Elektronenmikroskopische Untersuchungen zur Defektstruktur und zum Wachstumsmechanismus von Proteinkristallen:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
1
2
EINLEITUNG
3
2.1
KRISTALLWACHSTUM
BIOLOGISCHER
MAKROMOLEKUELE
-
KENNTNISSTAND
3
2.2
PROBLEMSTELLUNG
7
2.3
MODELLPROTEIN:
LUMAZINSYNTHASE
AUS
BACILLUS
SUBTILIS
-
AUFBAU
UND
KRISTALLPACKUNG
9
2.4
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
DARSTELLUNG
DER
OBERFLAECHEN
VON
LUMAZINSYNTHASE
KRISTALLEN
10
2.4.1
DARSTELLUNG
DER
TOPOGRAPHIE
VON
KRISTALLOBERFLAECHEN
DURCH
SCHWERMETALLSCHRAEG
BESCHATTUNG
1
1
2.4.2
DARSTELLUNG
DES
TOPOCHEMISCHEN
PROFILS
DURCH
DEKORATION
12
2.4.3
EINZELPARTIKELANALYSEN
UNTER
VERWENDUNG
DER
DEKORATIONSMETHODE
17
3
METHODEN
18
3.1
REINIGUNG
DER
LUMAZINSYNTHASE
AUS
BACILLUS
SUBTILIS
18
3.1.1
GERAETE
18
3.1.2
PUFFER
18
3.1.3
FERMENTATION
UND
ZELLAUFSCHLUSS
19
3.1.4
ANIONENAUSTAUSCHCHROMATOGRAPHIE
19
3.1.5
GELFILTRATIONSCHROMATOGRAPHIE
20
3.1.6
6,7-DIMETHYL-8-RIBITYLLUMAZINSY
NTHASETEST
20
3.1.7
PROTEINBESTIMMUNG
20
3.1.8
DENATURIERENDE
POLYACRYLAMIDGELELEKROPHORESE
(SDS-PAGE)
21
3.2
KRISTALLISATION
23
3.3
LICHTMIKROSKOPIE
23
3.4
RASTERKRAFTMIKROSKOPIE
(AFM)
23
3.5
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
24
3.5.1
KRYOFIXATION
DER
PROBEN
24
3.5.2
GEFRIERAETZUNG
UND
REPLIKATION
24
3.5.3
ADSORPTION
UND
GEFRIERTROCKNUNG
VON
EINZELPARTIKELN
26
3.5.4
NEGATIVKONTRASTIERUNG
VON
EINZELPARTIKELN
DER
LUMAZINSYNTHASE
AUS
E.
COLI
26
3.5.5
ELEKTRONENMIKROSKOP
26
3.6
OPTISCHE
BEUGUNG
27
3.7
DIGITALISIERUNG
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHER
AUFNAHMEN
28
3.8
BILDVERARBEITUNG
29
3.8.1
KONELATIONSMITTELUNG
29
3.8.2
EINZELPARTIKELANALYSE
32
4
ERGEBNISSE
38
4.1
KRISTALL
WACHSTUM
38
4.1.1
KRISTALLISATIONSVERHALTEN
DER
LUMAZINSYNTHASE
AUS
BACILLUS
SUHTILIS
38
4.1.2
BEOBACHTUNGEN
ZUM
WACHSTUMSMECHANISMUS
40
4.1.3
KRISTALLSTUFEN
43
4.1.4
KRISTALLDEFEKTE
47
4.1.5
ORIENTIERUNG
DER
AUF
DEN
KRISTALLFLAECHEN
ADSORBIERTEN
EINZELMOLEKUELE
58
4.1.6
BEREICH
HOHER
UEBERSAETTIGUNG
-
YYAMORPHES"
PRAEZIPITAT
59
4.1.7
KRISTALL
WACHSTUM
AUF
GLIMMER
63
4.2
ORIENTIERUNG
VON
MOLEKUELEN
DES
RIBOFLAVINSYNTHASE-LUMAZINSYNTHASE
KOMPLEXES
AUF
SILIZIUMOXID
67
4.3
BESTIMMUNG
DER
SYMMETRIE
DER
LUMAZINSYNTHASE
AUS
E.
COLI
70
4.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SYMMETRIE
UND
KRISTALLPACKUNG
EINER
BAKTERIELLEN
DNA-HELICASE
(RSF1010
REPA)
74
5
DISKUSSION
UND
AUSBLICK
87
5.1
KRISTALL
WACHSTUM
87
5.2
AUSBLICK
94
5.3
SYMMETRIE
UND
ORIENTIERUNGSUNTERSUCHUNGEN
AN
ADSORBIERTEN
EINZELPARTIKELN
96
5.4
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
SYMMETRIE
UND
KRISTALLPACKUNG
EINER
BAKTERIELLEN
DNA-HELICASE
(RSF1010
REPA)
97
6
LITERATUR
99 |
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