Einfluß von Wachstumsfaktoren und Jod auf die mRNS-Expression des transformierenden Wachstumsfaktors beta-1 in intakten Schweineschilddrüsenfollikeln in Suspensionskultur:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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INHALT
1.
VERWENDETE
ABKUERZUNGEN
.
1
2.
EINLEITUNG
.2
2.1.
TRANSFORMIERENDER
WACHSTUMSFAKTOR
BETA
.
2
2.1.1.
TGF-SS-STRUKTUR
.
3
2.1.2.
REGULATION
DER
BIOSYNTHESE,
AKTIVIERUNG
UND
BINDUNG
VON
TGF-SS
.
5
2.1.2.1.
BIOSYNTHESE
UND
FREISETZUNG
.
5
2.1.2.2.
AKTIVIERUNGSMECHANISMEN
.
6
2.1.2.3.
BINDUNG
VON
FREIEM
TGF-SS
.8
2.1.2.4.
REZEPTORBINDUNG
.
9
2.1.3.
TGF-SS
REZEPTOREN
.
9
2.1.4.
WIRKUNGEN
VON
TGF-SS
.
11
2.1.5.
BISHER
BEKANNTE
TGF-SS-WIRKUNG
AN
DER
SCHILDDRUESE
.
13
2.2.
TSH
.
15
2.3.
JOD
.
17
2.4.
INSULIN-AEHNLICHE
WACHSTUMSFAKTOREN
.
17
2.5.
EPIDERMALER
WACHSTUMSFAKTOR
.
19
3,
ZIEL
DER
ARBEIT
.
22
4,
MATERALIEN
UND
METHODEN
.
23
4.1.
PRAEPARATION
INTAKTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
.23
4.1.1.
LOESUNGEN
.23
4.1.2.
PROTOKOLL
.
24
4.2.
ISOLIERUNG
VON
RNS
.25
4.2.1.
RNS-ISOLIERUNG
AUS
SCHILDDRUESENFBLLIKELN
.26
4.2.2.1.
LOESUNGEN
.
26
4.2.2.2.
PROTOKOLL
.
28
4.2.3.
RNS-ISOLIERUNG
AUS
SCHILDDRUESENGEWEBE
.
29
4.2.4.
SELEKTION
DER
MRNS
DURCH
EINE
OLIGO-DT-SAEUIE
.
31
4.2.4.1.
LOESUNGEN
.
32
4.2.4.2.
PROTOKOLL
.
33
4.2.5.
MRNS-LSOLIERUNG
AUS
SCHILDDRUESENFOLLIKELN
MIT
DEM
"PHARMACIA
MRNA
QUICK
PREP"
KIT
.34
4.2.6.
PHOTOMETRISCHE
MESSUNG
.
37
4.3.
NORTHERN
BLOT
.38
4.3.1.
HORIZONTALE
AUFTRENNUNG
DER
NUKLEINSAEUREN
UNTER
NICHT
DENATURIERENDEN
BEDINGUNGEN
(TESTGEL)
.
38
4.3.1.1.
LOESUNGEN
.
38
4.3.1.2.
PROTOKOLL
.
40
4.3.2.
VERTIKALE
AUFTRENNUNG
DER
RNS
UNTER
DENATURIERENDEN
BEDINGUNGEN
.
41
4.3.2.1.
LOESUNGEN
.
42
4.3.2.2.
PROTOKOLL
.
43
4.3.3.
VAKUUMTRANSFER,
FIXATION
UND
METHYLENBLAUFAERBUNG
DER
RNRNS
AUF
DER
BLOTMEMBRAN
.
44
4.3.4.
CDNS-SONDEN
.
47
4.3.4.1.
LOESUNGEN
.
48
4.3.4.2.
PROTOKOLL
.
48
4.3.5.
HYBRIDISIERUNG
.
54
4.3.5.1
.
NICHTRADIOAKTIVE
DNS/RNS-ANALYSE
DURCH
DIGOXIGENIN
ELISA
.
55
4.3.5.1.1.
LOESUNGEN
.
57
4.3.5.1.2.
CDNS-SONDENMARKIERUNG
.
59
4.3.5.1.3.
HYBRIDISIERUNG
.
60
4.3.5.1.4.
DETEKTION
(FARBREAKTION)
.
61
4.3.5.1.5.
ENTFERNEN
DER
CDNS/DES
FARBSTOFFS
FUER
MEHRFACHES
PROBEN
.
