER RATTENNIERE 61
3.3.8. ERMITTLUNG DER KLONTYPENFREQUENZ 64
2
4. DISKUSSION 65
4.1. VERWENDETES TIERMODELL ZUR INDUKTION EINER TUBULOINTERSTITIELLEN
FIBROSE 65
4.2. BIOCHEMISCHE PARAMETER DES BINDEGEWEBSSTOFLWECHSELS DER NIERE 67
4.2.1. BESTANDTEILE UND ENZYME DER NICHTKOLLAGENEN KOMPONENTE DES
BINDEGEWEBES 67
4.2.2. BESTANDTEILE UND ENZYME DER KOLLAGENEN BINDEGEWEBSKOMPONENTE 68
4.3. HISTOLOGISCHE BEURTEILUNG 70
4.4. DIE ZELLVERSUCHE 71
4.4.1. ALLGEMEINE BETRACHTUNG ZU DEN DURCHGEFIIHRTEN VERSUCHEN 71
4.4.2. DAS PROLIFERATIONSVERHALTEN DER PRIMAERZELLEN 72
4.4.3. BETRACHTUNG DER DURCHSCHNITTLICHEN POPULATIONSVERDOPPLUNGSZEIT
IM VERGLEICH DER BEIDEN FIBROBLASTENISOLIERUNGSMETHODEN 74
4.4.4. EXPLANTATKULTUREN-ERMITLLUNG DER ZELLKULTURZAHLEN ZU
VERSCHIEDENEN
ZEITPUNKTEN DER KULTIVIERUNG 75
4.4.5. EINFLUSS VON KONDITIONIERTEN MEDIEN AUF DIE
PROLIFERATIONSGESCHWINDIGKEIT
VON NIERENZELLEN IN KULTUR 75
4.4.6. VERGLEICH DER KLONZAHLEN AUS ZELLEN VON LIGIERTEN UND
KONTRALATERALEN NIEREN 76
4.4.7. DIE MITOTISCHEN FIBROBLASTENDISERENZIERUNGSSTUFEN DER RATTENNIERE
UND IHRE KLONTYPENFREQUENZ 77
5. ZUSAMMENFASSUNG 79
6. VERZEICHNIS DER ABKUERZUNGEN 81
7. LITERATURVERZEICHNIS 82
3 |
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