Untersuchungen zur homotypischen und heterotypischen Granulenfusion in equinen eosinophilen Granulozyten:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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| Beschreibung: | Heidelberg, Univ., Diss., 1998 |
| Beschreibung: | 108 Bl. Ill., graph. Darst. |
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2 INHALTSVERZEICHNIS
1. ABKUERZUNGEN.4
2. INHALTSVERZEICHNIS. 5
3. ZUSAMMENFASSUNG.8
4. EINLEITUNG.9
4.1 DER EOSINOPHILE GRANULOZYT_9
4.1.1 HISTORIE DER GRANULOZYTEN-FORSCHUNG.9
4.1.2 MORPHOLOGIE UND REIFUNG VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN.9
4.2 G-PROTEINE UND "SIGNALING PATHWAY".11
4.3 DIE SNARE-HYPOTHESE. 13
4.4 EXOZYTOSE.15
5. MATERIAL UND METHODEN. 16
5.1 ISOLATION VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN AUS PFERDEBLUT.16
5.2 ISOLIERUNG VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN AUS HUMANEM BLUT. 16
5.3 ISOLIERUNG VON NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN AUS HUMANEM "BUFFY-COAT".17
5.4 ISOLIERUNG VON ZYTOSOL AUS DEM HIRNGEWEBE DER RATTE.17
5.5 HERSTELLUNG VON KALZIUMPUFFERN.17
5.6 MESSUNG VON GRANULENSEKRETION DURCH QUANTIFIZIERUNG DER
MARKERPROTEINE.18
5.7 FLUORIMETRISCHER NACHWEIS VON MARKERENZYMEN.19
5.8 SENSITIVE DOT-BLOT ANALYSE ZUR QUANTIFIZIERUNG VON SUB-PICOGRAMM
MENGEN ANTIGEN.20
5.9 CHEMISCHE KOPPLUNG VON SEKRETORISCHEN VESIKELN AN DSS-AKTIVIERTE
SEPHAROSE CL-6B.20
5.9.1 AKTIVIERUNG DER SEPHAROSE CL-4B.20
5.9.2 LIGANDEN-KOPPLUNG: KOPPLUNG VON GRANULEN AN EINE
SEPHADEX-MATRIX.21
5.10 IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG VON GRANULOZYTEN.21
5.11 PRAEPARATION VON AUF DECKGLAESCHEN ADHAERIERTEN ZELLEN FUER DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE.23
5.12 PRAEPARATION VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN IN SUSPENSION ZUR
ELEKTRONENMIKROSKOPIE.24
5.13 MORPHOMETRIE VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN.24
5.14 MESSUNG UND AUSWERTUNG VON GRANULENFUSIONSVORGAENGEN DURCH
KAPAZITAETSMESSUNGEN MIT DER
PATCH-CLAMP-TECHNIK.25
5.14.1 QUANTIFIZIERUNG DER KAPAZITAETSSTUFEN.27
5.14.2 QUANTIFIZIERUNG VON KAPAZITAETSSTUFEN UNTER BERUECKSICHTIGUNG DER
BILDUNG UND ERWEITERUNG
EINER FUSIONSPORE. 28
5
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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6. ERGEBNISSE.31
6.1 VIDEOMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG DER COMPOUND-BILDUNG.
31
6.2 PATCH-CLAMP UNTERSUCHUNGEN ZUR ELEKTROPHYSIOLOGISCHEN UND VISUELLEN
KORRELATION DER
COMPOUND-BILDUNG IN EOSINOPHILEN.33
6.3 MORPHOLOGISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR BILDUNG DER SEKRETIONSVAKUOLE BEI
EOSINOPHILEN
GRANULOZYTEN: SERIELLE SCHNITTE DURCH EINE DEGRANULATIONS-VAKUOLE.36
6.4 STADIEN DER COMPOUND-SEKRETION.38
6.5 MORPHOMETRISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUR COMPOUND-BILDUNG AN EQUINEN
EOSINOPHILEN DURCH
ELEKTRONENMIKROSKOPIE.40
6.6 PERMEABILISIERUNG VON ZELLEN DURCH DIGITONIN UND SLO.40
6.7 ZEITVERLAUF DES LDH-AUSTRITTS AUS NEUTROPHILEN NACH
PERMEABILISIERUNG MIT SLO.42
6.8 UNTERSUCHUNG DER ABHAENGIGKEIT DER SEKRETIONSRATE VON ATP UND CHLORID
IM RUN-DOWN-
EXPERIMENT.43
6.9 BESTIMMUNG DER ABHAENGIGKEIT DER SEKRETION BEI GRANULOZYTEN VON DER
KALZIUM- UND GTP-Y-S
KONZENTRATION.;.-.44
6.9.1 EOSINOPHILE GRANULOZYTEN.44
6.9.2 NEUTROPHILE GRANULOZYTEN.45
6.10 SUBZELLULARE FRAKTIONIERUNG VON GRANULOZYTEN.46
