Einfluß des Hepatitis-B-Virus X-Proteins auf Regulation und Funktion des Tumorsuppressorproteins p53:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
DAS
HEPATITIS-B-VIRUS
2
1.2.1
INDIREKTE
TRANSFORMATIONSMECHANISMEN
4
1.2.2
DIREKTE
TRANSFORMATIONSMECHANISMEN
4
1.3
HBX
UND
SEINE
ONKOGENE
POTENZ
7
1.4
DAS
TUMORSUPPRESSORPROTEIN
P53
8
1.4.1
STRUKTUR,
FUNKTION
UND
DYSFUNKTION
8
1.4.2
P53-INDUKTIONSFAKTOREN
14
1.4.3
VERAENDERUNGEN
VON
P53
IN
HEPATOZELLULAEREN
KARZINOMEN
15
2.
ZIEL
DER
ARBEIT
18
3.
MATERIAL
19
3.1
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
19
3.2
OLIGONUKLEOTIDE
19
3.3
PLASMIDE
19
3.3.1
PKSVIO
19
3.3.2
PKSVX
20
3.3.3
PKSVXL443
'
20
3.3.4
PKSVNEO
20
3.3.5
PRCCMV
20
3.4
ZELLINIEN
22
3.4.1
FMH202X5/XML
22
3.4.2
HEPG2
22
3.4.3
HUH7
23
3.5
BAKTERIENSTAMM
XLL-BLUE
ZUR
PLASMIDVERMEHRUNG
23
3.6
PUFFER
UND
STAMMLOESUNGEN
23
3.6.1
PUFFER
23
3.6.2
PLASMIDPRAEPARATIONSPUFFER
24
3.6.3
LOESUNGEN
ZUR
SDS-GELELEKTROPHORESE
25
3.6.4
PUFFER
UND
LOESUNGEN
ZUM
WESTERN
BLOT
26
3.6.5
BAKTERIENMEDIUM
27
3.6.6
ZELLKULTURMEDIUM
28
3.6.7
LOESUNGEN
ZUR
IMMUNFLUORESZENZ
29
3.7
ANTIKOERPER
29
3.8
MIKROSKOP
31
3.9
FILME,
BELICHTUNG
UND
ENTWICKLUNG
31
4.
METHODEN
32
4.1
ZELLKULTUR
32
4.1.1
KULTIVIERUNG
ANIMALER
ZELLEN
32
4.1.2
TRANSFEKTION
DURCH
ELEKTROPORATION
33
4.1.3
TRANSFEKTION
MITTELS
LIPOFECTAMINEYY
34
4.2
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
34
4.3
KLONIERUNG
35
4.3.1
DNS-ELUTION
AUS
AGAROSE
UND
AUFREINIGUNG
MIT
GENECLEAN*
35
4.3.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
5'-ENDEN
35
4.3.3
LIGATION
36
4.3.4
TRANSFORMATION
36
4.3.5
ANALYTISCHE
PLASMID-PRAEPARATION
36
4.3.6
PLASTNID-MAXIPRAEPARATION
37
4.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
KLONE
37
4.4.1
INHIBIERUNG
VON
RNASEN
IN
WAESSRIGEN
LOESUNGEN
37
4.4.2
RNS-EXTRAKTION
38
4.4.3
PHOTOMETRISCHE
BESTIMMUNG
DER
DNS-/RNS-KONZENTRATION
38
4.4.4
DNASE-BEHANDHING
DER
EXTRAHIERTEN
RNS
39
4.4.5
REVERSE
TRANSKRIPTION
39
4.4.6
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
(PCR)
40
4.5
IMMUNFLUORESZENZ
41
4.6
INDUKTION
VON
P53
DURCH
UV-BESTRAHLUNG
43
4.7
ZELLLYSE
ZUR
PROTEINGEWINNUNG
43
4.8
SDS-POLYACRYLAMIDELEKTROPHORESE
44
4.9
WESTERN
BLOT
44
4.10
ZELLAUFARBEITUNG
ZUR
BESTIMMUNG
DER
UEBERLEBENSRATEN
45
5.
ERGEBNISSE
46
5.1
KONSTRUKTION
DER
PLASMIDE
PRCCMVX/XM
46
5.2
STABILE
TRANSFEKTION
DER
ZELLINIEN
HEPG2
UND
HUH7
MIT
PRCCMVX/XM
SOWIE
MITPKSVX/XM
UND
PKSVNEO
48
5.3
CHARAKTERISIERUNG
ETABLIERTER
KLONE
49
5.3.1
NACHWEIS
INTRAZELLULAERER
HBX-RNS
DURCH
RT-PCR
49
5.3.2
NACHWEIS
VON
GEBILDETEM
HBX-PROTEIN
DURCH
IMMUNFLUORESZENZ
56
A)
HBX-PROTEINDETEKTION
IN
FMHX/XM
56
B)
HBX-PROTEINDETEKTION
IN
HEPG2X/XM
58
C)
HBX-PROTEINDETEKTION
IN
HUH7X/XM
59
5.4
IMMUNFLUORESZENZ
ZUR
DETEKTION
VON
P53
59
5.4.1
UNSPEZIFISCHE
FAERBUNG
59
5.4.2
KRITERIEN
ZUR
BESCHREIBUNG
DES
INTRAZELLULAEREN
VERTEILUNGSMUSTERS
VON
P53
61
5.4.3
INTRAZELLULAERES
VERTEILUNGSMUSTER
IN
FMHX5/XML
61
5.4.4
INTRAZELLULAERES
VERTEILUNGSMUSTER
IN
HEPG2X8/XM2
64
5.4.5
INTRAZELLULAERES
VERTEILUNGSMUSTER
IN
HUH7X
1
5/XM
1
65
5.5
QUALITATIVER
NACHWEIS
EINER
P53-INDUKTION
DURCH
UV-STRAHLEN
IN
HEPG2
MITTELS
IMMUNFLUORESZENZ
67
A)
UV-BESTRAHLUNG
VON
AAEX-TRANSFIZIERTEN
HEPG2-ZELLEN
68
B)
UV-BESTRAHLUNG
VON
AIXM-TRANSFIZIERTEN
HEPG2-ZELLEN
68
5.6
QUANTITATIVER
NACHWEIS
DER
P53-INDUKTION
DURCH
UV-STRAHLEN
IN
HEPG2
72
5.7
UEBERLEBENSRATEN
VON
HEPG2X8
UND
HEPG2XM2-ZELLEN
NACH
UV-BESTRAHLUNG
74
6.
DISKUSSION
77
6.1
TRANSFEKTION
UND
ETABLIERUNG
STABILER
KLONE
78
6.2
ZELLULAERE
LOKALISATION
VON
HBX
81
6.3
ZELLULAERE
LOKALISATION
VON
P53
82
6.4
P53-INDUKTION
87
7.
ZUSAMMENFASSUNG
91
8.
LITERATURVERZEICHNIS
92
9.
ABKUERZUNGEN
109 |
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