Untersuchungen zur Funktion der Metalloprotease von Listeria monocytogenes:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Clausthal-Zellerfeld
Papierflieger
1998
|
| Ausgabe: | 1. Aufl. |
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | V, 130 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
EINLEITUNG
.
1
1.1
LISTERIEN
.
2
1.2
INFEKTIONSZYKLUS
UND
VIRULENZFAKTOREN
VON
LISTERIEN
.
4
1.3
DIE
METALLOPROTEASE
VON
LISTERIA
MONOCYTOGENES
.
7
1.4
ZIELSETZUNG
.
11
2
MATERIAL
UND
METHODEN
.
12
2.1
MATERIAL
.
12
2.1.1
GERAETE
.
12
2.1.2
CHEMIKALIEN
.
12
2.2
BAKTERIENTAEMME
.
13
2.2.1
LISTERIENSTAEMME
.
13
2.2.2
ESCHERICHIA
COLI
-STAEMME
.
14
2.3
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
14
2.3.1
VEKTOREN
.
14
2.3.2
OLIGONUKLEOTIDE
.
14
2.3.3
POLYMERASE
CHAIN
REACTION
(PCR)
.
15
2.3.4
GELELEKTROPHORETISCHE
REINIGUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
16
2.3.5
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
.
17
2.3.6
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
VEKTOR-DNA
.
17
2.3.7
PHENOLISIERUNG
.
18
2.3.8
LIGATION
.
18
2.3.9
PLASMIDPRAEPARATION
.
18
2.3.10
SEQUENZIERUNG
.
19
2.4.
LISTERIEN
.
20
2.4.1
KULTIVIERUNG
.
20
2.4.2
LAGERUNG
.
21
2.4.3
TRANSFORMATION
VON
LISTERIEN
MITTELS
ELEKTROPORATION
.
21
2.4.4
ERZEUGUNG
ISOGENER,
CHROMOSOMALER
DELETIONSMUTANTEN
.
22
2.4.5
KONZENTRIERUNG
VON
KULTURUEBERSTAENDEN
.
23
2.4.6
EXTRAKTION
VON
OBERFLAECHENPROTEINEN
.
23
2.5
ESCHERICHIA
COLI
.
24
2.5.1
KULTIVIERUNG,
LAGERUNG
.
24
2.5.2
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
.
24
2.5.3
HETEROLOGE
EXPRESSIONSSYSTEME
.
25
2.6
HERSTELLUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
.
28
2.6.1
IMMUNISIERUNG
DER
MAEUSE
.
28
2.6.2
GEWINNUNG
VON
PERITONEALMAKROPHAGEN
.
28
2.6.3
HERSTELLUNG
VON
HYBRIDOMEN
.
29
2.6.4
ENZYME
LINKED
IMMUNOABSORBENT
ASSAY
(ELISA)
.
30
2.6.5
SUBKLONIERUNG
.
30
2.6.6
SUBKLASSENTEST
.
31
2.6.7
AFFINITAETSREINIGUNG
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
(MAK)
.
31
2.7
HERSTELLUNG
POLYKLONALER
ANTIKOERPER
.
32
2.7.1
AFFINITAETREINIGUNG
VON
ANTIKOERPERN
UEBER
EINE
PROTEIN
BZW.
PEPTIDMATRIX
.
32
INHALTSVERZEICHNIS
II
2.7.2
HERSTELLUNG
SYNTHETISCHER
PEPTIDE
.
35
2.7.2.1
KOPPLUNG
EINES
FREIEN
PEPTIDS
AN OVALBUMIN
.
36
2.7.2.2
BINDUNGSTEST
(
"
OVERLAY
"
)
AN
IMMOBILISIERTEN
PEPTIDEN
.
36
2.8
ZELLKULTUREN
.
36
2.8.1
ZELLINIEN
.
36
2.8.2
HALTUNG
UND
PASSAGE
.
37
2.8.3
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
.
37
2.9
INFEKTIONEN
.
38
2.9.1
INFEKTION
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
MIT
LISTERIEN
.
38
2.9.2
"
PLAQUE
ASSAY
"
.
38
2.9.3
MAUSINFEKTION
.
39
2.10
ENZYMAKTIVITAETSTESTS
.
39
2.10.1
PROTEASEAKTIVITAETSMESSUNGEN
.
39
2.10.2
AKTIVITAETSTEST
DERPHOSPHATIDYLINOSITOL-SPEZIFISCHEN
PHOSPHOLIPASE
C
(PLCA)
.
40
2.10.3
AKTIVITAETSTEST
DER
PHOSPHATIDYLCHOLIN-SPEZIFISCHEN
PHOSPHOLIPASE
C
(PLCB)
.
41
2.10.4
AKTIVITAETSMESSUNG
VON
LISTERIOLYSIN
.42
2.11
CHROMATOGRAPHISCHE
UND
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
43
2.11.1
AMMONIUMSULFATFAELLUNG
.
