Charakterisierung des Aktin-bindenden Proteins Insertin:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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| Beschreibung: | 143 S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
16
11.
CHEMIKALIEN
16
12.
ENZYME
17
2.2.1
RESTRIKTIONSENZYME
17
2.2.2
SONSTIGE
ENZYME
17
13
ANTIKOERPER
17
14
HAEUFIG
VERWENDETE
LOESUNGEN
UND
PUFFER
18
15
VEKTOREN
19
16
BAKTERIEN
20
17
OLIGONUKLEOTIDE
20
18
BIOLOGISCHES
MATERIAL
21
2.8.1
KANINCHEN
21
2.8.2
HUEHNERMAEGEN
21
2.8.3
ZELLEN
21
3.
METHODEN
22
3.1
ANALYTISCH-BIOCHEMISCHE
METHODEN
22
3.1.1
PROTEINBESTIMMUNG
22
3.1.2
FAERBEMETHODEN
22
3
1.2.1
PROTEINE
22
3.1.2.2
DNA
22
3.1.3
GELELEKTROPHORESE
23
3.1.3.1
PROTEINE
23
3.1.3.2
NUKLEINSAEUREN
23
3.1.3.2.1
RNA
23
3.1.3.2.2
DNA
24
3.1.3.2.3
EXTRAKTION
VON
DNA
AUS
AGAROSEGELEN
24
3.1.4
HPLC
VON
PROTEINEN
24
3.1.5
AMINOSAEURESEQUENZIERUNG
25
3.1.6
PROTEOLYTISCHER
VERDAU
VON
PROTEINEN
25
3.1.7
CARBOXYMETHYLIERUNG
VON
PROTEINEN
26
3.1.8
MASSENSPEKTROMETRIE
27
3.1.8.1
MALDI-TOF
27
3.1.8.2
MALDI-PSD
28
3.2
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
29
3.2.1
WESTEM-BLOT
29
33
PRAEPARATION
VON
PROTEINEN
30
3.3.1
GEWEBEEXTRAKT
30
3.3.2
AKTIN
30
3
3.3
INSERTIN
33
3.3.4
TROPOMYOSIN
34
3.4.
MIKROBIOLOGISCHE
METHODEN
35
3.4.1
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
BAKTERIEN
35
3.4.2
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
35
3
4.3
LAGERUNG
VON
BAKTERIEN
35
3.5
MOLEKNLARBIOLOGISCHE
METHODEN
36
3.5.1
PRAEPARATION
VON
NUKLEINSAEUREN
36
3.5.1.1
RNA
36
3.5.1.1.1
TOTAL-RNA
36
3
5.1.1.2
MRNA
37
3.5.1.2
GENOMISCHE
DNA
38
3
5
1.3
PLASMID-DNA
38
3.5.1.4
PHAGEN-DNA
39
3
5
.2
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
40
3.5.3
RESTRIKTION
VON
NUKLEINSAEUREN
40
3.53.1
GENOMISCHE
DNA
40
3
5.3.2
PLASMIDE
UND
DNA-FRAGMENTE
41
3.5.4
SYNTHESE
VON
ERSTSTRANG-CDNA
41
3.5.5
AMPLIFIKATION
VON
DNA
MITTELS
POLYMERASE
CHAIN
42
REACTION
(PCR)
3.5.5.1
PRIMER-DESIGN
42
3.5.52
STANDARD-PCR
43
3
5.5.3
OPTIMIERUNGEN
DER
PCR
45
3
5.5.4
NESTEDPCR
45
3.5.55
RACE-PCR
45
3.5.6
MODIFIKATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
47
3.5
6.1
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
47
3
5.6.2
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
DIGOXIGENIN
47
3.5.6.3
MARKIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
MIT
DIGOXIGENIN
47
3.5.7
SCREENING
VON
CDNA-BIBLIOTHEKEN
47
3.5.8
TRANSFER
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
NYLONMEMBRAN
48
3.5.9
DETEKTION
IMMOBILISIERTER
NUKLEINSAEUREN
48
3.5.9.1
HYBRIDISIERUNG
48
3
5.9
2
NICHTRADIOAKTIVER
NACHWEIS
49
3.5.10
SEQUENZIERUNG
VON
DNA
49
3.5.11
DATENERFASSUNG
UND
-VERARBEITUNG
50
EXPRESSION
DES
REKOMBINANTEN
INSERTINS
50
3.6.1
GST-TRANSFERASE-FUSIONSPROTEINE
51
3.6.2
MALTOSEBINDUNGSPROTEIN-FUSIONSPROTEINE
52
3
6.3
HIS-TAG-FUSIONSPROTEINE
52
FLUORESZENZSPEKTROSKOPISCHE
METHODEN
52
3.7.1
HERSTELLUNG
VON
F-AKTIN
53
53
3.7.2
AKTINVERZOEGERUNGSTEST
3.7.3
MESSUNGEN
AN
GESCHERTEN
FILAMENTEN
54
3.7.3.1
INSERTIN-AKTINFILAMENTE
54
3.7.3.2
TROPOMYOSIN-AKTINFILAMENTE
55
4.
ERGEBNISSE
56
4.1
MOLEKULARBIOLOGISCHE
CHARAKTERISIERUNG
VON
INSERTIN
56
4.2
EXPRESSION
VON
INSERTIN
71
43
BESTIMMUNG
DES
N-TERMINUS
VON
INSERTIN
82
4.4
NACHWEIS
VON
INSERTIN
UND TENSIN
IN
GEWEBE UND
ZELLEN
93
4.5
EINFLUSS
VON
INSERTIN
UND
TROPOMYOSIN
AUF
DAS
ANNEALING
GESCHERTER
AKTINFILAMENTE
95
5.
DISKUSSION
113
6.
ZUSAMMENFASSUNG
129
7.
LITERATURVERZEICHNIS
131
8.
ANHANG
140
8.1
ABKUERZUNGEN
DER
AMINOSAEUREN
140
8.2
PRIMER
141
8.3
VEKTORKARTEN
142 |
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