CD3- und CD28-vermittelte Signal-Dichotomie in humanen T-Lymphozyten:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
1998
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1998 |
| Beschreibung: | VII, 137 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
IV
INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2
EINLEITUNG
.
3
2.1
IMMUNITAET
.
3
2.2
AUFGABEN
DER
T-LYMPHOZYTEN
.
3
2.3
DER
T-ZELL-REZEPTOR/CD3-KOMPLEX
.
4
2.4
ANTIGENPRAESENTATION
.
5
2.5
T-ZELL-AKTIVIERUNG
.
6
2.6
REGULATION
DER
T-ZELL-EFFEKTORFUNKTIONEN
.
9
2.6.1
TOLERANZ
.
9
2.6.2
REGULATION
DER
ANTIGEN-INDUZIERTEN
IMMUNANTWORT
.
10
2.7
ZYTOKINE
.
11
2.8
ANERGIE
.
12
2.9
PROGRAMMIERTER
ZELLTOD
.
13
2.10
AKTIVIERUNG
VON
T-ZELLEN
IN
VITRO
.
14
2.11
ZIEL
DER
ARBEIT
.
16
3
MATERIAL
.
17
3.1
GERAETE
.
17
3.2
COMPUTERPROGRAMME
.
18
3.3
VERBRAUCHSMITTEL
.
18
3.4
CHEMIKALIEN,
REAGENZIEN,
ENZYME,
INTERIEUKINE
.
19
3.5
ELISA-KITS
.
20
3.6
ANTIKOERPER
.
21
3.6.1
ANTIKOERPER
FUER
FACSCAN-ANALYSEN
.
21
3.6.2
ANTIKOERPER
FUER
ZELLULAERE
VERSUCHE
.
22
3.6.3
ANTIKOERPER
FUER
ELISA
UND
WESTEMBLOT-ANALYSEN
.
22
3.7
ZELLEN
.
23
3.8
OLIGONUCLEOTIDE
FUER
DIE
PCR
.
24
4
METHODEN
.
25
4.1
ZELLBIOLOGISCHE
METHODEN
.
25
4.1.1
AUFTAUEN,
KULTIVIEREN
UND
EINFRIEREN
VON
ZELLEN
.
25
4.1.2
KULTIVIERUNG
UND
SUBKLONIERUNG
VON
HYBRIDOMZELLEN
.
26
INHALTSVERZEICHNIS
V
4.1.3
MYKOPLASMENTEST
.
26
4.1.4
GEWINNUNG
HUMANER
BLUTZELLEN
.
26
4.1.4.1
ISOLIERUNG
PERIPHERER
BLUT-MONONUKLEAERER
ZELLEN
(PBMZ)
.
26
4.1.4.2
ISOLIERUNG
VON
T-ZELLEN
.
27
4.1.5
PROLIFERATIONSNACHWEIS
.
27
4.1.5.1
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
.
27
4.1.5.2
PROLIFERATIONSMESSUNG
DURCH
3
[H]-THYMIDIN-EINBAU
.
27
4.2
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
.
28
4.2.1
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
.
28
4.2.1.1
PROBENAUFBEREITUNG
UND
MESSUNG
.
28
4.2.1.2
ANTIKOERPERMARKIERUNG
MIT
FLUORESCEIN-ISOTHIOCYANAT
(FITC)
.
28
4.2.2
ENZYM-GEKOPPELTER
ANTIKOERPER-VERMITTELTER
NACHWEIS
(ELISA)
VON
ANTIGENEN
.
29
4.2.2.1
BESTIMMUNG
VON
ANTIKOERPERKONZENTRATIONEN
IN
HYBRIDOMUEBERSTAENDEN
.
29
4.2
2.2
BESTIMMUNG
VON
ZYTOKINKONZENTRATIONEN
IN
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
.
30
4.2.3
APOPTOSENACHWEIS
.
30
4.2.3.1
DNS-LEITER
.
30
4.2.3.2
HISTOGRAMM
.
31
4.2.3.3
DNS-FLUORESZENZFAERBUNG
.
32
4.3
BIOCHEMISCHE
METHODEN
.
32
4.3.1
AFIINITAETSCHROMATOGRAPHISCHE
ANTIKOERPERREINIGUNG
UEBER
PROTEIN
A
.
32
4.3.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
(PAGE)
.
33
4.3.2.1
PROBENAUFBEREITUNG
UND
GELLAUF.
.
33
4.3.2.2
SILBERFAERBUNG
.
34
4.3.3
PROTEINANALYSE
UEBER
WESTEMBLOT
.
35
4.3.3.1
ZELL-LYSE
.
35
4.3.3.2
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
UND
PROTEINBLOTTING
.
35
4.3.3.3
ANTIKOERPER-INKUBATION
UND
DETEKTION
.
36
4.3.3.4
AUSWERTUNG
.
37
4.4
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
37
4.4.1
ISOLIERUNG
VON
RNS
AUS
ZELLEN
.
37
4.4.2
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
38
4.4.3
REINIGUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
.
38
4.4.4
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
.
39
4.4.5
SEMIQUANTITATIVE
AUSWERTUNG
.
40
INHALTSVERZEICHNIS
VI
5
ERGEBNISSE
.