43
2.11.2
HYDROXYLAPATITCHROMATOGRAPHIE
(HPT)
.
43
2.11.3
ANTIKOERPERAFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.44
2.11.4
GELFILTRATION
.45
2.11.5
PROTEINBESTIMMUNG
NACH
BRADFORD
.
46
2.11.6
SPOT-TEST
.46
2.11.7
SDS
-
POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE)
.48
2.11.8
PRAEPARATIVE
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
.
48
2.11.9
ELEKTROELUTION
.48
2.11.10
COOMASSIE-FAERBUNG
.
49
2.11.11
SILBERFAERBUNG
.
49
2.11.12
IMMUNOBLOT
.49
2.11.13
IMMUNFAERBUNG
UND
CHEMOLUMINESZENZ
.
50
2.11.14
VORBEREITUNG
VON
PROTEINEN
FUER
N-TERMINALE
AMINOSAEURE-SEQUENZIERUNGEN
.
51
2.12
MIKROSKOPISCHE
ARBEITEN
.
51
2.12.1
IMMUNFLUOERESZENZ
.
51
2.12.2
VIDEOMIKROSKOPIE
.
54
2.13
DOKUMENTATION
.
55
3
ERGEBNISSE
.
56
3.1
HERSTELLUNG
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
DIE
METALLOPROTEASE
.
56
3.1.1
HERSTELLUNG
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
DAS
SYNTHETISCHE
PEPITD
MPL-3
.
56
3.1.2
HERSTELLUNG
VON
ANTIKOERPERN
GEGEN
DIE
HETEROLG
IN
ESCHERICHIA
COLI
EXPRIMIERTE
METALLOPROTEASE
.
58
3.2
HERSTELLUNG
VON
ISOGEN
CHROMOSOMALEN
DELETIONSMUTANTEN
.
66
3.2.1
KOMPLEMENTIERTE
MUTANTEN
.66
INHALTSVERZEICHNIS
III
3.3
DETEKTION
DER
METALLOPROTEASE
BEI
IN
FLUESSIGKULTUR
GEZOGENEN
LISTERIEN
.
67
3.3.1
KREUZREAKTION
DER
ANTIKOERPER
GEGEN
THERMOLYSIN
VON
BACILLUS STEAROTHERMOPHILUS
MIT
DER
METALLOPROTEASE
VON
LISTERIA
MONOCYTOGENES
.
67
3.3.2
NACHWEIS
DER
METALLOPROTEASE
IN
L.MONOCYTOGENES
KULTUREN
.
69
3.3.3
VERGLEICH
VERSCHIEDENER
LISTERIASTAEMME
BEZUEGLICH
DER
METALLOPROTEASEBILDUNG
.
71
3.4
ANREICHERUNG
DER
METALLOPROTEASE
.
73
3.4.1
MEDIUM
.
74
3.4.2
KULTIVIERUNGSZEITREIHE
.
74
3.4.3
PROTEINPRAEZIPITATION
MIT
AMMONIUMSULFAT
.
75
3.4.4
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
77
3.4.4.1
AFFINITAETSREINIGUNG
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
77
3.4.4.2
HYDROXYLAPATITCHROMATOGRAPHIE
(HPT)
.
79
3.4.4.3 ANALYSE
DES
ZUSTANDES
DER
METALLOPROTEASE
IN
KULTURUEBERSTAENDEN
.
82
3.5
CHARAKTERISIERUNG
DER
METALLOPROTEASE
.
84
3.5.1
DURCHFUEHRUNG
VERSCHIEDENER
PROTEASEAKTIVITAETSTESTS
.
84
3.5.2
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DER
METALLOPROTEASE
AUF
DIE
VIRULENZFAKTOREN
PLCA,
PLCB
UND
HLY
VON
LISTERIA
MONOCYTOGENES
.
85
3.5.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
EINFLUSS
DER
METALLOPROTEASE
AUF
DIE
INFEKTION
VON
GEWEBEKULTURZELLEN
MIT
LISTERIEN
.
92
3.5.3.1
"
PLAQUE
ASSAY
"
.
93
3.5.3.2
IMMUNFLUORESZENZMIKROSKOPISCHE
UNTERSUCHUNGEN
L.MONOCYTOGENES
INFIZIERTER
ZELLEN
.
95
3.5.3.3
VIDEODOKUMENTATION
LISTERIEN
INFIZIERTED
ZELLEN
.
98
3.5.4
UNTERSUCHUNG
DES
INFEKTIONSVERHALTENS
VERSCHIEDENER
LISTERIENSTAEMME
IMTIERMODELL
.
102
4
DISKUSSION
.
105
5
AUSBLICK
.
114
6
ZUSAMMENFASSUNG
.
115
7
LITERATUR
.
117
8.
ANHANG
.
127 |
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| topic_facet | Listeria monocytogenes Metalloproteinasen Enzymaktivität Hochschulschrift |
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