6.11 KALZIUMABHAENGIGE BINDUNG VON ZYTOSOLISCHEN PROTEINEN AN
ZELLMEMBRANEN.49
6.11.1 KALZIUMABHAENGIGE BINDUNG VON ZYTOSOLISCHEN PROTEINEN AUS
NEUTROPHILEN GRANULOZYTEN AN
VESIKEL.50
6.12 KALZIUMABHAENGIGE BINDUNG ZYTOSOLISCHER PROTEINE AN FRAKTIONIERTE,
INTRAZELLULAERE MEMBRANEN53
6.13 IDENTIFIZIERUNG VON KALZIUMBINDENDEN PROTEINEN IM ZYTOSOL VON
EQUINEN EOSINOPHILEN
GRANULOZYTEN.57
6.14 IMMUNFLUORESZENZ-UNTERSUCHUNG VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN.58
6.14.1 LOKALISIERUNG VON ANNEXIN.58
6.14.2 LOKALISIERUNG VON GELATINASE.58
6.14.3 LOKALISIERUNG VON GRANCALCIN.59
6.14.4 LOKALISIERUNG VON MARCKS-PROTEIN.60
6.14.5 LOKALISIERUNG VON CYSTEIN-STRING-PROTEIN.61
6.14.6 LOKALISIERUNG VON F-ACTIN.61
6.15 UNTERSUCHUNG VON EOSINOPHILEN PROTEINEN AUF SPALTBARKEIT DURCH
BOTULINUM-NEUROTOXIN-B.63
6.16 VALIDIERUNG DER ANTI-VAMP-ANTIKOERPER.64
6.17 NACHWEIS VON VAMP IN EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN DURCH
WESTERN-BLOTTING.66
6.18 NACHWEIS VON VAMP NACH AMMONIUMSULFAT-PRAEZIPITATION VON
MEMBRANPROTEINEN AUS
EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN.66
6.19 UNTERSUCHUNG ZUR LOKALISIERUNG VON VAMP IN DER ZELLE NACH
BIOTIN-MARKIERUNG DER
PLASMAMEMBRAN.68
6.20 IMMUNFLUORESZENZ-UNTERSUCHUNG VON LEUKOZYTEN UNTER VERWENDUNG
MONOKLONALER UND
POLYKLONALER ANTI-VAMP-ANTIKOERPER.69
6
6.20.1 IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG VON EQUINEN, EOSINOPHILEN
GRANULOZYTEN MIT POLYKLONALEM
ANTI-VAMP-ANTIKOERPER_70
6.20.2 IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG VON HUMANEN EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN
MIT POLYKLONALEM
ANTI-VAMP-ANTIKOERPER_70
6.20.3 IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG VON EQUINEN EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN
MIT MONOKLONALEM
ANTI-VAMP-ANTIKOERPER_71
6.20.4 IMMUNFLUORESZENZ-MARKIERUNG VON HUMANEN LEUKOZYTEN MIT
MONOKLONALEM ANTI-VAMP-
ANTIKOERPER_ 72
6.21 ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE UNTERSUCHUNG ZUR LOKALISIERUNG VON VAMP IN
EOSINOPHILEN
GRANULOZYTEN_ 73
6
.21.1 PRE-LABELLING VON EOSINOPHILEN NACH RAPID FREEZING BEI - 95 C IN
METHANOL_73
6
.21.2 POST-EMBEDDING-LABELLING VON EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN MIT
MONOKLONALEM UND
POLYKLONALEM ANTI-VAMP ANTIKOERPER NACH RAPID FREEZING BEI -174 C_75
6.22
UNTERSUCHUNG DER ABHAENGIGKEIT DES VERTEILUNGSMUSTERS DES VAMP-SIGNALSVON
DER
KONZENTRATION VON FREIEM KALZIUM.78
6.22.1 MORPHOMETRISCHE BETRACHTUNG DES ZEITLICHEN VERLAUFS DER
COMPOUND-BILDUNG_84
6.22.2 EINFLUSS VON CONCANAVALIN A AUF DIE GRANULENGROESSENVERTEILUNG_
86
6.22.3 EINFLUSS VON CYTOCHALASIN-B AUF DIE GRANULENGROESSENVERTEILUNG_ 87
6.22.4 EINFLUSS VON BOTULINUM-NEUROTOXIN-B AUF DIE
GRANULENGROESSENVERTEILUNG_
88
6.23 UNTERSUCHUNG DER WIRKUNGEN VON TOXINEN AUF DIE
GRANULENGROESSENVERTEILUNG IN EOSINOPHILEN
DURCH PATCH-CLAMP-MESSUNG.88
7. DISKUSSION.
91
7.1 SIGNALING PATHWAY BEI NEUTROPHILEN UND EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN.
91
7.2 KALZIUMBINDENDE PROTEINE UND EINE MOEGLICHE ROLLE IN DER
MEMBRANFUSION BEI GRANULOZYTEN.
94
7.3 DIREKTER NACHWEIS VON HOMOTYPISCHER GRANULENFUSION.
97
7.4 NACHWEIS VON BREVINEN IN EQUINEN EOSINOPHILEN.
99
7.5 DAS 15-KDA-BREVIN IN EQUINEN EOSINOPHILEN GRANULOZYTEN SPIELT EINE
ROLLE BEI DER SEKRETION
.102
8. LITERATURVERZEICHNIS.
104
7 |
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