Regulation des aktivierungsinduzierten Zelltodes in T-Lymphozyten:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
I. EINLEITUNG.1-14
1. ZELLEN DES IMMUNSYSTEMS.1
1.1 DIE MYELOISCHE REIHE.1
1.2 DIE LYMPHATISCHE REIHE.1
2. T-LYMPHOZYTEN. 2
2.1 DER T-ZELL-REZEPTOR-KOMPLEX UND ASSOZIIERTE MOLEKUELE. 2
2.2 SIGNAL-TRANSDUKTION IN T-ZELLEN.4
2.3 SRC-KINASEN IN T-LYMPHOZYTEN.5
2.4 T-ZELL-AKTIVIERUNG.5
3. ZELLTOD.6
3.1 PROGRAMMIERTER ZELLTOD (APOPTOSE).6
3.2 APOPTOSE IN REIFEN T-LYMPHOZYTEN.7
3.3 ROLLE VON SUPERANTIGENEN UND KONVENTIONELLEN ANTIGENEN IN DER
APOPTOSE.8
4. DAS CD95/CD95L-SYSTEM.10
4.1 DIE REZEPTOREN UND IHRE LIGANDEN.10
4.2 DIE SIGNALUEBERMITTLUNG DURCH CD95. 11
4.3 AICD UND CD95-INDUZIERTE APOPTOSE.13
II. FRAGESTELLUNG.15
III. MATERIAL UND METHODEN.16-39
1. MATERIAL.16
1.1 MEDIEN.16
1.2 ZYTOKINE UND FAKTOREN.16
1.3 PUFFER UND LOESUNGEN.17
1.4 RADIOAKTIVE REAGENZIEN.21
1.5 PROTEIN-MOLEKULARGEWICHTS-STANDARDS.21
1.6 ANTIKOERPER UND FUSIONSPROTEINE. 22
1.7 INHIBITOREN.23
1.8 OLIGONUKLEOTIDE.23
1.9 TEST-KITS.24
1.10 MEMBRANEN UND FILTER. 24
1.11 SONSTIGES.24
1.12 GERAETE. 24
I
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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2. METODEN.25
2.1 ZELLULAERE METHODEN.25
2.1.1 ISOLIERUNG MONONUKLEAERER ZELLEN AUS PERIPHEREM BLUT.25
2.1.2 BESTIMMUNG DER ZELLZAHL UND ZELLVITALITAET.25
2.1.3 TRENNUNG VON MONOZYTEN UND LYMPHOZYTEN MITTELS ADHAERENZ.26
2.1.4 TRENNUNG VON T- UND B-ZELLEN.26
2.1.5 KRYOKONSERVIEREN VON ZELLEN.27
2.1.6 ANLEGEN VON EBV-TRANSFORMIERTEN B-ZELL-LINIEN.27
2.1.7 KLONIERUNG VON T-ZELLEN.27
2.1.8 ANLEGEN ALLOANTIGEN-SPEZIFISCHER ZELL-LINIEN.27
2.1.9 ANLEGEN ANTIGEN-SPEZIFISCHER ZELL-LINIEN.28
2.1.10 ZELLSEPARATION MIT DEM MAGNET-AKTIVIERTEN ZELLSORTER (MACS).28
2.1.11 PROLIFERATIONSTEST (
3H-THYMIDIN-EINBAU).29
2.1.12 BEHANDLUNG VON T-ZELL-KLONEN MIT KINASE-INHIBITOREN.29
2.1.13 IMMUNFLUORESZENZ.30
2.2 PROTEINBIOCHEMISCHE METHODEN.32
2.2.1 SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE (SDS-PAGE).32
2.2.2 WESTEM-BLOT-ANALYSE.33
2.2.3 AUFREINIGUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER. 34
2.2.4 MARKIERUNG MONOKLONALER ANTIKOERPER.34
2.3 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN.36
2.3.1 CDNA-SYNTHESE.36
2.3.2 RNA-AUFREINIGUNG AUS SUSPENSIONSZELLKULTUREN.36
2.3.3 POLYMERASE-KETTEN-REAKTION (PCR).36
2.3.4 AGAROSE-GELELEKTROPHORESE.38
2.3.5 SOUTHERN-BLOT (KAPILLARBLOT).38
2.3.6 HYBRIDISIERUNG MIT NICHT-RADIOAKTIVEN PROBEN.38
IV. ERGEBNISSE
.40-73
1. CHARAKTERISIERUNG DER VERWENDETEN ZELL-LINIEN UND KLONE.40
1.1 ANTIGEN-SPEZIFISCHE ZELL-LINIEN.40
1.2 T-ZELL-KLONE MIT UNBEKANNTER ANTIGEN-SPEZIFITAET.40
2. ANALYSEN DER AKTIVIERUNG UND DEAKTIVIERUNG ANTIGEN-SPEZIFISCHER
