Isolierung und Charakterisierung ubiquitinierter Proteine aus Chloroplasten von Vicia faba L. und ihre Modulation:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
|
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1997 |
| Beschreibung: | V, 93 S. graph. Darst. |
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INHALT
SEITE
INHALTSVERZEICHNIS
.
I
VERZEICHNIS
DER
ABBILDUNGEN
.
IV
ABKUERZUNGEN
.
V
I
EINLEITUNG
.
1
1
DAS
UBIQUITIN-SYSTEM
DER
ZELLE
.
1
1.1
CHARAKTERISIERUNG
VON
UBIQUITIN
.
1
1.2
VORKOMMEN
VON
UBIQUITIN
.
1
1.3
UBIQUITIN
GENE
.
2
1.4
BILDUNG
VON
UBIQUITIN-PROTEIN
KONJUGATEN
.
4
1.5
FUNKTIONEN
DES
UBIQUITINSYSTEMS
.
6
2
CHLOROPLASTEN
.
11
2.1
STRUKTUR
DER
CHLOROPLASTEN
.
11
2.2
STRUKTUR
UND
ZUSAMMENSETZUNG
DER
THYLAKOIDMEMBRANEN
.
12
2.3
DAS
CHLOROPLASTENGENOM
.
13
2.4
IMPORT
KEMCODIERTER
PROTEINE
IN
DEN
CHLOROPLASTEN
.
14
3
UBIQUITIN
UND
UBIQUITINIERTE
PROTEINE
IM
CHLOROPLASTEN
UND
DEREN
MODULATION
.
15
4
ZIELSETZUNG
DER
VORLIEGENDEN
ARBEIT
.
16
II
MATERIAL
UND
METHODEN
.
17
1
PFLANZENMATERIAL
.
,.
17
2
ISOLATION
VON
MESOPHYLLZELL-PROTOPLASTEN
UND
ZELLORGANELLEN
.
17
2.1
ISOLATION
VON
MESOPHYLLZELL-PROTOPLASTEN
.
17
2.2
ISOLATION
VON
CHLOROPLASTEN
.
18
2.2.1
METHODE
1
.
18
2.2.2
METHODE
2
.
19
2.2.3
ISOLATION
VON
CHLOROPLASTEN
AUS
PROTOPLASTEN
.
20
2.3
ISOLATION
VON
THYLAKOIDMEMBRANEN
UND
CHLOROPLASTEN-STROMA
.
21
2.4
ISOLATION
VON
ZELLKERNEN
.
22
2.4.1
ISOLATION
VON
ZELLKERNEN
AUS
BLATTMATERIAL
.
22
2.4.2
ISOLATION
VON
ZELLKERNEN
AUS
PROTOPLASTEN
.
23
2.5
ISOLATION
PLASTIDAERER
RIBOSOMEN
.
24
2.5.1
RIBOSOMEN
AUS
CHLOROPLASTEN
.
24
2.5.2
RIBOSOMEN
AUS
THYLAKOIDMEMBRANEN
.
25
2.6
ISOLATION
VON
CHLOROPLASTEN-HUELLMEMBRANEN
.
25
2.6.1
METHODE
1
.
25
2.6.2
METHODE
2
.
27
2.6.3
METHODE
3
.
27
3
PROTEINREINIGUNG
.
28
3.1
PROTEINMENGENBESTIMMUNG
.
28
3.1.1
MIKRO-LOWRY-TEST
.
28
3.1.2
BRADFORD-TEST
.
28
3.1.3
TEST
IN
LAEMMLI-PUFFER
.
28
3.2SDS-PAGE
.
28
3.3
ISOELEKTRISCHE
FOKUSSIERUNG
(IEF)
.
30
3.4
NONEQUILIBRIUM-PH-GRADIENT-ELEKTROPHORESIS
(NEPHGE)
.
31
3.5
PREP-CELL*
.
32
4
IMMUNNACHWEIS
.
33
4.1
WESTEM-IMMUNOBLOT
.
33
4.2
HERSTELLUNG
POLYKLONALER
UBIQUITIN-ANTIKOERPER
.
34
5
TESTS
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
REINHEIT
VON
CHLOROPLASTEN
UND
THYLAKOIDMEMBRANEN
.
35
5.1
DNASE
I-UND
NABR-BEHANDLUNG
DER
THYLAKOLDMEMBRANEN
.
35
5.2
PROTEASE
UND
DNASE-BEHANDLUNGEN
DER
CHLOROPLASTEN
.
35
6
EXPERIMENTE
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
VON
THYLAKOIDMEMBRAN-PROTEINEN
.
36
6.1
DNASE-BEHANDLUNG
VON
THYLAKOIDMEMBRAN-PRAPARATIONEN
.
36
6.2
PEPTID-MAPPING
.
37
6.2.1
IN
SITU
PEPTID-MAPPING
.
37
6.2.2
CLEVELAND-ABBAU
EINER
PREP-CELL FRAKTION
.
38
6.2.3
CLEVELAND-ABBAU
IM
GEL
.
