Untersuchungen zur Biosynthese zyklischer Bis(bibenzyle) in Marchantia polymorpha L.:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1998
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A.
EINLEITUNG
.
1
B.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
23
1.
PFLANZLICHES
MATERIAL
.
23
2.
GERAETE
.
24
3.
CHEMIKALIEN
.
25
4.
SYNTHESEN
.
26
4.1
SYNTHESE
VON
3,4
'-DIBENZYLSTIIBEN
.
26
4.2
SYNTHESE
VON
3,4'-DIHYDROXYSTILBEN
.
28
4.3
SYNTHESE
VON
LUNULARIN
.
28
4.4
SYNTHESE
VON
LUNULARSAEURE
.
29
5.
EXTRAKTIONSVERFAHREN
.
30
5.1
EXTRAKTION
VON
HYDRANGEA
MACROPHYLLA-WURZELN
.
30
5.2
EXTRAKTION
VON
ZELLSUSPENSIONSKULTUR
.
31
5.3
EXTRAKTION
VON
THALLI
.
31
6.
APPLIKATIONSEXPERIMENTE
.
32
6.1
APPLIKATIONEN
AN
ZELLKULTUR
UND
THALLI
.
32
6.2
AUFARBEITUNG
DER
GEWEBE
.
32
6.3
BESTIMMUNG
DER
EINBAURATE
.
33
7.
HERSTELLUNG
ZELLFREIER
ENZYMPRAEPARATIONEN
.
33
7.1
AUFSCHLUSS
ZUR
GEWINNUNG
MEMBRANGEBUNDENER
ENZYME
.
33
7.2
AUFSCHLUSS
ZUR
GEWINNUNG
LOESLICHER
ENZYME
.
34
7.3
AUFSCHLUSS
ZUR
ISOLIERUNG
VON
INTAKTEN
ORGANELLEN
.
34
7.4
AUFTRENNUNG
VON
ROHORGANELLEN
UEBER
SACCHAIOSE-DICHTEGRADIENTEN-ZENTRIFTIGATION35
8.
ENZYMTESTS
.
36
8.1
P-CUMAROYL-COA-LIGASE
.
36
8.2
NADPH-ABHAENGIGE
CYTOCHROM
C-REDUKTASE
.
37
9.
CHROMATOGRAPHISCHE
METHODEN
.
38
9.1
DUENNSCHICHT-CHROMATOGRAPHIE
.
38
9.2
PAPIERCHROMATOGRAPHIE
.
39
9.3HPLC
.
40
10.
PROTEINBESTIMMUNG
.
41
11.
RADIOAKTIVITAETSBESTIMMUNG
.
41
12.
SPEKTROSKOPISCHE
METHODEN
.
42
12.1
KEMRESONANZ-SPEKTROSKOPIE
.
42
12.2
MASSENSPEKTROSKOPIE
.
42
13.
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
42
C.
ERGEBNISSE
.
44
1.
UNTERSUCHUNG
UND
IDENTIFIZIERUNG
DER
INHALTSSTOFFE
IN
MARCHANTIA
POLYMORPHA
PFLAN
ZENMATERIAL
.
44
1.1
NACHWEIS
UND
ISOLIERUNG
VON
PRAELUNULARSAEURE
IN
DER
ZELLKULTUR
.
44
1.2
IDENTIFIZIERUNG
ZYKLISCHER
BIS(BIBENZYLE)
IN
DER
ZELLKULTUR
.
47
1.3
IDENTIFIZIERUNG
ZYKLISCHER
BIS(BIBENZYLE)
IN
DER
GANZPFLANZE
.
49
2.
ELICITIERUNG
VON
MARCHANTIA
POLYMORPHA-ZELLKULTUR
.
50
2.1
WIRKUNG
VON
BIOTISCHEN
UND
ABIOTISCHEN
ELICITOREN
.
50
2.2
ELICITIERUNG
MIT
CD
2+
-IONEN
.
53
2.3
EINFLUSS
VON
CD
2+
-IONEN
AUF
DEN
EINBAU
VON
L-[U
L4
C]PHENYLALANIN
IN
VERSCHIEDENE
INHALTSSTOFFE
DER
ZELLKULTUR
.
57
3.
APPLIKATIONSEXPERIMENTE
ZUR
IN
VIVO
UNTERSUCHUNG
DER
BIOSYNTHESE
ZYKLISCHER
BIS(BIBENZYLE)
.
61
3.1
APPLIKATION
POTENTIELLER
VORSTUFEN
AN
DIE
ZELLKULTUR
.
61
3.2
BEEINFLUSSUNG
DES
ZELLKULTURWACHSTUMS
MIT
GLYPHOSAT
.
63
3.2.1
BESTIMMUNG
DER
GEEIGNETEN
GLYPHOSATKONZENTRATION
.
65
3.2.2
BESTIMMUNG
DER
BENOETIGTEN
AMINOSAEUREKONZENTRATION
.
66
3.2.3
APPLIKATION
VON
L-[U
CJPHENYLALANIN
IN
VERBINDUNG
MIT
GLYPHOSAT
.
68
3.3
APPLIKATION
VON
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
VORSTUFEN
AN
THALLI
VON
MARCHANTIAPOLY
RNORPHA
L
.
69
3.3.1
ISOLIERUNG
VON
[L,L
'
,2
'
,3
'
,4
'
,5
'
,6
'
,7,8
L4
C]PRAELUNULARSAEURE
AUS
DER
ZELL
SUSPENSIONSKULTUR
.
