Immunhistologischer Nachweis von zwitterionischen Glykolipiden im Schweinespulwurm Ascaris suum:
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| Sprache: | German |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
EINLEITUNG
1
1.1.
ASCARIS
LUMBRICOIDES
1
1.1.1.
VERWANDSCHAFTSGRAD
ZU
ASCARIS
SUUM
1
1.1.2.
EPIDEMIOLOGIE
1
1.1.3.
MORPHOLOGIE
1
1.1.4.
ENTWICKLUNGSZYKLUS
4
1.1.5.
PATHOGENESE
5
1.1.6.
DIAGNOSTIK
5
1.1.7.
THERAPIE
6
1.1.8.
ANDERE
HUMANPATHOGENE
ASCARIS-SPEZIES
6
1.1.9.
INTERAKTIONEN
ZWISCHEN
WIRT
UND
PARASIT
7
1.1.10.
EVASIONSMECHANISMEN
8
1.2.
GLYKOLIPIDE
8
1.2.1.
EINTEILUNG
8
1.2.2.
BIOCHEMISCHE
FUNKTION
UND
MEDIZINISCHE
RELEVANZ
DER
GLYKOLIPIDE
10
1.2.2.1.
BIOCHEMISCHE
FUNKTION
10
1.2.2.2.
MEDIZINISCHE
RELEVANZ
12
1.2.3.
GLYKOLIPIDE
BEI
PARASITEN
13
1.3.
PROBLEMSTELLUNG
14
II.
MATERIAL
UND
METHODEN
15
2.1.
MATERIALIEN
15
2.2.
HERKUNFT
DES
PARASITEN
15
2.3.
ISOLIERUNG
DER
GLYKOLIPIDE
15
2.3.1.
LYOPHYLISATION
DES
AUSGANGSMATERIALS
15
2.3.2.
EXTRAKTION
DER
GESAMTLIPIDE
15
2.3.3.
ACETONWAESCHE
ZUR
ENTFERNUNG
VON
LIPIDEN
16
2.3.4.
ENTSALZUNG
DER
GLYKOLIPIDFRAKTION
16
2.3.4.1.
DIALYSE
16
2.3.4.2.
YYREVERSED-PHASE
"
CHROMATOGRAPHIE
MIT
CHROMABOND
17
C18
EC-KARTUSCHEN
2.3.5.
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
17
2.3.5.1.
UEBERFUEHRUNG
DES
DEAE-SEPHADEX
A-25
VON
DER
CHLORID-IN
17
DIE
ACETATFORM
2.3.5.2.
LADUNGSBEZOGENE
TRENNUNG
DER
GLYKOLIPIDE
18
2.4.
AUFTRENNUNG
DER
NEUTRALEN
FRAKTION
IN
NEUTRALE
UND
ZWITTERIONISCHE
18
GLYKOLIPIDE
UEBER
EINE
KIESELGEL
60-SAEULE
2.5.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
TRENNUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
18
DER
GLYKOLIPIDE
2.5.1.
EINDIMENSIONALE
ANALYTISCHE
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE
18
2.5.2.
PROBENAUFTRAG
UND
LAUFBEDINGUNGEN
,
18
2.5.3.
CHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
GLYKOLIPIDE
19
2.5.3.1.
JOD-FAERBUNG
19
2.5
3.2.
ORCIN-FAERBUNG
19
2.5.3.3.
FAERBUNG
MIT
DRAGENDORFF-REAGENZ
19
2.5.4.
FLUSSSAEUREBEHANDLUNG
(HF)
19
2
5
5.
BEHANDLUNG
MIT
PHOSPHOLIPASE
C
UND
D
20
2.6.
HERSTELLUNG
EINES
MONOSPEZIFISCHEN,
POLYKLONALEN
ANTIKOERPERS
GEGEN
20
DIE
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDFTAKTIONKOMPONENTEN
A,
BL,
B2
UND
C
2.6.1.
TRENNUNG
DER
GLYKOLIPIDE
A,
BL,
B2
UND
C
UEBER
PRAEPARATIVE
HPLC
20
2.6.2.
VORBEREITUNG
FUER
DIE
IMMUNISIERUNG
20
2
6.3.
ENTNAHME
DES
PRAEIMMUNBLUTES
21
2.6.4.
AUFARBEITUNG
DER
PRAEIMMUNSEREN
21
2.6.5.
IMMUNISIERUNG
DER
KANINCHEN
21
2.6.6.
ENTNAHME
DES
POSTIMMUNBLUTES
22
2.6.7.
BOOSTERIMPFUNGEN
22
2
7.
IMMUNFAERBUNGEN
VON
HPTLC-PLATTEN
22
2.7.1.
HERKUNFT
DER
INFEKTIONSSEREN
UND
ANTIKOERPER
22
2.7.1.1.
INFEKTIONSSEREN
22
2
7.1.1.1.
