Biologischer Effekt des Humanen Herpesvirus-6 (HHV-6) auf Zellpopulationen unterschiedlichen Phänotyps:
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1
1.1.
DAS
HUMANE
HERPESVIRUS-6
(HHV-6)
1
1.1.1.
MOLEKULARSTRUKTUR
DES
HHV-6
2
1.1.2.
DIFFERENZIERUNGSMERKMALE
UND
ABGRENZUNG
ZU
ANDEREN
HERPESVIRIDAE
2
1.1.3.
ZIELZELLEN
DES
VIRUS
IN
VITRO
UND
IN
VIVO
3
1.1.3.1.
IN
VITRO-ERGEBNISSE
3
1.1.3.2.
IN
VIVO-ERGEBNISSE
3
1.1.4.
EPIDEMIOLOGIE
4
1.1.5.
HHV-6
INDUZIERTE
ERKRANKUNGEN
4
1.1.6.
KLINISCHE
SYMPTOME
EINER
HHV-6
INFEKTION
4
1.1.7.
ERKRANKUNGEN
MIT
HHV-6
REAKTIVIERUNG
5
1.2.
INTERLEUKINE
UND
WACHSTUMSFAKTOREN
6
1.2.1.1.
INTERLEUKIN
1
A
(ILL-A)
9
1.2.1.2.
INTERLEUKIN-2
(IL2)
11
I.2.I.3.
INTERLEUKIN-4
(IL4)
12
1.2.1.4.
INTERLEUKIN-6
(IL6)
13
1.2.1.5.
GRANULOZYTEN/MAKROPHAGEN-KOLONIESTIMULIERENDER
FAKTOR
(GM-CSF)
14
1.2.2.
PRODUKTION
VON
INTERLEUKINEN
UND
WACHSTUMSFAKTOREN
BEI
STOERUNGEN
15
DER
ZELLULAEREN
UND/ODER
HUMORALEN
IMMUNABWEHR
1.2.2.1.
INTERLEUKIN
1
PRODUKTION
15
1.2.2.2.
INTERLEUKIN-2
PRODUKTION
16
I.2.2.3.
INTERLEUKIN-4
PRODUKTION
16
1.2.2.4.
INTERLEUKIN-6
PRODUKTION
16
1.2.2.5.
GM-CSF
PRODUKTION
18
13.
INTERLEUKINE
UND
HERPESVIRUS-6
INFEKTION
19
2.
VORSTELLUNG
DER
ZIELE
DIESER
ARBEIT
20
3.
MATERIAL
UND
METHODEN
21
3.1.
VIRUSLINIE
21
3.2.
ZELLINIEN
21
33.
METHODE
DER
ZELLZUECHTUNG
UND
INFEKTION
28
3.3.1.
ZELLZUECHTUNG
28
3.3.2.
INFEKTION
29
3.4.
METHODE
DER
ZELLERNTUNG
UND
VERARBEITUNG
29
3.4.1.
VITALITAETSKONTROLLE
30
3.5.
IMMUNHISTOLOGISCHE
METHODEN
ZUR
ZELLTYPISIERUNG
30
3.5.1.
ANTIKOERPER
ZUR
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
30
3.5.2.
APAAP-METHODE
33
3.5.2.I.
TABELLE
1,
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
ZUR
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
MIT
DER
35
APAAP-METHODE
3.5.2.2.
ANTIKOERPER
FUER
HHV-6
UND
EBV-ANTIGENE
36
3.5.2.2.I.
TABELLE
2,
MONOKLONALE
HHV-6
UND
EBV-ANTIKOERPER
36
3.5.2.3.
REZEPT
FUER
APAAP
AN
PARAFFINSCHNITTEN
37
3.5.2.4.
VORGEHENSWEISE
38
3.5.2.5.
AUSWERTUNG
39
3.5.3.
BESCHREIBUNG
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
39
3.5.3.1.
ERLAEUTERUNG
DES
CYTORON-DURCHFLUSSZYTOMETERS
UND
SEINER
39
ANWENDUNG
BEI
DER
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
MIT
MONOKLONALEN
ANTIKOERPERN
3.5.3.1.1.
GERAETEAUFBAU
UND
FUNKTION
DES
ORTHO
CYTORON-DURCHFLUSSZYTOMETERS
40
3.5.3.1.2.
BESCHREIBUNG
EINES
MESSVORGANGS
MIT
DEM
CYTORON
41
DURCHFLUSSZYTOMETER
3.5.3.2.
TABELLE
3,
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
ZUR
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
MIT
DEM
42
DURCHFLUSSZYTOMETER
3.5.3.3.
