Humane Papillomviren des Typs 16 (HPV-16) bei Kindern: vergleichende Untersuchung über das Auftreten viraler DNA in Mund- und Genitalschleimhaut und die serologische Reaktivität gegen virusspezifische Peptide
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. ABKUERZUNGSVERZEICHNIS.1
2. EINLEITUNG .2
2.1 VIREN UND KREBS.2
2.2 LAESIONEN DURCH HUMANE PAPILLOMVIREN.2
23 WELTWEITE MEDIZINISCHE BEDEUTUNG VON HPV-INFEKTIONEN.3
2.4 HPV-TYPEN . 3
2.5 VERBREITUNG DER HUMANEN PAPILLOMVIREN.3
2.5.1 HPV BEI PATIENTEN MIT KLINISCH FESTSTELLBAREN LAESIONEN.3
2.5.2 HPV BEI KLINISCH UNAUFFAELLIGEN PERSONEN.4
2.5.3 SEXUELLE UEBERTRAGUNG.4
2.5.4 HPV BEI SCHWANGEREN.4
2.5.5 HPV BEI KINDERN.5
2.6 GENOM UND FUNKTIONEN DER GENABSCHNITTE VON HPV-16 IN DER ONKOGENESE
. .6
2.7 DIAGNOSTISCHE MARKER EINER HPV-INFEKTION .7
2.7.1 HYBRIDISIERUNGSMETHODEN: NACHWEIS VON DNA.7
2.7.2 SEROLOGISCHE METHODEN: NACHWEIS VON ANTIKOERPERN.7
3. ZIELSETZUNG DER ARBEIT.9
4. MATERIAL UND METHODEN.10
4.1 PROBENMATERIAL 10
4.1.1 UNTERSUCHUNGSGRUPPE.10
4.1.2 GEWINNUNG DER PROBEN.11
4.1.3 PROBENAUFBEREITUNG.11
4.2 MATERIAL FUER KONTROILPROBEN. 11
4.2.1 MATERIAL FUER DIE POSITIVKONTROLLEN.11
4.2.1.1 ZELHNISCHUNGEN MIT HPV-16-HALTIGEN ZELLEN.11
4.2.1.2 PROBEN MIT EXTRAHIERTER HPV-16-DNA.12
4.2.2 MATERIAL FUER DIE NEGATIVKONTROLLEN.12
43 POLYMERASE-KETTENREAKTION (PCR) .13
4.3.1 PRINZIP DER PCR.13
4.3.2 KOMPONENTEN FUER DIE POLYMERASE-KETTENREAKTION .14
4.3.2.1 PCR-PUFFER LOX.14
43.2.2 OLIGONUKLEOTID-PRIMER.14
4.3.23 DESOXYRIBONUKLEOTIDTRIPHOSPHATE (DNTP) 50X.15
43.2.4 TAQ-DNA-POLYMERASE.16
4.3.3 VORSICHTSMASSNAHMEN ZUR VERMEIDUNG EINER KONTAMINATION.16
4.3.4 VORBEREITUNG DER PROBEN FUER DIE PCR.17
4.3.5 REAKTIONSBEDINGUNGEN IN DER PCR.18
4.3.6 SS-GLOBIN-PCR.18
4.4 AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE.19
4.4.1 PRINZIP DER AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE.19
4.4.2 METHODIK DER AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE.19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
4.5 SOUTHERN-HYBRIDISIENING.21
4.5.1 PRINZIP DER SOUTHEM-HYBRIDISIERUNG.21
4.5.2 METHODIK DER SOUTHEM-HYBRIDISIERUNG.21
4.5.2.1 DENATURIERUNG DER DNA IM AGAROSEGEL.21
4.5.2.2DNA-TRANSFER AUF EINE NYLON-MEMBRAN (SOUTHEM-BLOT).21
4.5.2.3 RADIOAKTIVE MARKIERUNG DER OLIGONUKLEOTIDE
FUER DIE HYBRIDISIERUNG.22
4.5.2.4 VORHYBRIDISIERUNG, HYBRIDISIERUNG UND AUTORADIOGRAPHIE.23
4.6 ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA).25
4.6.1 PRINZIP DES ELISA.'.25
4.6.2 METHODIK DES ELISA.25
4.6.2.1 HPV-16-PEPTIDE. 25