ASCARIS
SUUM
(SCHWEIN)
22
2.7.1.1.2.
ASCARIS
LUMBRICOIDES
(MENSCH)
22
2.7.1.1.3.
PARASCARIS
EQUORUM
(PFERD)
23
2.7.1.1.4.
BAYLISASCARIS
PROCYONIS
(WASCHBAER)
23
2.7.1.1.5.
TOXOCARA
CANIS
(MENSCH)
23
2.7.1.1.6.
MAUSSERUM
23
2.7.1
2.
MONOKLONALER ANTIKOERPER
GEGEN
PHOSPHORYLCHOLIN
(TEPC
15)
23
2.7
2
DURCHFUEHRUNG
DER
IMMUNFAERBUNG
23
2
8
CHARAKTERISIERUNG
DER
POLYKLONALEN
ANTIKOERPER
25
2.8.1.
"ENZYME
LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY"
(ELISA)
25
2.8
2.
INHIBIERUNGSVERSUCHE
26
2.9.
IMMUNHISTOLOGISCHER
NACHWEIS
DER
EPITOPE
DER
GLYKOLIPIDE
A,
BL,
26
B2
UND
C
DURCH
INDIREKTEN
FLUORESZENZ
ANTIKOERPER
TEST
IN
ASCARIS
SUUM
WEIBCHEN
2
9.1.
AFFINITAETSCHROMATOGRAFISCHE
REINIGUNG
DER
ANTIKOERPER
UEBER
CELITE
545
26
2.9.2.
POLY-L-LYSIN-BESCHICHTUNG
DER
OBJEKTTRAEGER
27
2.9.3.
ANFERTIGUNG
DER
GEFTIERSCHNITTE
27
2.9.4.
FIXIERUNG
27
2
9.5.
INDIREKTER
FLUORESZENZ
ANTIKOERPER
TEST
(IFAT)
27
2.9.5.1
CHLOROFORM-METHANOL-BEHANDLUNG
ZUR
GLYKOLIPIDEXTRAKTION
28
DER
GEFTIERSCHNITTE
2.9.5.2.
PROTEINASE
K-BEHANDLUNG
DER
GEFTIERSCHNITTE
28
2.10.
PROTEINANALYTIK
28
2.10.1.
PRAEPARATION
DER
A.
SUUM
WEIBCHEN
28
2.10.2.
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
29
2.10.2.1.
ENTFERNUNG
DER
GLYKOLIPIDE
UND
ANSCHLIESSENDE
EXTRAKTION
DER
29
PROTEINE
AUS
A.
SUUM
ORGANEN
2.10.2.2.
DURCHFUEHRUNG
DER
SDS-PAGE
29
2.10.3.
WESTERN
BLOTTING
30
III.
ERGEBNISSE
32
3
1.
ISOLIERUNG
UND
REINIGUNG
DER
GLYKOLIPIDE
VON
A.
SUUM
32
3.1.1.
GLYKOLIPIDEXTRAKTION
33
3.1.2.
DUENNSCHICHTCHROMATOGRAPHISCHE
CHARAKTERISIERUNG
DER
SAUREN
UND
33
NEUTRALEN
GLYKOLIPIDFRAKTIONEN
3.1.3.
UNTERSUCHUNG
UND
AUFTRENNUNG
DER
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDE
33
3.1.3.1.
GLYKOLIPIDAUFTRENNUNG
33
3.1.3.2.
ERGEBNISSE
DER
CHEMISCHEN
CHARAKTERISIERUNG
34
3.2.
ERGEBNISSE
DER
IMMUNFAERBUNGEN
VON
HPTLC-PLATTEN
3
5
3.2.1.
CHARAKTERISIERUNG
DER
POLYKLONALEN
KANINCHEN-ANTIKOERPER
35
3.2.1.1.
ERMITTLUNG
DER
REAKTIVITAET
DER
ANTIKOERPER
GEGENUEBER
DEN
35
GLYKOLIPIDEN
A,
BL,
B2
UND
C
3.2.1.2.
KREUZREAKTIVITAET
DER
ANTIKOERPER
35
3.2.1.3.
REAKTIVITAET
DER
MONOSPEZIFISCHEN,
POLYKLONALEN
GEGEN
ZWITTERIONISCHE
37
GLYKOLIPIDE
GERICHTETE
ANTIKOERPER
NACH
FLUSSSAEURE-,
PHOSPHOLIPASE
C
UND
PHOSPHOLIPASE
D-BEHANDLUNG
DER
GLYKOLIPIDE
3.2.1.4.
INHIBITIONSSTUDIEN
37
3.2.2.
IMMUNREAKTIVITAET
VERSCHIEDENER
INFEKTIONSSEREN
UND
DES
38
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERS
TEPC
15
3.2.2.I.
REAKTIVITAET
DER
INFEKTIONSSEREN
38
3.2.2.2.
