Zelluläre Abwehrmechanismen beim humanen Nierenzellkarzinom: Einfluß von Interferon gamma auf die Tumorzellerkennung durch tumorinfiltrierende Lymphozyten und lymphokinaktivierte Killerzellen
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| Format: | Buch |
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| Veröffentlicht: |
1997
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| Beschreibung: | München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGEN
1
NOMENKLATUR
UND
TERMINOLOGIE
DER
IMMUNOLOGISCHEN
FACHBEZEICHNUNGEN
3
A.
_
EINLEITUNG
------------------------------------------------------------------------------------
4
A.1.
ASPEKTE
DER
TUMORIMMUNOLOGIE
4
A.
1.1.
ENTSTEHUNG
VON
TUMOREN
4
A.1
.2.
WIE
ENTGEHEN
TUMORZELLEN
DEM
IMMUNSYSTEM?
5
A.2.
DAS
MENSCHLICHE
NIERENZELLKARZINOM
(RCC)
6
A.2.1.
KLINISCHE
DATEN
DES
NIERENZELLKARZINOMS
6
A.2.2.
HINWEISE
FUER
EINE
IMMUNANTWORT
BEIM
MENSCHLICHEN
6
NIERENZELLKARZINOM
A.2.3.
ENTWICKLUNG
EINER
"VAKZINE"
8
A.3.
DIE
EFFEKTORPOPULATIONEN
BEIM
MENSCHLICHEN
NIERENZELLKARZLNOM
9
A.4.
ENTWICKLUNG
EINER
MIT
INTERFERON
GAMMA
GENETISCH
MODIFIZIERTEN
YYTUMORZELLVAKZINE
"
10
A.5.
AUFGABENSTELLUNG
12
A
_
MATERIAL_
13
B.1.
GERAETE
13
B
.
1.1.
ALLGEMEINE
TECHNISCHE
GERAETE
13
B.1.2.
TECHNISCHE
GERAETE
FUER
DIE
ZELLKULTUR
13
B.
1.3.
TECHNISCHE
GERAETE
FUER
DIE
MOLEKULARBIOLOGIE
13
B.2.
VERBRAUCHSMATERIAL
FUER
DIE
ZELLKULTUR
14
B.2.1.
CHEMIKALIEN
14
B.2.2.
LOESUNGEN
UND
PUFFER
14
B.2.3.
KULTURMEDIEN
15
B.2.4.
INTERFERONE
16
B.2.5.
SONSTIGES
16
B.2.6.
VERSUCHSSYSTEME
(YYKITS
"
)
16
B.2.7.
PLASTIKWAREN
16
B.2.8.
ANTIKOERPER
16
B.2.9.
ZELLEN
18
B.3.
VERBRAUCHSMATERIAL
FUER
DIE
MOLEKULARBIOLOGIE
18
B.3.1.
CHEMIKALIEN
18
B.3.2.
LOESUNGEN,
PUFFER
UND
MEDIEN
19
B.3.3.
ENZYME
20
B.3.4.
VERSUCHSSYSTEME
(YYKITS")
20
B.3.5.
PLASTIKMATERIAL
20
B.3.6.
OLIGONUKLEOTIDE
20
B.3.6.1.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
REVERSE
TRANSKRIPTION
20
B.3.6.
2.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
PCR
20
B.3.6.
2.1.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
HLA-A2
SPEZIFISCHE
PCR
20
B.3.6.2.2.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
HLA-C
SPEZIFISCHE
PCR
20
B.3.6.
2.3.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
IFNY
SPEZIFISCHE
PCR
21
B.
3.6.3.
OLIGONUKLEOTIDE
FUER
DIE
SEQUENZIERUNG
21
B.3.7.
SONSTIGE
NUKLEINSAEUREN
21
B.3.8.
SONSTIGE
MATERIALIEN
21
B.4.
PERSONENVERZEICHNIS
22
C.
METHODEN
23
C.1.
METHODEN
DER
ZELLKULTUR
23
C.1.1.
ISOLIERUNG
PERIPHERER
BLUTLYMPHOZYTEN
23
C.1.2.
ISOLIERUNG
TUMORINFILTRIERENDER
LYMPHOZYTEN
23
C.1.3.
RESTIMULIERUNG
TUMORINFLITRIERENDER
LYMPHOZYTEN
23
C.1.4.
ETABLIERUNG
VON
TUMORZELLINIEN
24
C.1.5.
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
AUS
GESUNDEM
NIERENGEWEBE
24
C.1.6.
KULTIVIERUNG
UND
PASSAGIERUNG
ADHAERENTER
ZELLEN
24
C.1.7.
EXOGENE
STIMULIERUNG
DER
TUMORZELLEN
MIT
IFNA
UND
IFNY
25
C.1.8.
RETROVIRALER
VEKTORVERMITTELTER
TRANSFER
DES
GENS
FUER
IFNY
IN
RCC-26
ZELLEN
25
C.1.9.
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
26
C.1.10.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
DER
ZELLEN
26
C.
1.11.
ETABLIERUNG
LYMPHOKINAKTIVIERTER
KILLERZELLEN
DURCH
STIMULIERUNG
VON
PBL
MIT
LNTERLEUKIN-2
26
C.1.12.
CHROMFREISETZUNGSTEST
(ZELLVERMITTELTE
LYSE,
CML)
27
C.
1.13.
ANALYSE
DER
OBERFLAECHENANTIGENE
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
AM
FLUORESZENZAKTIVIERTEN
ZELLSEPARATOR
(FACSCAN)
28
C.1.14.
ANALYSE
VON
INTRAZYTOPLASMATISCHEM
IFNY
MITTELS
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
28
C.
1.15.
