Analytische Untersuchungen zum Einsatz von Hyaluronidase als Adjuvans in der Krebschemotherapie: quantitative Bestimmung und Pharmakokinetik von Hyaluronidase, Melphalan und Vinblastin
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| adam_text | L ANALYTISCHE UNTERSUCHUNGEN ZUM EINSATZ VON HYALURONIDASE ALS ADJUVANS
IN DER KREBSCHEMOTHERAPIE QUANTITATIVE BESTIMMUNG UND PHARMAKOKINETIK
VON HYALURONIDASE, MELPHALAN UND VINBLASTIN DISSERTATION ZUR ERLANGUNG
DES DOKTORGRADES DER NATURWISSENSCHAFTEN (DR. RER. NAT.) AN DER
NATURWISSENSCHAFTLICHEN FAKULTAET IV - CHEMIE UND PHARMAZIE - UNIVERSITAET
REGENSBURG VORGELEGT VON INGO MUCKENSCHNABEL 1997 1 EINLEITUNG 1 1.1
MELPHALAN 1 1.1.1 DIE ISOLIERTE EXTREMITAETENPERFUSION 2 1.1.2 MELPHALAN
ALS STANDARDTHERAPEUTIKUM BEI DER ISOLIERTEN EXTREMITAETENPERFUSION 2 1.2
VINCA-ALKALOIDE 3 1.2.1 WIRKMECHANISMUS DER VINCA-ALKALOIDE 3 1.3
BARRIEREN SOLIDER TUMOREN . .... 4 1.4 DIE EXTRAZELLULAERE MATRIX 6 1.4.1
SYNTHESE, STRUKTUR UND FUNKTION VON HYALURONSAEURE 6 1.4.2 DIE ROLLE DER
EXTRAZELLULAEREN MATRIX BEI DER METASTASIERUNG 7 1.4.2.1 DIE FUNKTION VON
HYALURONSAEURE IM TUMORSTROMA 7 1.4.2.2 DIE FUNKTION VON HYALURONSAEURE
BEI DER MIGRATION VON TUMORZELLEN 8 1.4.2.3 DIE PERIZELLULAERE MATRIX VON
TUMORZELLEN 9 1.5 HYALURONIDASEN 9 1.5.1 EINTEILUNG DER HYALURONIDASEN 9
1.5.2 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET VON HYALURONIDASE 10 1.5.3 ENDOGENE
HYALURONIDASEN 11 1.5.4 BOVINE TESTIKULAERE HYALURONIDASE (BTH) 11 1.5.5
KLINISCHE ANWENDUNG BOVINER TESTIKULAERER HYALURONIDASE 12 2 ZIELSETZUNG
.- 12 3 ERGEBNISSE UND DISKUSSION 14 3.1 QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON
VINBLASTIN MITTELS HPLC 14 3.1.1 OPTIMIERUNG DER DETEKTIONSBEDINGUNGEN
14 3.1.2 LINEARITAET UND REPRODUZIERBARKEIT 16 3.1.3 INTERNER STANDARD
DER HPLC-METHODE 19 3.1.4 VERGLEICH VON VINBLASTIN-KALIBRIERSTANDARDS
AUS ZWEI UNABHAENGIGEN LABORATORIEN 22 3.1.5 WIEDERFINDUNGSRATEN 23
3.1.5.1 WIEDERFINDUNG DER ANALYTEN AUS FCS (FETAL CALF SERUM) ;. 23
3.1.5.2 .WIEDERFINDUNGSRATEN DER ANALYTEN BEI DER ENTFERNUNG DES
EXTRAKTIONSLOESUNGSMITTELS.. 25 3.2 BESTIMMUNG VON VINBLASTIN IN
GEWEBEPROBEN 26 3.3 BESTIMMUNG VON VINBLASTIN IN FCS 27 3.4
MINIATURISIERTES MODEL FUER DIE ISOLIERTE EXTREMITAETENPERFUSION
TUMORTRAGENDER RATTEN MIT VIN- BLASTIN . 29 3.5 VERTEILUNG VON
VINBLASTIN IN NMRI-MAEUSEN NACH I.V. INJEKTION 32 3.6
VINBLASTINKONZENTRATION IM PLASMA VON NMRI-NACKTMAEUSEN NACH I.V.