LINIEN.41
2.1 ANTIGEN-SPEZIFISCHER ZELLTOD BEI T-LYMPHOZYTEN.41
2.2 ANTIGEN-SPEZIFISCHE PROLIFERATION BEI T-LYMPHOZYTEN.42
3. ZELLTOD VON NICHT ANTIGEN-SPEZIFISCHEN T-ZELL-KLONEN:
AICD UND FAS-INDUZIERTE APOPTOSE.43
II
3.1 ROLLE VON TYROSIN-KINASEN BEI AICD BZW. ANTI-CD95-INDUZIERTER
APOPTOSE.44
3.1.1 WIRKUNG VON HERBIMYCIN A AUF DIE TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG.44
3.1.2 WIRKUNG VON HERBIMYCIN A AUF DIE VITALITAET VON KLON-ZELLEN.45
3.1.3 WIRKUNG VON HERBIMYCIN A AUF AICD UND CD95-INDUZIERTE APOPTOSE.47
3.1.4 EFFEKT VON HERBIMYCIN A AUF DIE DNA-FRAGMENTIERUNG.50
3.2 ROLLE DER FASL-EXPRESSION BEI AICD.52
3.2.1 INHIBITION DER FASL-MRNA-LNDUKTION DURCH HERBIMYCIN A.52
3.2.2 INHIBITION DER FASL-OBERFLAECHENEXPRESSION DURCH HERBIMYCIN A.52
3.3 INHIBITION VON SIGNALWEGEN BEIM AICD UND DER FAS-ABHAENGIGEN
APOPTOSE.53
3.3.1 EFFEKT VON KINASE-INHIBITOREN AUF AICD UND FAS-INDUZIERTER
APOPTOSE.53
3.3.2 INHIBITION VON ICE DURCH YVAD-CMK.54
3.3.3 INHIBITION DER CD95-INDUZIERTEN APOPTOSE.55
4. AICD-SUSZEPTIBILITAET UND -RESISTENZ VON T-ZELL-KLONEN.56
4.1 AICD-SENSITIVITAET UND -RESITENZ.~.56
4.2 TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG.58
4.3 FASL-EXPRESSION.60
4.3.1 FASL-MRNA-EXPRESSION BEI AICD.60
4.3.2 FASL-OBERFLAECHENEXPRESSION.61
5. INHIBITION VON AICD DURCH MONOKLONALE ANTI-CD4 ANTIKOERPER.63
5.1 INHIBITION VON ZELLTOD UND DNA-FRAGMENTIERUNG.63
5.2 KINETIK DER ANTI-CD4-INDUZIERTEN INHIBITION DES AICD.64
5.3 INHIBITION DER FASL-OBERFLAECHENEXPRESSION DURCH ANTI-CD4 MAK.65
5.4 INHIBITION DER FASL-MRNA DURCH LIGATION VON CD4.66
5.5 WIRKUNG VON ANDEREN CD4 BINDENDEN LIGANDEN AUF TCR/CD3-INDUZIERTEN
ZELLTOD.67
5.6 EINFLUSS VON ANTI-CD4 AUF CD95-INDUZIERTEN ZELLTOD. 69
5.7 EINFLUSS VON ANTI-CD4 AUF ANDERE AKTIVIERUNGS-PARAMETER IN
T-ZELLEN.70
5.8 CD4-LNHIBITION VON AICD BEI LANGZEIT-KLONEN UND POLYKLONALEN
LINIEN.71
5.9 CD4-LNHIBITION VON AICD BEI KUIZZEIT-KLONEN.73
V. DISKUSSION.74-89
1. AKTIVIERUNGSINDUZIERTER ZELLTOD IN PERIPHEREN T-LYMPHOZYTEN.74
2. DIE ROLLE DER TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG IN AICD UND CD95-INDUZIERTER
APOPTOSE.75
3. DIE ROLLE DER FASL-MRNA- UND FASL-EXPRESSION BEI TCR/CD3-INDUZIERTEM
ZELLTOD.79
4. RESISTENZ UND SUSZEPTIBILITAET GEGENUEBER AICD IN T-ZELL-KLONEN.80
5. INHIBITION DER CD95-INDUZIERTEN APOPTOSE.81
6. EINFLUSS DES CD4-KOREZEPTORS AUF DIE INDUKTION VON AICD.83
6. EINFLUSS DES CD4-KOREZEPTORS AUF DIE INDUKTION VON AICD.83
7. SCHLUSSFOLGERUNG.89
III
VI. ZUSAMMENFASSUNG
90-91
VII. LITERATURVERZEICHNIS.92-109
ANHANG. 110-114
1. PUBLIKATIONSLISTE.110-112
2. LEBENSLAUF.113
3. DANKSAGUNG. 114
IV |
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