ENZYMGEKOPPELTER
IMMUNADSORPTIONSTEST
(ELISA)
ZUR
MESSUNG
VON
LOESLICHEM
IFNY
29
C.
1.16.
BIOASSAY
ZUR
BESTIMMUNG
DER
SENSITIVITAET
GEGENUEBER
TNF
UND
FAS
30
C.2.
MOLEKULARBLOLOGLSCHE
METHODEN
30
C.2.1.
RNS
ISOLATION
AUS
KULTIVIERTEN
ZELLINIEN
30
C.2.2.
FAELLUNG
VON
RNS
BZW.
PCR
AMPLIFIKATEN
31
C.2.3.
REVERSE
TRANSKRIPTION
VON
RNS
31
C.2.4.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
32
C.2.5.
HLA-A2
UND
HLA-C
SEQUENZIERUNG
AM
A.L.F.
MITTELS
FLUORESZENZMARKIERUNG
34
C.2.5.
1.
TRENNUNG
DER
DNS-STRAENGE
MITTELS
MAGNETPARTIKELN
34
C.2.5.2.
SEQUENZIERUNG
VON
DNS-EINZELSTRAENGEN
MIT
FLUORESZENZMARKIERUNG
35
C.2.6.
NACHWEIS
DES
IFNY
AMPLIFIKATS
DURCH
HORIZONTALE
AGAROSEGELELEKTROPHORESE
37
C.2.7.
WESTERN
BLOT
ZUM
NACHWEIS
VON
TAP
UND
LMP
MIT
HILFE
VON
ANTIKOERPERN
UND
CHEMILUMINESZENZ
(ECL)
DETEKTIERUNG
37
EL
_
ERGEBNISSE
_
39
D.1.
DIE
ERKENNUNG
MENSCHLICHER
NIERENZELLKARZINOMZELLEN
DURCH
TUMORSPEZIFISCHE
ZYTOTOXISCHE
T-LYMPHOZYTEN
39
D.1.1.
VORARBEITEN
39
D.1
.2.
DAS
LYTISCHE
VERHALTEN
ZYTOTOXISCHER
T-LYMPHOZYTEN
VERSCHIEDENER
RCC-PATIENTEN
GEMESSEN
MITTELS
ZELLVERMITTELTER
LYSE
40
D.2.
ERHOEHUNG
DER
IMMUNANTWORT
TUMORSPEZIFISCHER
T-LYMPHOZYTEN
DURCH
BEHANDLUNG
DER
TUMORZELLEN
MIT
INTERFERONEN
51
D.2.1
.
KULTIVIERUNG
DER
TUMORZELLEN
IN
INTERFERONHALTIGEM
MEDIUM
51
113
D.2.2.
SPEZIFISCHE
ERKENNUNG
VON
IFNY
MODIFIZIERTEN
TUMORZELLEN
VON
PATIENT
26
DURCH
TIL
UND
LAK
56
D.2.2.1.
MESSUNG
DER
SEKRETION
VON
IFNY
56
D.2.2.1.
1.
MESSUNG
DER
SEKRETION
VON
IFNY
MITTELS
EINES
ENZYMGEKOPPELTEN
IMMUNADSORPTIONSTESTS
(ELISA)
56
D.2.2.1.
2.
MESSUNG
DER
KLASSE
II
INDUKTION
AUF
TUMORZELLEN
DURCH
IFNY
57
D.2.2.1.
3.
KOKULTIVIERUNG
VON
UNMODIFIZIERTEN
RCC-26
ZELLEN
UND
GENMODIFIZIERTEN
RCC-26
IFNYL
UND
RCC-26
IFNY2
TUMORZELLEN
59
D.2.2.1.
4.
NACHWEIS
VON
IFNY
MRNS
MITTELS
RT-PCR
60
D.2.2.1.
5.
NACHWEIS
VON
INTRAZYTOPLASMATISCHEM
IFNY
61
D.2.2.2.
OBERFLAECHENCHARAKTERISIERUNG
DER
IFNY
MODIFIZIERTEN
TUMORZELLEN
62
D.2.3.
LYTISCHES
VERHALTEN
DER
IFNY
MODIFIZIERTEN
TUMORZELLEN
VON
PATIENT
26
66
D.2.4.
VERSUCH
DER
ABKLAERUNG
DER
URSACHE
FUER
DIE
UNTERSCHIEDLICHE
LYSE
VON
EXOGEN
UND
ENDOGEN
MIT
IFNY
BEHANDELTEN
TUMORZELLEN
VON
PATIENT
26
68
D.
2.4.1.
MESSUNG
VON
TAP
UND
LMP
PROTEINEN
68
D.2.4.2.
UNTERSUCHUNG
VERSCHIEDENER
LYTISCHER
MECHANISMEN
70
D.2.5.
TRANSDUZIERTE
TUMORZELLEN
VON
PATIENT
26
SIND
NICHT
GENERELL
RESISTENT
GEGENUEBER
LYSE
72
D.2.6.
LYSEMUSTER
VON
TIL-53
74
D.3.
DIE
ERKENNUNG
MENSCHLICHER
NLERENZELLKARZINOMZELLEN
DURCH
LAK
78
D.3.1.
VORARBEITEN
78
D.3.2.
EINFLUSS
VON
EXOGENEM
IFNA
UND
IFNY
AUF
LAK
79
D.3.3.
VERGLEICH
DER
LYTISCHEN
AKTIVITAET
VON
LAK
ZELLEN
AUF
EXOGEN
UND
ENDOGEN
MIT
IFNY
STIMULIERTEN
TUMORZELLEN
80
E.
DISKUSSION
ZUAAMMENFASSUNA
_
1OE3
LITERATUL
105
PUBLIKATIONEN
CURRICULUM
VITAE
DANKSAGUNG |
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