INJEKTION UEBER DEN RETRO- BULBAEREN VENENPLEXUS 34 3;7 ENDOGENE
HYALURONSAEURE HUMANER TUMOREN IN NACKTMAEUSEN 35 3.8 BESTIMMUNG DER
HYALURONIDASEAKTIVITAET 38 3.8.1 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET ENDOGENER
HYALURONIDASE 38 3.8.2 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET VON APPLIZIERTER BOVINER
TESTIKULAERER HYALURONIDASE 39 3.8.3 BESTIMMUNG DER AKTIVITAET VON
HYALURONIDASE MIT DER MORGAN-ELSON REAKTION 42 3.8.4 ENDOGENE
HYALURONIDASE IN MURINEM UND HUMANEM PLASMA 47 3.8.5 ENDOGENE
HYALURONIDASE IM PLASMA VON GESUNDEN UND VON TUMORPATIENTEN 49 3.8.6
ENDOGENE HYALURONIDASE IN NACKTMAEUSEN 51 3.8.7 ENDOGENE HYALURONIDASE IN
SK-MEL-3 TUMOREN 52 3.9 PHARMAKOKINETIK VON HYALURONIDASE IN NMRI-MAEUSEN
53 3.9.1 PHARMAKOKINETIK VON HYALURONIDASE IM PLASMA VON NMRI-MAEUSEN 54
3.9.2 PHARMAKOKINETIK VON HYALURONIDASE IM MUSKELGEWEBE VON NMRI-MAEUSEN
56 3.9.3 PHARMAKOKINETIK VON HYALURONIDASE IN DER LEBER VON NMRI-MAEUSEN
57 3.9.4 PHARMAKOKINETIK VON HYALURONIDASE IN DER NIERE VON NMRI-MAEUSEN
58 3.9.5 VERTEILUNG VON HYALURONIDASE IM TUMOR UND MUSKEL VON
NMRI-NACKTMAEUSEN 61 3.10 KOMBINATION VON HYALURONIDASE UND VINBLASTIN IN
DER BEHANDLUNG VON SK-MEL-5 TUMORTRA- GENDEN NACKTMAEUSEN 63 3.11
INJEKTION VON HYALURONIDASE IN DIE SCHWANZVENE UND IN DEN RETROBULBAEREN
VENENPLEXUS VON NACKTMAEUSEN 67 3.12 KOMBINATION VON HYALURONIDASE MIT
VINBLASTIN ZUR BEHANDLUNG SK-MEL-3 TUMORTRAGENDER NACKTMAEUSE 68 3.12.1
VINBLASTINKONZENTRATION IM TUMOR 68 3.12.2 VINBLASTINKONZENTRATION IN
DER LEBER 69 3.12.3 VINBLASTINKONZENTRATION IM MUSKEL 70 3.13 EINFLUSS
DER EINWIRKZEIT VON SUBKUTAN VERABREICHTER HYALURONIDASE AUF DIE
VINBLASTINKONZENTRA- TION 71 3.13.1 VINBLASTINKONZENTRATION IM TUMOR 71
3.13.2 VINBLASTINKONZENTRATION IN DER LEBER 72 3.13.3
VINBLASTINKONZENTRATION IM MUSKEL 73 3.14 EINFLUSS VON INTRAMUSKULAER UND
INTRAPERITONEAL VERABREICHTER HYALURONIDASE AUF DIE VINBLASTIN-
KONZENTRATION IN SK-MEL-3 TUMOREN *. 73 3.15 DRUG-MONITORING BEI DER
ISOLIERTEN EXTREMITAETENPERFUSION MIT MELPHALAN 76 4 ZUSAMMENFASSUNG 80 5
EXPERIMENTELLER TEIL 82 5.1 ABKUERZUNGEN 82 5.2 GERAETE 82 5.3 MATERIALIEN
83 5.3.1 LOESUNGSMITTEL 83 5.3.2 LOESUNGEN FUER DIE KOLORIMETRISCHE
BESTIMMUNG DER AKTIVITAET VON HYALURONIDASE 83 5.3.3 MEDIEN FUER DIE
ZELLKULTUR 83 5.3.4 CHEMIKALIEN 83 5.4 ARBEITSVORSCHRIFTEN 84 5.4.1
QUANTITATIVE BESTIMMUNG VON MELPHALAN MITTELS HPLC 84 5.4.2 QUANTITATIVE
BESTIMMUNG VON VINBLASTIN MITTELS HPLC 84 5.4.2.1 ABSORPTIONSSPEKTREN
VON VINBLASTIN UND N-DEFORMYLVINCRISTIN 85 5.4.2.2 LINEARITAET DER
HPLC-METHODE 85 5.4.2.3 PROBENVORBEREITUNG FUER DIE HPLC-ANALYTIK 86
5.4.2.3.1 PERFUSAT-UND PLASMAPROBEN 86 5.4.2.3.1.1 PROBENVORBEREITUNG
MIT EXTRAKTIONSSAEULEN 86 5.4.2.3.1.2 PROBENVORBEREITUNG DURCH
ACETONITRILFAELLUNG 86 5.4.2.3.2 GEWEBEPROBEN 88 5.4.2.4 HERSTELLUNG DER
VINBLASTIN-STAMMLOESUNGEN FUER DIE TIERVERSUCHE 88 5.4.3 BESTIMMUNG DER
HYALURONIDASEAKTIVITAET 89 5.4.3.1 VORBEREITUNG DER PROBEN AUS
BIOLOGISCHEM MATERIAL ZUR BESTIMMUNG DER HYALURONIDA- SEAKTIVITAET 89
5.4.4 HYALURONSAEUREBESTIMMUNG MIT DEM PHARMACIA HA TEST 90 5.4.5
VORBEREITUNG DER GEWEBEPROBEN FUER DIE BESTIMMUNG VON HYALURONSAEURE 90
5.4.6 PROTEINBESTIMMUNG NACH BRADFORD 90 5.4.7 TUMORMODELL MIT SOLIDEN
HUMANEN MELANOMEN 91 5.4.7.1 ZUECHTUNG DER VERSUCHSTIERE 91 5.4.7.2
ETABLIERUNG SOLIDER MENSCHLICHER TUMOREN IN NACKTMAEUSEN 91 5.4.8
DURCHFUEHRUNG DER ISOLIERTEN EXTREMITAETENPERFUSION AM NACKTRATTENMODEL 91
5.4.9 GELELEKTROPHORESE 91 5.4.9.1
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE(PAGE) 91 5.4.9.2 ELEKTROPHORESE MIT
NATIVEN GELEN 92 5.4.9.3 SUBSTRATGELELEKTROPHORESE 92 6
LITERATURVERZEICHNIS 94
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