Verfügbarkeit: Untersuchungen zur molekularen Regulation der Spermatozoenmotilität durch GTP-bindende Proteine

Untersuchungen zur molekularen Regulation der Spermatozoenmotilität durch GTP-bindende Proteine:

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Bibliographische Detailangaben
1. Verfasser:	Hinsch, Klaus-Dieter (VerfasserIn)
Format:	Buch
Sprache:	German
Veröffentlicht:	1996
Schlagworte:	Hochschulschrift
Online-Zugang:	Inhaltsverzeichnis
Beschreibung:	Giessen, Univ., Habil.-Schr., 1997
Beschreibung:	VI, 127 S. Ill., graph. Darst.

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adam_text	I INHALT 1. EINLEITUNG 1 1.1 ANATOMISCHER AULBAU DES SPERMATOZOONS 2 1.2 SPERMATOGENESE 3 1.3 ANATOMIE DES FLAGELLUMS 4 1.3.1 DAS AXONEM 4 1.3.2 DIE MANTELFASEM (OUTER DENSE FIBERS, ODF) 5 1.3.3 DIE MITOCHONDRIALE HUELLE 6 1.3.4 DIE FIBROESE HUELLE 7 1.4 REGULATION DER MOTILITAET 7 1.5 HETEROTRIMERE G-PROTEINE 9 1.5.1 G-PROTEINE IN SPERMATOZOEN 12 1.6 KLEINE GTP-BINDENDE PROTEINE 15 1.6. I KLEINE GTP-BINDENDE PROTEINE IN SPERMATOZOEN 18 1.6.2 RHO-PROTEINE 19 1.6.3 RAC-PROTEINE 21 II 2. MATERIAL UND METHODEN 22 2.1 HERSTELLUNG VON ANTI-G-PROTEIN-ANTIKOERPERN 22 2.1.1 AUSWAHL DER PEPTIDE 22 2.1.2 KOPPLUNG DER PEPTIDE AN KLH 22 2.1.3 IMMUNISIERUNG DER KANINCHEN 23 2.1.4 AFFINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE ANREICHERUNG VON ANTIKOERPERN 23 2.1.5 ELISA 23 2.2 SDS-PAGE UND IMMUNOBLOT 24 2.2.1 PRAEZIPITATION VON PROTEINEN 24 2.2.2 PROTEINBESTIMMUNG 24 2.2.3 SDS-PAGE 25 2.2.4 IMMUNOBLOT 25 2.2.4.1 WESTEMBLOT 26 2.2.4.2 NACHWEIS SPEZIFISCH GEBUNDENER ANTIKOERPER 26 2.2.4.3 BLOCKIERUNG VON ANTIKOERPERN MIT SYNTHETISCHEN PEPTIDEN 27 2.3 PRAEPARATION VON ZELLMEMBRANEN UND ZYTOSOLISCHEN PROTEINEN 28 2.3.1 HERSTELLUNG VON PROTEINFRAKTIONEN AUS VERSCHIEDENEN GEWEBEN 28 2.3.2 HERSTELLUNG BOVINER SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 28 2.3.3 HERSTELLUNG MENSCHLICHER SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 30 2.4 ELEKTRONENMIKROSKOPIE 30 2.5. ADP-RIBOSYLIERUNG VON GTP-BINDENDEN PROTEINEN 30 2.5.1 ADP-RIBOSYLIERUNG VON HETEROTRIMEREN G-PROTEINEN MIT PERTUSSISTOXIN 30 2.5.2 ADP-RIBOSY LIERUNG VON RHO-PROTEINEN MIT C3-EXOENZYM 31 III 2.6 [A J2 P\|GTP-BINDUNG 31 2.7 SPERMATOZOENFUNKTIONSPARAMETER 32 2.7. 