Dehydroascorbinsäure-Stoffwechsel in Spinat: Identifizierung neuer Proteine mit Dehydroascorbatreduktase-Aktivität
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1.1
DER
DUALISMUS
VON
SAUERSTOFF
1
1.2
REAKTIVE
SAUERSTOFFSPEZIES
IM
CHLOROPLASTEN
2
1.3
DIE
ANTIOXIDATIVE
STRATEGIE
DES
CHLOROPLASTEN
7
1.4
VORKOMMEN
UND
EIGENSCHAFTEN
DER
DEHYDROASCORBATREDUKTASEN
12
1.5
ZIELSETZUNG
DIESER
ARBEIT
19
2.
EXPERIMENTELLER
TEIL
2.1
MATERIALIEN,
GERAETE
UND
ALLGEMEINE
METHODEN
20
2.2
ELEKTROPHORETISCHE
METHODEN
22
2.2.1
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
22
2.2.2
NATIVE
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
24
2.2.3
2-D-ELEKTROPHORESE
25
2.2.4
FAERBEMETHODEN
28
2.3
ENZYMATISCHE
BESTIMMUNGSMETHODEN
30
2.3.1
DEHYDROASCORBATREDUKTASE
30
2.3.2
THIOLTRANSFERASE
(GLUTAREDOXIN)
31
2.3.3
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
33
2.3.4
TRYPSIN-INHIBITOR
36
2.3.5
NADP-MALATDEHYDROGENASE
36
2.3.6
FRUCTOSE-1,6-BISPHOSPHATASE
37
2.4
IMMUNOLOGISCHE
METHODEN
40
2.4.1
ELISA
40
2.4.2
WESTERN
BLOT-ANALYSEN
42
2.5
PRAEPARATIVE
METHODEN
45
2.5.1
PRAEPARATION
VON
CHLOROPLASTEN
45
2.5.2
PRAEPARATION
VON
CHLOROPLASTIDAERER
DEHYDROASCORBATREDUKTASE
49
2.5.3
CHROMATOGRAPHIE
VON
DEHYDROASCORBATREDUKTASEN
AUS
SPINATBLAETTEM
51
2.5.4
PRAEPARATION
VON
GLUTAREDOXIN
AUS
SPINATBLAETTEM
52
2.5.5
PRAEPARATION
VON
NADP-MALATDEHYDROGENASE
AUS
SPINATBLAETTEM
54
2.5.6
PRAEPARATION
VON
FRUCTOSE-1,6-BISPHOSPHATASE
AUS
SPINATBLAETTEM
57
3.
ERGEBNISSE
58
3.1
CHARAKTERISIERUNG
EINER
NEUEN
DEHYDROASCORBATREDUKTASE
AUS
SPINAT
CHLOROPLASTEN
58
3.1.1
PRAEPARATION
HOMOGENEN
PROTEINS
3.1.2
PROTEINCHEMISCHE
CHARAKTERISIERUNG
58
3.2
ISOFONNEN
DER
DEHYDROASCORBATREDUKTASE
IN
SPINATBLAETTEM
67
3.2.1
DEAE-SEPHACEL-CHROMATOGRAPHIE
VON
PROTEINEXTRAKTEN
67
3.2.2
ACTIVITY
STAIN
FUER
DEHYDROASCORBATREDUKTASEN
IN
DER
NATIVEN
GELELEKTROPHORESE
71
3.2.3
IMMUNOLOGISCHE
IDENTIFIZIERUNG
DER
DEHYDROASCORBATREDUKTASE-AKTIVEN
PROTEINE
73
3.3
INHIBITION
DER
THIOREDOXINABHAENGIGEN
ENZYMREGULATION
76
3.3.1
INHIBITION
DER
CHLOROPLASTIDAEREN
NADP-MALATDEHYDROGENASE
DURCH
DEHYDROASCORBAT
76
3.3.2
INHIBITION
DER
CHLOROPLASTIDAEREN
FRUCTOSE-1,6-BISPHOSPHATASE
DURCH
DEHYDROASCORBAT
78
3.4
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
PFLANZLICHEN
GLUTAREDOXINS
80
3.4.
PRAEPARATION
VON
GLUTAREDOXIN
AUS
SPINAT
80
3.4.2
SPINAT-GLUTAREDOXIN
ALS
SUBSTRAT
DER
RIBONUCLEOTIDREDUKTASE
86
3.4.3
INTRAZELLULAERE
LOKALISATION
DES
GLUTAREDOXINS
UND
ANDERER
THIOLTRANSFERASE
AKTIVITAETEN
88
92
4.
DISKUSSION
4.1
DEHYDROASCORBATREDUKTASEN
ALS
STRESSINDIKATOREN
92
4.2
DEHYDROASCORBATREDUKTASEN
IN
PFLANZEN
93
4.3
IST
PFLANZLICHES
GLUTAREDOXIN
EINE
DEHYDROASCORBATREDUKTASE?
97
4.4
DIE
PHYTOTOXIZITAET
VON
DEHYDROASCORBAT
98
4.5
WIEVIEL
DEHYDROASCORBAT
ENTSTEHT
IM
CHLOROPLASTEN?
100
5.
ZUSAMMENFASSUNG
103
6.
LITERATURVERZEICHNIS
104 |
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