38
6.2.4
PARTIELLES
PEPTID-MAPPING
MIT
N-CHLOROSUCCINIMID
.
38
6.3
ANSEQUENZIERUNG
EINES
18
KDA
PROTEINS
.
39
6.3.1
FIXIERUNG
AUF
PVDF-MEMBRAN
.
39
6.3.2
SEQUENZIERUNG
.
39
6.3.3
AUSWERTUNG
DER
AMINOSAEURESEQUENZ
.
39
7
TROCKENSTRESS
.
39
8
KLINOSTATBEHANDLUNG
.
40
8.1
LANGSAMDREHENDER
KLINOSTAT
.
40
8.2
SCHNELLDREHENDER
KLINOSTAT
.
40
9
TEXUS-EXPERIMENT
.
41
III
ERGEBNISSE
.
42
1
EXPERIMENTE
MIT
CHLOROPLASTEN-ISOLATIONSMETHODE
1
.
42
1.1
REINHEIT VON
CHLOROPLASTEN-UND
THYLAKOIDMEMBRAN-PRAEPARATIONEN
.
42
1.1.1
DNASE
I
UND
NABR-BEHANDLUNG
DER
THYLAKOIDMEMBRANEN
.
42
1.1.2
PROTEASE
UND
DNASE-BEHANDLUNG
DER
CHLOROPLASTEN
.
43
1.1.3
ISOLATION
VON
CHLOROPLASTEN-HUELLMEMBRANEN
.
43
1.2
ISOLIERUNG
DER
PROTEINE
.
44
1.2.1
2-D-ELEKTROPHORESE
.
44
1.2.2
PREP-CELL*
.
45
1.3
EXPERIMENTE
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
DER
PROTEINE
.
46
1.3.1
HINWEIS
AUF
DNA-BINDENDE
EIGENSCHAFTEN
.
46
1.3.2
PEPTID-MAPPING
.
46
1.3.3
ANSEQUENZIERUNG
EINES
18
KDA
PROTEINS
.
47
1.3.4
ISOLATION
VON
RIBOSOMEN
.
47
2
ZELLKERN-PROTEINE
.
48
2.1
VERGLEICH
DER
PROTEINMUSTER
VON
ZELLKERNEN
UND
THYLAKOIDMEMBRANEN
48
2.2
ZELLKERN-PROTEINMUSTER
BEI
UNTERSCHIEDLICHEN
ALTERSSTADIEN
.
49
2.3
KLINOSTATBEHANDLUNG
.
49
3
EXPERIMENTE
MIT
CHLOROPLASTEN-ISOLATIONSMETHODE 2
.
51
3.1
VERGLEICH
DER
PROTEINMUSTER
BEI
CHLOROPLASTEN
ISOLATIONSMETHODE
1
UND
2
51
3.2
AUFTRETEN
UBIQUITINIERTER
PROTEINE
IN
ABHAENGIGKEIT
VON
ALTERS
UND
ENTWICKLUNGSSTADIEN
.
52
3.3
REAKTIONEN
AUF
TROCKENSTRESS
.
52
3.4
REAKTIONEN
AUF
KLINOSTATBEHANDLUNG
.
53
4
TEXUS-EXPERIMENT
.
55
IV
DISKUSSION
.
57
1
BEWERTUNG
DER
CHLOROPLASTEN-ISOLATIONSMETHODEN
.
57
2
BEWERTUNG
DER
TESTS
ZUR
UEBERPRUEFUNG
DER
REINHEIT
VON
CHLOROPLASTEN
UND
THYLAKOIDMEMBRANEN
.
59
3
BEWERTUNG
DER
ISOLATIONSMETHODEN
FUER
THYLAKOIDMEMBRANEN
UND
STROMA
.
61
4 CHLOROPLASTENGENOM
UND
ASSOZIIERTE
HISTONAEHNLICHE
PROTEINE
.
62
5
BEWERTUNG
DER
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
ENTWICKLUNGSABHAENGIGEN
UND
SCHWERKRAFTBEDINGTEN
AUFTRETEN
VON
UBIQUITINIERTEN
ZELLKEMPROTEINEN
.
64
6
MODULATION
UBIQUITIN-IMMUNOREAKTIVER PROTEINE
IM
CHLOROPLASTENSTROMA
.
65
6.1
BEWERTUNG
DER
ALTERS-UND
ENTWICKLUNGSABHAENGIGEN
MODULATION
.
66
6.2
BEWERTUNG
DER
DURCH
TROCKENSTRESS
INDUZIERTEN
MODULATION
.
68
7
BEWERTUNG
DER
MODULATION
UBIQUITIN-IMMUNOREAKTIVER PROTEINE
BEI
SIMULIERTER
SCHWERELOSIGKEIT
(KLINOSTATROTATION)
UND
MIKROGRAVITAET
(TEXUS-FLUG)
.
70
8
VORSCHLAEGE
FUER
WEITERE
ARBEITEN
.
73
V
ZUSAMMENFASSUNG
.
74
VI
LITERATURVERZEICHNIS
.
75
VII
ANHANG
.
92 |
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