METHODE
DER
DURCHFLUSSZYTOMETRISCHEN
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
43
3.5.3.4.
VORGEHENSWEISE
44
3.5.3.S.
BESCHREIBUNG
DER
QUANTITATIVEN
MESSUNG
DER
GRUENFLUORESZENZ
MIT
DEM
44
A.R.S.-PROGRAMM
3.6.
DIE
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
UND
DIE
NICK-TRANSLATION
45
3.6.1.
DAS
PRINZIP
DER
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
45
3.6.2.
DIE
METHODE
DER
NICK-TRANSLATION
45
3.6.3.
REAGENTIEN
FUER
DIE
NICK-TRANSLATION
46
3.6.4.
VERSUCHSBESCHREIBUNG
DER
NICK-TRANSLATION
47
3.6.5.
REAGENTIEN
FUER
DIE
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
49
3.6.6.
VERSUCHSBESCHREIBUNG
DER
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
50
3.7.
EINFUEHRUNG
UEBER
DEN
ELISA-TEST
51
(ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT-ASSAY)
3.7.1.
ALLGEMEINE
BESCHREIBUNG
DER
VORGEHENS
WEISE
BEIM
ELISA-TEST
51
3.7.2.
MATERIAL
FUER
ELISA
53
3.7.3.
VERSUCHSDURCHFUEHRUNG
53
3.7.4.
VORGEHENSWEISE
54
3.7.5.
AUSWERTUNG
54
3.8.
DER
INTRAZELLULAERE
NACHWEIS
DER
INTERLEUKINE
IL1,
IL2,
IL4,
IL6
55
UND
GM-CSF
MIT
DEM
STREPTAVIDIN-BIOTINYLIERTE
ALKALISCHE
PHOSPHATASE-KOMPLEX/ALKALISCHE
PHOSPHATASE-DETECTION
SYSTEM
3.8.1.
REAGENTIEN
UND
INTERLEUKINANTIKOERPER
55
3.8.2.
METHODE
DES
STREPTAB-KOMPLEX/AP-FAERBEVORGANGS
56
3.8.3.
AUSWERTUNG
56
4.
ERGEBNISSE
57
4.1.
ANZUECHTBARKEIT
DER
ZELLINIEN
IN
DER
ZELLKULTNR
57
4.2.
MORPHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
58
43.
ZELLVITALITAET
VOR
UND
NACH
HHV-6
INFEKTION
60
4.3.1.
RESULTATE
61
4.3.1.1.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
61
4.3.I.2.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
61
4.3.1.3.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
61
4.3.I.4.
HODGKIN-ZELLINIEN
61
4.3.2.
TABELLARISCHE
ZUSAMMENFASSUNG
DER
ZELLVITALITAET
62
(SEMIQUANTITATIVE
AUSWERTUNG;
ANGABE
IN
10
%
KLASSEN)
4.4.
INFIZIERBARKEIT
DER
EINZELNEN
ZELLINIEN
MIT
DEM
62
HUMANEN
HERPESVIRUS-6
(TYP
A,
GS-ISOLAT)
4.4.1.
RESULTATE
DER
IN
SITU-HYBRIDISIERUNG
MIT
DER
HHV-6
DNA-PROBE
ZV
70
63
4.4.2.
HHV-6
UND
EBV-ANTIGENEXPRESSION
64
4.4.2.I.
HHV-6
ANTIGENEXPRESSION
64
4.4.2.2.
EBV-ANTIGENEXPRESSION
65
4.4.3.
TABELLARISCHE
UEBERSICHT
DES
INFEKTIONSNACHWEISES
DER
ZELLINIEN
NACH
66
HHV-6
INFEKTION
4.5.
ERGEBNISSE
DER
IMMUNPHAENOTYPISIERUNG
-
ZELLTYPISIERUNG
VOR
UND
68
NACH
INFEKTION
MIT
DEM
HUMANEN
HERPESVIRUS-6
(HHV-6)
MIT
DER
APAAP-METHODE
4.5.1.
RESULTATE
69
4.5.2.
EXPRESSION
VON
GP
57
(VIMENTIN)
69
4.5.2.I.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
70
4.5.2.2.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
70
4.5.2.3.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
71
4.5.2.4.
HODGKIN-ZELLINIEN
71
4.5.3.
EXPRESSION
VON
ANDEREN
EPITOPEN
71
4.5.3.1.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
71
4.5.3.2.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
72
4.5.3.3.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
72
4.5.3.4.
HODGKIN-ZELLINIEN
73
4.6.