70
3.3.2
SYNTHESE
VON
[L,R,2
'
,3
'
,4
'
,5
'
6
'
,7,8
14
C]LUNULAISAEURE
AUS
[L,L
'
,2
'
3
'
,4
'
,5
'
,6
'
,7
8-'
4
C]PRAELUNULARSAEURE
.
72
3.3.3
SYNTHESE
VON
[U
L4
C]P-CUMARSAEURE
AUS
L-[U
14
C]TYROSIN
.
74
3.3.4
SYNTHESE
VON
[U
14
C]DIHYDRO-P-CUMARSAEURE
AUS
[U
L4
C]P-CUMARSAEURE
.
75
3.3.5
APPLIKATION
RADIOAKTIV
MARKIERTER
VORSTUFEN
AN
THALLI
.
75
3.4
APPLIKATION
13
C-MARKIERTER
VORSTUFEN
AN
THALLI
VON
MARCHANTIAPOLYMORPHA
L.
.80
3.4.1
13
C-NMR-SPEKTRUM
VON
MARCHANTIN
A
.
80
3.4.2
APPLIKATION
VON
L-[
13
COOH]PHENYLALANIN
.
83
3.4.3
APPLIKATION
VON
[2
3
C]ACETAT
.
86
3.4.4
APPLIKATION
VON
[3,5
13
C]DIHYDRO-P-CUMARSAEURE
.
89
4.
ENZYMATISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BIOSYNTHESE
ZYKLISCHER
BIS(BIBENZYLE)
.
96
4.1
ENZYMATISCHE
UNTERSUCHUNG
ZUR
BILDUNG
VON
PRAELUNULARSAEURE
.
96
4.1.1
ISOLIERUNG
VON
ZIMTSAEURE-COA-LIGASE
AUS
PSEUDOMONAS
PUTIDA
.
97
4.1.2
SYNTHESE
DER
COA-ESTER
VON
P-CUMARSAEURE,
DIHYDRO-P-CUMARSAEURE
UND
.
[U
L4
C]DIHYDRO-P-CUMARSAEURE
.
100
4.1.2.1
SYNTHESE
VON
P-CUMAROYL-COA
.
100
4.1.2.2
SYNTHESE
VON
DIHVDRO-P-CUMAROYL-COA
.
101
4.1.2.3
SYNTHESE
VON
[U
'
4
C]DIHYDRO-P-CUMAROYL-COA
.103
4.1.3
VERGLEICH
DES
SPEKTROSKOPISCHEN
VERHALTENS
DER
COA-ESTER
.
104
4.1.4
UNTERSUCHUNG
DER
BIOSYNTHESE
VON
PRAELUNULARSAEURE
ANHAND
EINER
ZELLFREIEN
ENZYMPRAEPARATION
.
107
4.2
ENZYMATISCHE
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
BILDUNG
VON
LUNULARSAEURE
.
112
4.3
ENZYMATISCHE
DECARBOXYLIERUNG
VON
LUNULARSAEURE
.
117
4.3.1
NACHWEISMOEGLICHKEIT
DER
ENZYMAKTIVITAET
IN
ZELLSUSPENSIONSKULTUR
.
117
4.3.2
PRODUKTCHARAKTERISIERUNG
.
120
4.3.3
PH-OPTIMUM
.
123
4.3.4
TEMPERATUROPTIMUM
.125
4.3.5
SUBSTRATABHAENGIGKEIT
.
127
4.3.6
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
LOKALISATION
DES
ENZYMS
MITTELS
SACCHAROSE-DICHTEGRA
DIENTEN-ZENTRIFIIGATION
UND
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
.
129
4.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
ENZYMKATALYSIERTEN PHENOLKOPPLUNG
VON
LUNULARSAEURE
ZU
ZYKLISCHEN
BIS(BIBENZYLEN)
.
136
4.4.1
SYNTHESE
VON
[L,L
'
^
,
,3
'
,4
'
,5
'
,6
'
,7,8
M
C]LUNULARIN
.
136
4.4.2
NACHWEIS
DER
ENZYMAKTIVITAET
UND
BESTIMMUNG
DES
GEEIGNETEN
SUBSTRATES.
137
4.4.3
LOKALISIERUNG
DES
ENZYMS
.
139
4.4.4
PRODUKTCHARAKTERISIERUNG
.
143
4.4.5
PH-OPTIMUM
.145
4.4.6
COFAKTORABHAENGIGKEITEN
.
147
4.4.7
CHARAKTERISIERUNG
DER
ENZYME
ALS
CYTOCHROM
P450-ENZYME
.
152
4.4.7.1
CYTOCHROM
P450-HEMMSTOFFE
.152
4.4.7.2
PHOTOREVERSIBLE
HEMMUNG
MIT
EINEM
CO/OJ-GASGEMISCH
.
155
4.4.8
NACHWEIS
VON
CYTOCHROM
P450
UND
NADPH-ABHAENGIGER
CYTOCHROM
C
REDUKTASE
IN
DER
AKTIVEN
BANDE
DES
DICHTEGRADIENTEN
.
157
D.
DISKUSSION
.
160
E.
ZUSAMMENFASSUNG
.185
F.
LITERATUR
.188 |
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| topic_facet | Diphenylethan 1,2- Biosynthese Marchantia Hochschulschrift |
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