Intrachromosomale Rekombination in der Paarungstyp-Region von Schizosaccharomyces pombe: Isolierung und Charakterisierung von cmr Mutanten
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1
LEBENSZYKLUS
VON
S.
POMBE
2
1.2
DAS
PAARUNGSTYP-SYSTEM
3
1.3
MUTANTEN
MIT
REDUZIERTEM
PT-SWITCHING
9
1.4
INTRACHROMOSOMALE
REKOMBINATION
IN
DER
PT-REGION
VON
5.
POMBE
10
2
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1
GERAETE
16
2.2
VERWENDETE
STAEMME,
VEKTOREN
UND
OLIGONUKLEOTIDE
17
2.2.1
E.
COLI
STAEMME
17
2.2.2
S.
POMBE
STAEMME
18
2.2.3
VEKTOREN
UND
GENBANKEN
21
2.2.4
VERWENDETE
OLIGONUKLEOTIDE
22
2.3
MEDIEN
23
2.3.1
MEDIEN
FUER
E.
COLI
23
2.3.2
MEDIEN
FUER
S.
POMBE
24
2.4
ALLGEMEINE
ARBEITSMETHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
S.
POMBE
24
2.4.1
JODBEDAMPFUNG
VON
KOLONIEN
24
2.4.2
STAMMREINIGUNG
UND
ANZUCHT
25
2.4.3
PAARUNGSTYP-TEST
25
2.4.4
KREUZUNGEN
VON
S.
POMBE
STAEMMEN
26
2.4.5
ISOLIERUNG
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
S.
POMBE
27
2.4.6
TRANSFORMATION
VON
S.
POMBE
27
2.4.7
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
S.
POMBE
28
SEITE
2.4.8
UV-EMS-MUTAGENESE
29
2.4.9
BESTIMMUNG
DER
LOOP-OUT
FREQUENZ
IN
DER
PT-REGION
NACH
DER
MEDIANMETHODE
30
2.4.10
UV-INAKTIVIERUNGSKURVEN
30
2.4.11
MMS-INAKTIVIERUNGSKURVEN
31
2.5
STANDARD
DNA-TECHNIKEN
32
2.5.1
SPALTUNG
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
32
2.5.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
VEKTOREN
32
2.5.3
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
32
2.5.4
PCIA-EXTRAKTION
UND
ETHANOLFAELLUNG
33
2.5.5
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
33
2.5.5.1
.NACH
WEICHENHAN
33
2.5.5.2
.MIT
JET-SORB
34
2.5.6
LIGATION
VON
DNA
34
2.5.7
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
35
2.5.7.1
.NACH
HANAHAN
(1983)
35
2.5.7.2
.DURCH
ELEKTROPORATION
36
2.5.8
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
AUS
E.
COLI
37
2.5.8.1
KLARE
LYSATE
37
2.5.8.2
MIDI-PRAEPARATION
38
2.5.9
TRANSFER
VON
DNA
AUF
NITROCELLULOSE
(SOUTHERN
BLOT)
38
2.5.10
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
MIT
32
P
39
2.5.11
HYBRIDISIERUNG
VON
DNA
UND
AUTORADIOGRAPHIE
39
2.5.12
TRANSFER
VON
RNA
AUF
NITROCELLULOSE
(NORTHERN
BLOT)
40
2.5.13
HYBRIDISIERUNG
VON
RNA
41
2.5.14
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
42
2.6
DNA-SEQUENZIERUNG
43
2.6.1
EXONUKLEASE
III-BEHANDLUNG
43
SEITE
2.6.2
SEQUENZIERUNG
DOPPELSTRAENGIGER
DNA
43
2.6.3
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
DURCH
YYCYCLE-SEQUENCING
"
45
2.6.4
AUFTRENNUNG
IM
POLYACRYLAMIDGEL
46
3
VERSUCHE
UND
ERGEBNISSE
47
3.1
TOP2*
IST
NICHT
AN
DER
REPRESSION
DER
INTRACHROMOSOMALEN
REKOMBINATION
IN
DER
PT-REGION
BETEILIGT
47
3.2
SWIOE,
SWI8
UND
RAD22
MUTANTEN
ZEIGEN
EINEN
CMR
PHAENOTYP
49
3.3
ISOLIERUNG
VON
CMR
MUTANTEN
DURCH
UV/EMS
MUTAGENESE
VON
CL13
50
3.4
ERSTE
CHARAKTERISIERUNG
DER
CMR
MUTANTEN
51
3.4.1
UNTERSUCHUNG
VON
CMR
MUTANTEN
DER
KLASSE
1
53
3.4.2
UNTERSUCHUNG
VON
CMR
MUTANTEN
DER
KLASSE
2
55
3.4.3
EINFLUSS
VON
MMS
UND
UV-STRAHLUNG
AUF
CMR
MUTANTEN
58
3.5
EINFLUSS
DES
DOPPELSTRANGBRUCHS
AM
SMT
SIGNAL
AUF
DIE
LOOP-OUT
REKOMBINATION
IN
DER
PT-REGION
60
3.5.1
HERSTELLUNG
EINES
SMT-0
DERIVATES
VON
CL13
60
3.5.2
DIE
SMT-0
DELETION
UNTERDRUECKT
DIE
INTRACHROMOSOMALE
REKOMBINATION
IN
DER
PT-REGION
VOLLSTAENDIG
64
3.5.3
UNTERSUCHUNG
VON
CMR
MUTATIONEN
IN
CL100
65
3.6
BESTIMMUNG
DER
INTRACHROMOSOMALEN
REKOMBINATIONS
FREQUENZ
IN
DER
PT-REGION
VON
CMR
MUTANTEN
NACH
DER
MEDIANMETHODE
67
3.7
KLONIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
VON
CMR6
+
69
3.7.1
CMR6*
IST
ALLEL
MIT
ADE
10*
73
3.7.2
WELCHER
ZUSAMMENHANG
BESTEHT
ZWISCHEN
DER
PURIN
SYNTHESE
UND
MITOTISCHER
INTRACHROMOSOMALER
REKOMBINATION
IN
DER
PT-REGION?