62
4.3.5.2.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
DER
CDNS
DURCH
.NICK
TRANSLATION
"
.
62
4.3.5.2.1.
LOESUNGEN
.
63
4.3.5.2.2.
PROTOKOLL
DER
NICK
TRANSLATION
.
67
4.3.5.2.3.
STANDARDISIERUNG
DER
NICK-TRANSLATION
.
69
4.3.5.3.
HYBRIDISIERUNG
.
71
4.3.5.3.1.
PROTOKOLL
DER
PRAEHYBRIDISIERUNG
.72
4.3.5.3.2.
PROTOKOLL
DER
HYBRIDISIERUNG
.
73
4.3.5.3.3.
WASCHEN
.
74
4.3.5.4.
ENTFERNEN
DER
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
CDNS
VOM
BLOT
(STNP
WASH)
.
75
4.3.5.5.
DENSITOMETRISCHE
QUANTIFIZIERUNG
NACH
REHYBRIDISIERUNG
.75
5.
VORVERSUCHE
.
76
5.1.
ISOLIERUNG
VON
RNS
AUS
SCHILDDRUESENFOLLIKELN
MITTELS
GUANIDINIUM
THIOCYANAT-PHENOL-CHLOROFORM-EXTRAKTION
.
76
5.2.
SELEKTION
DERMRNS
DURCH
OLIGO-DT-CELLULOSE-AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
.78
5.3.
GEWINNUNG
VON
RNRNS
AUS
SCHILDDRILSENFOLLIKELN
MIT
DEM
"PHARMACIA
QUICK
PREP
MRNA
PURIFICATION
KIT"
.79
5.4.
RNS-ISOLIERUNG
AUS
SCHILDDRUESENGEWEBEPROBEN
.
79
5.5.
SPEZIFISCHER
NACHWEIS
VON
MRNS
.82
5.5.1.
DIGOXIGENINMARKIERUNG
VON
DNS
.
82
5.5.1.1.
DETEKTIONSREAKTION
UND
MARKIERUNG
DER
PBR328-DNS
.
82
5.5.1.2.
MARKIERUNG
DER
BETA-AKTIN-CDNS-SONDE
.
82
5.5.1.3.
HYBRIDISIERUNG
DER
BETA-ACTIN-CDNS
MIT
RNS
AUS
SCHILDDRUESENFOLLIKELN
.84
5.5.1.4.
MARKIERUNG
EINER
S6-CDNS
UND
DER
BETA-AKTIN-CDNS
.54
5.5.2.
STANDARDISIERUNG
DER
NICK
TRANSLATION
.86
6.
ERGEBNISSE
.
89
6.1.
EINFLUSS
VON
PRAEPARATION
UND
KULTUR
INTAKTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
AUF
DIE
TGF-SS-1
-MRNS-EXPRESSION
.89
6.2.
EINFLUSS
VON
KALIUMJODID
AUF
DIE
TGF-SS-1-MRNS-EXPRESSION
ISOLIERTER
SCHWEINE-SCHILDDRUESENFOLLIKEL
.
93
6.3.
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DIE
TGF-SS-1-MRNS
EXPRESSION
INTAKTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
.97
7.
DISKUSSION
UND
ZUSAMMENFASSUNG
.104
7.1.
VORVERSUCHE
UND
VERWENDETE
METHODEN
.
104
7.1.1.
ISOLATION
VON
MRNS
AUS
SCHILDDRUESENFOLLIKELN
.
104
7.1.2.
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
DER
MRNS'
.
105
7.1.3.
CDNS-MARKIERUNG
UND
NORTHERN
BLOT
.105
7.2.
EINFLUSS
VON
PRAEPARATION
UND
KULTUR
INTAKTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
AUF
DIE
TGF-SS-1-MRNS-EXPRESSION
.
107
7.3.
EINFLUSS
VON
KALIUMJODID
AUF
DIE
TGF-SS-1-MRNS-EXPRESSION
ISOLIERTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
.
109
7.4.
EINFLUSS
VERSCHIEDENER
WACHSTUMSFAKTOREN
AUF
DIE
TGF-SS-1-MRNS
EXPRESSION
ISOLIERTER
SCHWEINESCHILDDRUESENFOLLIKEL
.113
7.5.
ZUSAMMENFASSUNG
.115
8.
LITERATUR
117 |
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