4.6.2.2 BESCHICHTEN DER MIKROTITERPLATTEN MIT PEPTIDEN ("COATING").26
4.6.2.3 TESTUNG DER SEREN.27
4.7 STATISTISCHE METHODEN.28
4.7.1 FESTLEGUNG DER CUT-OFFS FUER DIE EXTINKTIONSWERTE DES ELISA
MIT DER BOX-PLOT-METHODE.28
4.7.2 VIERFELDERTAFEL UND CHIQUADRATTEST. 29
4.7.3 WILCOXON-RANGSUMMEN-TEST UND VERTEILUNGSFUNKTION.29
4.7.4 PEARSONSCHER KORRELATIONSKOEFFIZIENT.30
4.8 VERWENDETE GERAETE.31
5. ERGEBNISSE .32
5.1 ZUSAMMENSETZUNG DER TESTGRUPPE.32
5.2 UNTERSUCHUNG DER SCHLEIMHAUTABSTRICHE AUF HPV-16-DNA.33
5.2.1 ERMITTLUNG DER OPTIMALEN MGCL
2
-KONZENTRATION FUER DEN REAKTIONSANSATZ DER
PCR UND UEBERPRUEFUNG DER SENSITIVITAET DES NACHWEISES VON HPV-16-DNA . 33
5.2.2 DURCHFUEHRUNG DER SCHLEIMHAUTABSTRICH-UNTERSUCHUNGEN.35
5.2.3 UEBERPRUEFUNG DER AMPLIFIZIERBARKEIT DER DNA DES PROBENMATERIALS.36
5.2.4 HPV-16-DNA IN DER MUND- UND GENITALSCHLEIMHAUT VON 79 KINDERN.37
53 UNTERSUCHUNG DER REAKTIVITAET DER SEREN GEGEN HPV-16-PEPTIDE.39
5.3.1 DURCHFUEHRUNG DER SEROLOGISCHEN TESTS.39
5.3.2 REAKTIVITAET DER SEREN GEGEN HPV-16-PEPTIDE.40
5.4 STATISTISCHE AUSWERTUNG DER DATEN.48
5.4.1 VERGLEICH DER ERGEBNISSE DES HPV-16-NACHWEISES
IN VERSCHIEDENEN SCHLEIMHAUTREGIONEN.48
5.4.2 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN ALTER DER KINDER UND NACHWEIS
VON HPV-16-DNA.49
5.4.3 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN GESCHLECHT UND HPV-16-DNA-NACHWEIS.49
5.4.4 VERGLEICH DER ERGEBNISSE DES HPV-16-NACHWEISES
MIT DEN MESSWERTE DES ELISA.50
5.4.5 ZUSAMMENHANG ZWISCHEN ALTER DER KINDER UND SEROREAKTIVITAET
GEGEN HPV-16-PEPTIDE.51
5.4.6 BEZIEHUNGEN ZWISCHEN GESCHLECHT UND SEROLOGISCHER REAKTIVITAET
GEGEN HPV-16-PEPTIDE.57
5.4.7 VERGLEICH DER SEROLOGISCHEN REAKTIVITAET GEGEN HPV-16-PEPTIDE
ZWISCHEN DEN KINDERN UND DEN ERWACHSENEN DER HILFSGRUPPE.57
SEITE
6. DISKUSSION .63
6.1 EINFUEHRUNG .63
6.2 DISKUSSION DER METHODISCHEN VORGEHENSWEISEN.64
6.2.1 UNTERSUCHUNG DER SCHLEIMHAUTABSTRICHE AUF HPV-16-DNA.64
6.2.2 UNTERSUCHUNG DER SEREN AUF ANTIKOERPER GEGEN HVP-16-PROTEINE.65
6.2.3 BEURTEILUNG DER VERWERTBARKEIT DER ANGEWANDTEN METHODEN
FUER DIE DIAGNOSTIK VON INFEKTIONEN MIT HPV-16.66
63 DISKUSSION DER UNTERSUCHUNGSERGEBNISSE .67
6.3.1 HPV-16-DNA IN MUND- UND GENITALSCHLEIMHAUTABSTRICHEN VON
KINDERN. 67
6.3.2 ANTIKOERPER GEGEN HPV-16-PROTEINE IM SERUM VON KINDERN.69
6.3.3 INTRAINDIVIDUELLER VERGLEICH ZWISCHEN DER ANWESENHEIT VON
HPV-16-DNA
UND DER PRAESENZ VON ANTIKOERPERN GEGEN HPV-16.70
7. ZUSAMMENFASSUNG.73
8. LITERATURVERZEICHNIS.76
9. LEBENSLAUF . 88
10. DANKSAGUNG.89 |
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