41
5.1
ETABLIERUNG
EINES
IN
VITRO
MODELLS
ZUR
T-ZELL-PRIMAERSTIMULIERUNG
UND
RESTIMULIERUNG
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
41
5.1.1
PRODUKTION
UND
TESTUNG
VON
ANTIKOERPERN
.
41
5.1.2
IMMOBILISIERUNG
VON
ANTIKOERPERN
AN
KULTURPLATTEN
.
41
5.1.3
HUMANE
T-LYMPHOZYTEN
ALS
MODELLZELLEN
.
42
5.1.4
OBERFLAECHENEXPRESSION
WICHTIGER
ANTIGENE
IM
VERLAUF
DER
T-ZELL-AKTIVIERUNG
.
45
5.1.4.1
CD3-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
45
5.1.4.2
CD28-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
46
5.1.5
VERSUCHSAUFBAU
FUER
PRIMAER
UND
RESTIMULIERUNGSEXPERIMENTE
.
47
5.1.6
ZUSAMMENFASSUNG
DES
MODELLAUFBAUS
.
49
5.2
INDUKTION
VON
ANERGIE
DURCH
HOCHDOSIS
ANTI-CD3-STIMULIERUNG
.
50
5.2.1
STIMULIERUNG
VON
KONTROLL-PBMZ
.
51
5.2.2
IMMOBILISIERTER
ANTI-CD3
INDUZIERT
KONZENTRATIONSABHAENGIG
ANERGIE
IN
RUHENDEN
T-ZELLEN
.
51
5.2.3
ANERGIE
UND
PROLIFERATION
.
55
5.2.4
PRAEVENTION
DER
ANTI-CD3-INDUZIERTEN
ANERGIE
DURCH
KOSTIMULI
WAEHREND
DER
PRIMAERSTIMULATION
.
57
5.2.5
BRECHUNG
DER
ANTI-CD3-INDUZIERTEN
ANERGIE
DURCH
KOSTIMULI
WAEHREND
DER
RESTIMULIERUNG
.
60
5.2.6
ANERGIE
IST
MIT
EINER
ERHOEHUNG
DES
ZELLTODS
ASSOZIIERT
.
61
5.2.7
ZUSAMMENFASSUNG
.
64
5.3
INDUKTION
DES
ZELLTODS
DURCH
APOPTOSE
.
65
5.3.1
KINETIK
DER
PROLIFERATION
UND
STERBLICHKEIT
.
65
5.3.2
APOPTOTISCHER
ZELLTOD
.
68
5.3.2.1
APOPTOTISCHE
DEGRADATION
DER
DNS
.
68
5.3.2.2
VERAENDERTER
DNS-GEHALT
DER
ZELLE
DURCH
APOPTOSE
.
70
5.3.2.3
APOPTOTISCHE
ZELLEN
IN
DER
DNS-FLUORESZENZFAERBUNG
.
72
5.3.3
ZUSAMMENFASSUNG
.
75
5.4
PRODUKTIVE VERSUS
ABORTIVE
PROLIFERATION
.
76
5.4.1
OBERFLAECHENEXPRESSION
VERSCHIEDENER
ANTIGENE
.
77
5.4.1.1
CD4/CD8-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
77
5.4.1.2
CD28/CTLA-4-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
79
INHALTSVERZEICHNIS
VII
5.4.1.3
B7-L/B7-2-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
81
5.4.1.4
CD95/CD95L-OBERFLAECHENEXPRESSION
.
83
5.4.2
EXPRESSION
VERSCHIEDENER
ZYTOKINE
.
86
5.4.2.1
INTERLEUKIN
2
.
88
5.4.2.2
INTERLEUKIN
4
.
90
S.4.2.3
INTERLEUKIN
6
.
92
S.4.2.4
TUMOR-NEKROSE-FAKTOR
A
.
94
5.4.3
ANALYSE
APOPTOSE-SUPPRIMIERENDER
INTRAZELLULARER
PROTEINE
.
96
5.4.3.1
BCL-2
.
96
5.4.3.2
BCL-XT
.
99
5.4.4
ZUSAMMENFASSUNG
.
101
6
DISKUSSION
.
103
6.1
IN
VITRO
MODELL
ZUR
T-ZELL-AKTIVIERUNG
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
.
103
6.2
INDUKTION
VON
ANERGIE
DURCH
HOCHDOSIS
ANTI-CD3-STIMULIERUNG
.
104
6.3
PRAEVENTION
UND
BRECHUNG
DER
ANERGIE
DURCH
KOSTIMULIERUNG
.
105
6.4
ANTI-CD3-INDUZIERTE
PROLIFERATION
UND
ASSOZIATION
VON
PROLIFERATION
UND
ANERGIE
.
107
6.5
INDUKTION
DES
ZELLTODS
WAEHREND
DER
T-ZELL-AKTIVIERUNG
.
109
6.6
ROLLE
DER
APOPTOSE
BEIM
ZELLTOD
.
110
6.7
MODELL
DER
PRODUKTIVEN
VERSUS
ABORTIVEN
PROLIFERATION
.
111
6.8
MECHANISMEN
DER
ANERGIE
UND
APOPTOSEINDUKTION
.
113
6.9
AUSBLICK
.
121
7
LITERATUR
.
122
8
ANHANG
.
133
8.1
ABKUERZUNGEN
.
133
8.2
FORMELN
.
136
8.3
DANKSAGUNG
.
137
8.4
LEBENSLAUF.
.
138 |
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