76
SEITE
3.8
KLONIERUNG,
SEQUENZIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
CMR5
+
79
3.8.1
STRATEGIE
ZUR
KLONIERUNG
VON
CMR5*
80
3.8.2
SEQUENZIERUNG
VON
PGB3-L
83
3.8.3
KARTIERUNG
VON
CMR5*
MIT
HILFE
EINER
GEORDNETEN
COSMIDBANK
85
3.8.4
ISOLIERUNG
UND
SEQUENZIERUNG
DES
CMR5
+
GENS
85
3.8.5
CMR5
IST
EIN
MITGLIED
DER
SNF2/SWI2
GENFAMILIE
VON
ATPASEN
94
3.8.6
CMR5
BESITZT
EINE
BROMODOMAENE
98
3.8.7
NACHWEIS
DES
TRANSKRIPTES
VON
CMR5*
100
3.8.8
GENE
REPLACEMENT
VON
CMR5
+
101
3.8.8.1
HERSTELLUNG
EINES
CMR5A::URA4
+
KONSTRUKTES
101
3.8.8.2
REPLACEMENT
VON
CMR5
+
DURCH
URA4
+
102
3.8.8.3
DAS
GEN
CMR5*
IST
ESSENTIELL
104
3.8.9
EINFLUSS
VON
CMR5
AUF
DIE
MEIOTISCHE
REKOMBINATION
105
3.8.10
EINFLUSS
VON
CMR5
AUF
DIE
CHROMOSOMENSEGREGATION
IN
DER
MITOSE
106
3.8.11
CMR5
+
IST
AM
SILENCING
DER
STILLEN
PT-KASSETTEN
BETEILIGT
107
4
DISKUSSION
111
5
ZUSAMMENFASSUNG
124
6
LITERATURVERZEICHNIS
127
7
ANHANG
I |
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| spelling | Liedtke, Christian 1966- Verfasser (DE-588)120060507 aut Intrachromosomale Rekombination in der Paarungstyp-Region von Schizosaccharomyces pombe Isolierung und Charakterisierung von cmr Mutanten von Christian Liedtke 1998 [6], 138, XIV S. Ill., graph. Darst. txt rdacontent n rdamedia nc rdacarrier Braunschweig, Techn. Univ., Diss., 1998 Schizosaccharomyces pombe - Mutante - Paarungstyp - Transposition <Biologie> Rekombination (DE-588)4049338-6 gnd rswk-swf Mutante (DE-588)4256709-9 gnd rswk-swf Schizosaccharomyces pombe (DE-588)4179645-7 gnd rswk-swf Genetik (DE-588)4071711-2 gnd rswk-swf Paarungstyp (DE-588)4298252-2 gnd rswk-swf Transposition Biologie (DE-588)4127022-8 gnd rswk-swf (DE-588)4113937-9 Hochschulschrift gnd-content Schizosaccharomyces pombe (DE-588)4179645-7 s Mutante (DE-588)4256709-9 s Paarungstyp (DE-588)4298252-2 s Transposition Biologie (DE-588)4127022-8 s DE-604 Rekombination (DE-588)4049338-6 s Genetik (DE-588)4071711-2 s DNB Datenaustausch application/pdf http://bvbr.bib-bvb.de:8991/F?func=service&doc_library=BVB01&local_base=BVB01&doc_number=008119004&sequence=000001&line_number=0001&func_code=DB_RECORDS&service_type=MEDIA Inhaltsverzeichnis |
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