Ataxia-telangiectasia-Varianten: zytogenetische und molekulargenetische Untersuchungen an Zellen von Patienten mit spontaner Chromosomeninstabilität
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6
INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
8
1.1
AT-VARIANTEN
9
1.2
ATAXIA-TELANGIECTASIA
13
1.3
BLOOM
SYNDROM
21
1.4
FANCONI
ANTMIE
23
1.5
GENETISCHE
HETEROGENITAET
UND
KOMPLEMENTATIONSANALYSEN
24
1.6
ZIEL
DER
DOKTORARBEIT
26
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
27
1.
TEIL:
ZYTOGENETISCHE
METHODEN
27
2.1
ZELLKULTIVIERUNG
_
27
2.1.1
VERWENDETE
ZELLEN
_
27
2.1.2
KULTUNNETHODEN
29
2.2
KRYOKONSERVIERUN
G
30
2.3
MYCOPLASMENTEST
_
32
2.3.1
ZYTOCHEMISCHER
TEST
MIT
DAPI
_
32
2.3.2
ENZYM-IMMUNOASSAY
MIT
DEM
MYCOPLASMA DETECTION
KIT
33
2.4
ZELLZAHLBESTIMMUNG
UND
VITALFTRBUNG
33
2.5
CHROMOSOMENPRAEPARATION
34
2.6
FAERBETECHNIKEN
_
'
_
35
2.6.1
GIEMSA
STANDARDFAERBUNG
_
35
2.6.2
GIEMSA-TIYPSIN
(GTG)
BANDEN
_
36
2.6.3
FLUORESZENZ
PLUS
GIEMSA
(FPG)
FAERBUNG
37
2.7
CHROMOSOMENABERRATIONSTEST
_
37
2.7.1
S-PHASE
UNABHAENGIGE
KLASTOGENE
_
38
2.7.2
S-PHASE
ABHAENGIGE
KLASTOGENE
_
39
2.7.3
DURCHFUEHRUNG
VON
CHROMOSOMENABERRATIONSTESTS
_
40
2.7.4
AUSWERTUNG
VON
CHROMOSOMENABERRATIONEN
41
2.8
SCHWESTER-CHROMATID-AUSTAUSCH
ASSAV
43
2.9
MESSUNG
DER
DNA-SYNTHESERATE
44
2.10
ZELLFUSION
_
46
ZELLFUSION
VON
LCLS
47
2.TEIL:
MOLEKULARGENETISCHE
METHODEN
48
2.11
ISOLIERUNG
VON
DNA
AUS
EUKARYONTISCHEN
ZELLEN
_
48
2.11.1
PCA-METHODE
_
48
2.11.2
AUSBEUTEBESTIMMUNG
UND
ANALYTISCHE
UEBERPRUEFUNG
49
2.12
DNA-FINGERPRINT
_
49
2.12.1
DNA-FINGERPRINT
MIT
DER
OLIGONUCLEOTIDPROBE
(CAC)
5
(RADIOAKTIVER
NACHWEIS)
50
2.13
MIKROSATELLITEN-ANALYSEN
51
2.14
POLYMERASE
KETTEN
REAKTION
_
52
2.14.1
DURCHFUEHRUNG
DER
PCR
53
_
7
2.14.2
PCR
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
PRIMERN
54
2.14.3
PCR
MIT
FLUORESZENZ-MARKIERTEN
PRIMERN
55
2.15
GELELEKTROPHORESE
_
56
2.15.1
AGAROSE
GELSYSTEME
UND
ETHIDIUMBROMIDFAEIBUNG
_
56
2.15.2
POLYACRYLAMID
GELSYSTEME
UND
AUTORADIOGRAPHIE
_
57
2.15.3
ELEKTROPHORESE
IN
AUTOMATISIERTEN
DNA-SEQUENZERN
58
3.
ERGEBNISSE
59
3.1
KLINISCHE
DATEN
59
3.2
ZYTOGENETISCHE
DATEN
_
62
3.2.1
SPONTANE
CHROMOSOMENINSTABILITAET
62
3.2.2
INDUZIERTE
CHROMOSOMENINSTABILITAET
MIT
BLEOMYCIN
68
3.2.3
INDUZIERTE
CHROMOSOMENINSTABILITAET
MIT
TRENIMON
_
72
3.2.4
BESTIMMUNG
DER
REPLIKATIVEN
DNA-SYNTHESERATE
_
77
3.2.5
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ZYTOGENETISCHEN
EIGENSCHAFTEN
80
3.3
KOMPLEMENTATIONSANALYSEN
81
3.4
MOLEKULARGENETISCHE
DATEN
_
105
3.4.1
DNA-FINGERPRINTS
105
3.4.2
HAPLOTYP
UND
SIB
PAIR-ANALYSEN
107
4.
DISKUSSION
111
KLINISCHE
DATEN
111
ZYTOGENETISCHE
DATEN
114
KOMPLEMENTATIONSANALYSEN
121
HAPLOTYP
UND
SIB-PAIR-ANALYSEN
124
ZUSAMMENFOHRUNG
DER
ERGEBNISSE
DER
ZELLFUSION
UND
DER
MOLEKULARGENETISCHEN
ANALYSEN
_126
ZUSAMMENFASSUNG
137
5.
LITERATUR
139 |
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