Reinigung und Charakterisierung der Allenoxid-Cyclase aus Maiskörnern (Zea mays L.):
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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A
REINIGUNG UND CHARAKTERISIERUNG DER ALLENOXID-CYCLASE AUS MAISKOERNERN
{ZEA MAYS L.)
DISSERTATION
ZUR ERLANGUNG DES AKADEMISCHEN GRADES
DOCTOR RERUM NATURALIUM (DR. RER. NAT.)
VORGELEGT DER
MATHEMATISCH-NATURWISSENSCHAFTLICHEN-TECHNISCHEN FAKULTAET DER
MARTIN-LUTHER-UNIVERSITAET HALLE-WITTENBERG FACHBEREICH BIOLOGIE
VON JOERG ZIEGLER
GEBOREN AM 8. JUNI 1968 IN ZWEIBRUECKEN (PFALZ)
GUTACHTER: 1. PROF. DR. BENNO PARTHIER 2. PD DR. MATS HAMBERG 3. PROF.
DR. JAN REMMER ANDREESEN
HALLE (SAALE), DEN 10.11.1997
IMAGE 2
INHALTSVERZEICHNIS
INHALTSVERZEICHNIS
1
L.I
1.2
1.3
1.4
2
2.1
2.1.1
2.1.2
2.1.3
2.1.4
2.2
2.2.1
2.2.2
2.2.3
2.3
2.3.1
2.3.2
2.3.3
2.3.4
2.4
2.4.1
2.4.2
2.4.3
2.4.4
EINLEITUNG
VORKOMMEN UND WIRKUNGEN DER JASMONATE DER OXYLIPIN-STOFRWECHSELWEG
DIE BIOSYNTHESE DER JASMONSAEURE
ZIEL DER ARBEIT
MATERIAL UND METHODEN
MATERIAL CHEMIKALIEN
HERSTELLUNG VON 13(S)-HYDROPEROXYFETTSAEUREN
HERSTELLUNG VON (+)-CW-9,10-EPOXY-12(Z)-OCTADECENSAEURE
UND ()-CIS- 12,13-EPOXY-9(2)-OCTADECENSAEURE
HERSTELLUNG DES A-KETOLS DER LINOLSAEURE
PFLANZENANZUCHT UND BEHANDLUNG
PFLANZENMATERIAL
INKUBATION DER GERSTENBLATTSEGMENTE
EXTRAKTION DER PFLANZENGEWEBE
ENZYMTESTS
EXTRAKTION DER ALLENOXID-SYNTHASE
ALLENOXID-CYCLASE-TEST
ALLENOXID-SYNTHASE-TEST
TRENNUNG ISOMERER UND ENANTIOMERER PDA-FORMEN
REINIGUNG DER ALLENOXID-CYCLASE
GEWINNUNG DES ROHEXTRAKTES
ACETONFAILUNG
HYDROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE AN
OCTYL-SEPHAROSE CL 4 B
CHROMATOGRAPHIE AN HYDROXYLAPATIT
SEITE
1
1
4
G
11
12
12
12
12
13
13
14
14
14
14
15
15
15
16
17
17
17
18
18
18
IV
IMAGE 3
INHALTSVERZEICHNIS
2.4.5 HYDROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE AN
PHENYL-SUPEROSE 5/5 19
2.4.6 ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE AN MONO Q HR 5/5 19
2.5 GELFILTRATION AN SUPERDEX TM 75 19
2.6 PRAEPARATIVE ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG 20
2.7 PROTEINBESTIMMUNG 21
2.8 ELEKTROPHORESE 21
2.8.1 SDS-POLYACRYLAMID GELELEKTROPHORESE 21
2.8.2 ZWEIDIMENSIONALE GELELEKTROPHORESE 21
2.9 PROTEINBLOTTING UND N-TERMINALE SEQUENZIERUNG 22
2.10 ISOLIERUNG DER MRNA AUS MAISKOERNERN 22