ERGEBNISSE
DER
DURCBFLUDZYTOMETRISCHEN
BESTIMMUNG
DER
73
QUANTITATIVEN
EPITOPEXPRESSION
MIT
MONOKLONALEN
MAUS-ANTIKOERPERN
UEBER
DIE
AENDERUNG
DER
GRIINFLUORESZENZ
4.6.1.
RESULTATE
75
4.6.1.1.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
75
4.6.1.2.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
77
4.6.1.3.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
78
4.6.1.4.
HODGKIN-ZELLINIEN
78
4.7.
ERGEBNISSE
DER
INTERLEUKINMESSUNG
MITTELS
ELISA
79
4.7.1.
RESULTATE
80
4.7.2.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
80
4.7.3.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
81
4.7.4.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
83
4.7.5.
HODGKIN-ZELLINIEN
84
4.8.
ERGEBNISSE
DER
INTRAZELLULAEREN
INTERLEUKINBESTIMMUNG
UEBER
DAS
85
STREPTAVIDIN-BIOTINYLIERTE
ALKALISCHE
PHOSPHATASE-KOMPLEX/
ALKALISCHE
PHOSHATASE-DETECTION
SYSTEM
4.8.1.
RESULTATE
86
4.8.2.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
86
4.8.3.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
87
4.8.4.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
87
4.8.5.
HODGKIN-ZELLINIEN
88
5.
DISKUSSION
89
5.1.
WACHSTUM
DER
ZELLINIEN
IN
DER
ZELLKULTUR
89
5.2.
ZELLMORPHOLOGISCHE
VERAENDERUNGEN
BEI
HHV-6
INFEKTION
91
5.3.
ZELLVITALITAET
92
5.3.1.
ZELLUNTERGANG
UND
APOPTOSE
93
5.4.
TARGETZELLPOPULATIONEN
FUER
HHV-6
IN
VITRO
94
5.4.1.
INFIZIERBARKEIT
DER
ZELLEN
95
5.4.2.
P41-UNDGP
110/60-EXPRESSION
96
5.4.3.
HHV-6
INFEKTIONSDOSIS
97
5.5.
EXPRESSION
VON
ZELLMEMBRANEPITOPEN
BEI
HHV-6
INFEKTION
98
5.5.1.
EPITOPEXPRESSION
DER
VERSCHIEDENEN
ZELLPOPULATIONEN
99
5.5.1.1.
T-LYMPHOIDE
ZELLINIEN
99
5.5.1.2.
MYELOISCHE
ZELLINIEN
100
5.5.I.3.
MONOZYTAERE
ZELLINIEN
100
5.5.I.4.
HODGKIN-ZELLINIEN
101
5.5.2.
EXPRESSION
VON
VIMENTIN
UND
ZYTOKERATIN
BEI
HHV-6
INFEKTION
102
5.5.2.I.
VIMENTINEXPRESSION
102
5.5.2.2.
ZYTOKERATIN
102
5.5.3.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
UEBERLEGUNGEN
103
5.6.
ZYTOKINSEKRETION
BEI
HHV-6
INFEKTION
104
5.6.1.
ZYTOKINBESTIMMUNG
IM
ZELLFREIEN
KULTURUEBERSTAND
MIT
DER
104
ELISA-METHODE
5.6.1.1.
PRODUKTION
VON
INTERLEUKIN-6
105
5.6.1.2.
GM-CSF
PRODUKTION
106
5.6.I.3.
FEHLENDER
NACHWEIS
DER
INTERLEUKINE
IL1,
IL2
UND
IL4
MIT
DER
107
ELISA-METHODE
5.6.2.
DIE
INTRAZELLULAERE
INTERLEUKINBESTIMMUNG
MIT
DER
STREPTABC/
109
AP-METHODE
5.6.2.1.
ZYTOKINPRODUKTION
110
5.6.3.
VERGLEICH
ELISA-TEST
VERSUS
STREPTABC/AP-METHODE
110
5.7.
MOEGLICHE
ZUSAMMENHAENGE
ZWISCHEN
EINER
HHV-6
INFEKTION
113
(TYP
A,
GS-ISOLAT)
VON
TARGETZELLEN
UND
DEREN
FUNKTIONSSTOERUNG
IN
VITRO
MIT
HHV-6
ASSOZIIERTEN
ERKRANKUNGEN
IN
VIVO
6.
ZUSAMMENFASSUNG
115
7.
LITERATURVERZEICHNIS
116
8.
ANHANG
148
8.
A)
GRAPHISCHE
DARSTELLUNGEN
149
8.
B)
BILDTAFELN
182
8.
C)
TABELLEN
187 |
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