REAKTIVITAET
DES
MONOKLONALEN
ANTI-PC
ANTIKOERPERS
TEPC
15
40
3.3.
TITERBESTIMMUNG
UND
ANTIKOERPERTYPISIERUNG
MITTELS
ELISA
40
3.3.1.
BESTIMMUNG
DER
ANTIKOERPERTITER
40
3.3.2.
ERMITTLUNG
DER
ANTIKOERPERTITER
GEGEN
DIE
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDE
41
IN
INFEKTIONSSEREN
VERSCHIEDENER
ASCARIS-SPEZIES
3.3.3.
TYPISIERUNG
DER
ANTIKOERPER
VON
HERGESTELLTEN
MAUSEREN
UND
42
HUMANEN
ASCARIS
INFEKTIONSSEREN
3.4.
IMMUNHISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
43
3.4.1.
GEFRIERSCHNITTE
VON
ASCARIS
SUUM-WEIBCHEN
43
3.4.1.1.
LOKALISATION
DER
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDE
IN
GEFRIERSCHNITTEN
44
MIT
DEN
MONOSPEZIFISCHEN,
POLYKLONALEN
ANTI-GLYKOLIPID
ANTIKOERPERN
3.4.1.1.1.
ANFAERBUNG
VON
UNBEHANDELTEN
SCHNITTEN
45
3.4.1.1.2
VERGLEICHENDE
UNTERSUCHUNG
DES
LIPIDEXTRAHIERTEN
A.
SUUM
GEWEBES
49
3.4.1.1.3.
VERGLEICHENDE
UNTERSUCHUNG
NACH
LIPIDEXTRAKTION
UND
56
PROTEINASE-VERDAU
3.4.I.2.
BEHANDLUNG
DER
ASCARIS
WEIBCHEN
GEFRIERSCHNITTE
MIT
DEM
56
MONOKLONALEN
ANTIKOERPER
TEPC
15
3.4.1.2.1.
UNTERSUCHUNG
DER
IMMUNREAKTIVITAET
UNBEHANDELTER
/FSCARW-SCHNITTE
56
3.4.I.2.2.
VERGLEICHENDE
UNTERSUCHUNG
LIPIDEXTRAHIERTER
SCHNITTE
57
3.4.2.
ERGEBNISSE
DER
IMMUNHISTOLOGISCHEN
UNTERSUCHUNGEN
AN
LITOMOSOIDES
66
CARINII
MIKROFILARIEN
MIT
DEN
POLYKLONALEN
ANTI
GLYKOLIPID
ANTIKOERPERN
3.5.
ANALYSE
DER
PROTEINEXTRAKTE
VON
A.
SUUM
WEIBCHEN
66
3.5.1.
AUFTRENNUNG
DER
NACH
ORGANSYSTEMEN
GETRENNTEN
PROTEINEXTRAKTE
66
UEBER
SDS-PAGE
3.5.2.
UEBERPRUEFUNG
AUF
KREUZREAKTIVITAET
ZWISCHEN
GLYKOLIPID
UND
68
PROTEIN-EPITOPEN
MITTELS
WESTEM-IMMUNOBLOT
IV
DISKUSSION
69
4.1.
METHODIK
69
4.1.1.
EXTRAKTION,
REINIGUNG
UND
TRENNUNG
DER
GLYKOLIPIDE
69
4.1.2.
IMMUNISIERUNG
70
4.1.3.
IMMUNFAERBUNG
70
4.1.4.
IMMUNHISTOLOGIE
70
4.1.5.
PC-SUBSTITUENTEN
DER
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDE
VON
ASCARIS
SUUM
71
4
2.
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
71
4.2.1.
ELISA
71
4.2.2.
IMMUNFAERBUNGEN
72
4.2
2.1.
POLYKLONALE
GLYKOLIPIDANTIKOERPER
72
4.2.2.2.
INFEKTIONSSEREN
72
4.2
2.3.
MONOKLONALER
ANTI-PHOSPHORYLCHOLINANTIKOERPER
TEPC
15
72
4.2.3.
IMMUNHISTOLOGIE
73
4.23.1.
POLYKLONALE
GLYKOLIPIDANTIKOERPER
73
4.2.3.2.
MONOKLONALER
ANTI-PHOSPHORYLCHOLINANTIKOERPER
TEPC
15
75
4.2.3.3.
LITOMOSOIDES
CARINW-MIKROFILARIEN
75
4.3.
PC
ALS
ENTSCHEIDENDES
ANTIGENES
EPITOP
75
4.4.
EINSATZ
DER
ZWITTERIONISCHEN
GLYKOLIPIDE
ZUR
SERODIAGNOSE
ODER
77
ALS
VAKZIN
V
ZUSAMMENFASSUNG
79
VI
LITERATURVERZEICHNIS
80 |
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