2.11 HERSTELLUNG EINER CDNA-BANK 23
3 ERGEBNISSE 25
,3.1 ENZYMTEST DER AOC 25
3.1.1 AUFBAU UND AUSWERTUNG DES ENZYMTESTS 25
3.1.2 OPTIMIERUNG DES ENZYMTESTS 28
3.2 NACHWEIS DER AOC-AKTIVITAET IN VERSCHIEDENEN PFLANZENEXTRAKTEN 29
3.3 REINIGUNG DER AOC 32
3.3.1 ACETONFAELLUNG UND KONZENTRIERUNG 32
3.3.2 HYDROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE AN OCTYL-SEPHAROSE 33
3.3.3 CHROMATOGRAPHIE AN HYDROXYLAPATIT 34
3.3.4 HYDROPHOBE INTERAKTIONSCHROMATOGRAPHIE AN PHENYL-SUPEROSE 35
3.3.5 ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE AN MONO Q 36
3.3.6 REINIGUNGSTABELLE UND IDENTIFIZIERUNG DER AOC DURCH SDS-PAGE 37
3.3.7 ANDERE REINIGUNGSTECHNIKEN 39
3.3.8 N-TERMINALE SEQUENZIERUNG 40
3.4 NACHWEIS DER ENANTIOMEREN ZUSAMMENSETZUNG DER PDA 41
3.5 CHARAKTERISIERUNG DER AOC 42
3.5.1 NATIVES MOLEKULARGEWICHT DER AOC 42
3.5.2 ISOELEKTRISCHER PUNKT DER AOC 43
3.5.3 EINLEITENDE BEMERKUNGEN ZU DEN PUNKTEN 3.5.4 BIS 3.5.8 45
3.5.4 PH-OPTIMUM DER AOC 46
IMAGE 4
INHALTSVERZEICHNIS
3.5.5 EINFLUSS VON ZWEIWERTIGEN IONEN AUF DIE AOC-AKTIVITAET 47
3.5.6 EINFLUSS VON OXYGENIERTEN FETTSAEUREDERIVATEN AUF DIE AOC-AKTIVITAET
48
3.5.7 EINFLUSS VON INHIBITOREN DER JA-BIOSYNTHESE AUF DIE AOC-AKTIVITAET
50
3.5.8 EINFLUSS DES ALLENOXIDS DER LINOLSAEURE AUF DIE AOC-AKTIVITAET 52
3.5.9 UNTERSUCHUNGEN ZUR ENZYMKINETIK 5 5
3.6 ISOLIERUNG DER MRNA AUS MAISKOERNERN UND
HERSTELLUNG EINER CDNA-BANK 55
4 DISKUSSION 59
4.1 REINIGUNG DER AOC 59
4.2 MOLEKULARGEWICHT UND STRUKTUR DER AOC 62
4.3 ISOELEKTRISCHER PUNKT UND MOEGLICHE ISOFORMEN DER AOC 63
4.4 CHARAKTERISIERUNG DER AOC 64
4.4.1 EINFUEHRENDE BEMERKUNGEN 64
4.4.2 PH-OPTIMUM DER AOC 65
4.4.3 SUBSTRATSPEZIFITAET DER AOC UND BINDUNG DES SUBSTRATES AN DIE AOC
65
4.5 MOEGLICHE INTRACELLULAERE LOKALISATION DER AOC 69
4.6 BEDEUTUNG DER AOC IN DER REGULATION DER JA-BIOSYNTHESE 71
4.6.1 REGULATION DER AOC-AKTIVITAET DURCH ZWEIWERTIGE IONEN 72
4.6.2 REGULATION DER AOC-AKTIVITAET DURCH PRODUKTE DES
OXYLIPIN-STOFFWECHSELWEGES 12
4.6.3 WIRKUNGSWEISE VON CYCLOOXYGENASE-INHIBITOREN AUF DIE
JA-BIOSYNTHESE UND VERGLEICH DER FETTSAEURECYCLISIERUNG
IN TIER UND PFLANZE 74
4.6.4 MOEGLICHE BILDUNG EINES CYCLOPENTENDERIVATES AUSGEHEND
VON DER LINOLSAEURE 78
4.7 AUSBLICK 79
5 ZUSAMMENFASSUNG 81
6 LITERATURVERZEICHNIS 82
VI
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