1 COMPUTERASSISTIERTE ANALYSE DER SPERMATOZOENBEWEGLICHKEIT 32 2.7.2 VITALITAETSMESSUNG VON SPERMATOZOEN MIT EOSIN-Y 32 2.8 GEWINNUNG BOVINER MANTELFASERN 32 2.8.1 PRAEPARATION BOVINER MANTELFASEM AUS INTAKTEN SPERMATOZOEN 32 2.8.2 MODIFIZIERTE PRAEPARATION BOVINER MANTELFASEM 34 2.8.2.1 TRENNUNG VON SPERMATOZOENFLAGELLEN UND -KOEPFEN DURCH ULTRASCHALL UND ISOLIERUNG VON SPERMATOZOENSCHWAENZEN 34 2.8.2.2 ISOLIERUNG DER AEUSSEREN MANTELFASEM AUS SPERMATOZOENSCHWAENZEN 35 2.8.3 EXTRAKTION VON PROTEINEN AUS ISOLIERTEN MANTELFASEM 36 2.8.3.1 SDS-EXTRAKTION 36 2.8.3.2 HAMSTOFFEXTRAKTION 36 IV 3. ERGEBNISSE 37 3.1 HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON ANTI-PEPTID-ANTISEREN GEGEN G-PROTEIN-A-UNTEREINHEITEN 37 3.1.1 ANTISEREN GEGEN DAS GA COMMON -PEPTID 39 3.1.2 ANTISEREN GEGEN DAS SYNTHETISCHE GA O - PEPTID 40 3.1.3 ANTISEREN GEGEN SYNTHETISCHE GAJ-PEPTIDE 41 3.1.4 ANTISEREN GEGEN SYNTHETISCHE GA, YY -. GCTJI UND GAJJ PEPTIDE 42 3.1.5 ANTISEREN GEGEN DAS SYNTHETISCHE GA S -PEPTID 45 3.1.6 ANTISEREN GEGEN DAS SYNTHETISCHE GA Z -PEPTID 46 3.2 HERSTELLUNG UND CHARAKTERISIERUNG VON ANTI-PEPTID-ANTISEREN GEGEN G-PROTEIN-O-UNTEREINHEITEN 47 3.3 NACHWEIS VON G-PROTEIN-A UND SS-UNTEREINHEITEN IN BOVINEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 53 3.3.1 HERSTELLUNG BOVINER SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 53 3.3.2 NACHWEIS VON G-PROTEIN-A-UNTEREINHEITEN IN BOVINEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 57 3.3.3 G-PROTEIN-SS-UNTEREINHEITEN IN BOVINEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 61 3.4 HETEROTRIMERE G-PROTEINE IN MENSCHLICHEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 64 3.4.1 HERSTELLUNG MENSCHLICHER SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 64 3.4.2 G-PROTEIN-A-UNTEREINHEITEN IN MENSCHLICHEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANF'RAKTIONEN 67 3.4.3 G-PROTEIN-SS-UNTEREINHEITEN IN MENSCHLICHEN SPERMATOZOENSCHWANZMEMBRANEN 72 V 3.5 KLEINE GTP-BINDENDE PROTEINE IN BOVINEN SPERMATOZOENSCHWAENZEN 74 3.5.1 RHO-PROTEINE IN BOVINEN SPERMATOZOENSCHWAENZEN 74 3.5.2 PHYSIOLOGISCHE FUNKTION VON RHO-PROTEINEN IN SPERMATOZOEN 76 3.6 EIEKTRONENMIKROSKOPISCBE UNTERSUCHUNGEN AN C3-TOXIN-BEHANDELTEN BOVINEN SPERMATOZOEN 79 3.7 ANREICHERUNG UND IDENTIFIZIERUNG VON MANTELFASERPROTEINEN 80 3.7.1 PRAEPARATION BOVINER MANTELFASEM 80 3.7.2 PRAEPARATION BOVINER MANTELFASEM NACH BRITO ET AL. (1986) 82 3.7.3 ANREICHERUNG VON MANTELFASEM AUS ISOLIERTEN SPERMATOZOENSCHWAENZEN 82 3.7.4 PARTIELLE LYSIS ISOLIERTER FLAGELLEN MIT CTAB 83 3.8 CHARAKTERISIERUNG GELOESTER MANTELFASERPROTEINE IN DER SDS-PAGE 85 3.8.1 AMINOSAEURESEQUENZANALYSEN VON PROTEINEN AUS ANGEREICHERTEN MANTELFASERPRAEPARATIONEN 87 3.8.2 IMMUNBIOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG VON PORIN IN BOVINEN SPERMATOZOEN 89 3.8.3 IMMUNBIOCHEMISCHE IDENTIFIZIERUNG BOVINER MANTELFASERPROTEINE 90 4. DISKUSSION 92 5. ZUSAMMENFASSUNG 110 6. LITERATURVERZEICHNIS 112
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