Beiträge zur Untersuchung der Wechselwirkungen von substituierten Fettsäuren mit Phospholipasen A 2:
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1
. EINLEITUNG UND THEMENSTELLUNG
1
2
. BIOCHEMISCHE CHARAKTERISIERUNG DER PLA2 2
2.1. KLASSIFIZIERUNG 2
2.2. PHYSIOLOGISCHE UND PATHOPHYSIOLOGISCHE FUNKTIONEN 4
2.3. WIRKUNGSMECHANISMUS DER SPLAJ
7
2.3.1. STRUKTURELLE UND FUNKTIONELLE EIGENSCHAFTEN DER SPLA
2
7
2.3.1.1. DIE DREIDIMENSIONLE STRUKTUR DER SPLA
2
8
2.3.1.2. DER KATALYTISCHE MECHANISMUS DER HYDROLYSE 9
2.3.1.3. STRUKTURELLE VORAUSSETZUNGEN FUER DIE SELEKTIVITAET DER KATALYSE
10
2.3.2. MODELLE ZUR GRENZFLAECHENKATALYSE 13
2.4. KINETISCHE BESONDERHEITEN DER GRENZFLAECHENKATALYSE 15
2.4.1. AGGREGATIONSVERHALTEN DER PHOSPHOLIPIDE IN WAESSRIGER DISPERSION 15
2.4.2. BEDEUTUNG DER GRENZFLAECHENSTRUKTUR UND DER REAKTIONSPRODUKTE
FUER DIE SPLA
2
"AKTIV'TOET
18
2.4.3. KONZEPTE ZUR CHARAKTERISIERUNG DER GRENZFLAECHENKATALYSE 20
2.4.3.1. ANALYSE DER GRENZFLAECHENENZYME AN VESIKULAEREN SUBSTRATFORMEN 21
2.4.3.2. KINETISCHE KOMPLEXIZITAET AN MIZELLAREN GRENZFLAECHEN 21
2.5. PLAG-LNHIBITOREN 23
2.5.1. NICHTSPEZIFISCHE INHIBITOREN 23
2.5.2. SPEZIFISCHE REVERSIBLE INHIBITOREN 24
2.5.3. IRREVERSIBLE INHIBITOREN 26
2.6. IN VITRO BESTIMMUNGSMETHODEN DER PLA
2
28
3
. MATERIALIEN UND METHODEN 29
3.1. VERWENDETE REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 29
3.2. PARTIALSYNTHESE VON 1,2-DLPC(S) 30
3.3. BEREITUNG DER SUBSTRATLOESUNGEN 30
3.4. AUFARBEITUNG DER ENZYMPRAEPARATIONEN 31
3.5. DURCHFUEHRUNG DES GEKOPPELTEN PLA
2
-LOX-TESTSYSTEMS 32
3.6. DURCHFUEHRUNG DER PH-STAT-METHODE 34
3.7. PARTIKELGROESSENBESTIMMUNG AM MALVEM AUTOSIZER IIC 36
3.8. UV-SPEKTROSKOPIE 36
3.8.1. BESTIMMUNG DER 15-LOX-KATALYSIERTEN DIOXYGENIERUNG DER
VERESTERTEN, MEHRFACH UNGESAETTIGTEN FETTSAEUREN DES DLPC 36
3.8.2. BESTIMMUNG DER MOLAREN TURBIDITAET DER PL-PRAEPARATIONEN 37
3.8.3. UNTERSUCHUNG DER WECHSELWIRKUNG ZWISCHEN PLA
2
UND FREIER FETTSAEURE 37
3.8.4. UNTERSUCHUNG DER PLAJHNWBITOR-WECHSELWIRKUNG
37
3.8.5. STABILITAETSUNTERSUCHUNGEN AUSGEWAEHLTER PLA
2
_,NHIBITOREN
37
3.9. FLUORESZENZSPEKTROSKOPIE 37
3.10. DURCHFUEHRUNG DER LYOPHILISATION DER PLA
2
38
3.11. IR-SPEKTROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN 38
3.11.1. PRAEPARATION DER IR-PROBEN 38
3.11.2. IR-SPEKTROSKOPIE 38
3.12. ISOTHERMALE TITRATIONS CALORIMETRIE (ITC) 38
3.13. MIZELLARE ELEKTROKINETISCHE KAPILLARCHROMATOGRAPHIE (MEKC) 39
3.14. PKA-UND KP-BESTIMMUNG 39
3.15. ANWENDUNG STATISTISCHER METHODEN 39
4
. ERGEBNISSE UND DISKUSSION 40
4.1. DAS POLAROGRAPHISCHE ASSAY DER GEKOPPELTEN PLA
2
-LOX~REAKT ON
40
4.1.2. NACHWEIS DER FEHLERQUELLEN DER P
02
-VERBRAUCHSMESSUNG 40
4.1.2.1. POLAROGRAPHISCHE BESTIMMUNG DER LOX-DLPC-WECHSELWIRKUNG 40
4.
1
.2.2. UV-SPEKTROPHOTOMETRISCHER NACHWEIS DER DLPC-DIOXYGENIERUNG 41
4.2. PH-STAT-METHODE 42
4.2.1. BESTIMMUNG DES NOTWENDIGEN PH-WERTES 42
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/952386283
5.
6
.
4.2.2.
4.2.2.1.
4.2.2.2.
4.2.2.3.
4.3.
4.3.1.
4.3.2.
4.3.3.
4.4.
4.4.1.
4.4.2.
4.4.3.
4.4.4.
4.5.
4.6.
4.7.
4.7.1.
4.7.2.
4.7.2.1.
4.7.2.2.
4.7.2.3.
4.7.2.4.
4.7.2.5.
4.7.2.6.
4.7.2.7.
4.7.3.
OPTIMIERUNG DER PH-STAT-METHODE
ABHAENGIGKEIT DER ENZYMAKTIVITAET VOM PC/DETEMENC VERHAI^IC
LISSSLMELEAE'""
8
YY
PRAEPARA,IN DPPC
YY
" *-'0 (1=3)
AEIAE^PW2K,E,FE'ER""TL DER V"VRENDELE"
SCHLANGENGIFT-PLA2 DER CROTALUS ATROX
SCHLANGENGIFT-PLA
2
DER VIPERA RUSSELLI
UNTERSUCHUNGEN ZUR BEDEUTUNG DER PALMITINSAEURE IN DER
MISCHMIZELLAREN PLA2-GRENZFLAECHENKATALYSE
P
^2 - FREIER
*
YY
ERGEBNISSE DER TESTUNG
STRUKTUR-WIRKUNGS-BEZIEHUNGEN
AESAER-TR"'
UNTERSUCHUNGEN ZUR IRREVERSIBILITAET
DER
PLA
INHIK
* .
W-SPEKTROPHI TOMETRISCHLUSEREU2HRALASPLART^AEC,ISEH"RLLUNT
WECHSELWIRKUNG IM WAESSRTOEN U PU2-|NH'B"OT-
IR-SPEKTROSKOPISCHE UNTERSUCHUNGEN
AEAENS1'
ZUSAMMENFASSUNG
LITERATURVERZEICHNIS
42
43
46
47
47
48
48
49
51
52
55
56
58
61
68
72
72
82
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