Aspekte der Evolution von Intermediärfilamentproteinen ; Charakteristika bei Protostomiern:
Gespeichert in:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1996
|
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| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Göttingen, Univ., Diss., 1997 |
| Beschreibung: | [6], 133, [4] S. Ill., graph. Darst. |
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INHALTSVERZEICHNIS:
1.
EINLEITUNG
.
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
13
2.1.
MATERIAL
.
13
2.1.1.
CHEMIKALIEN
.
13
2.1.2.
MEDIUM-KOMPONENTEN
.
13
2.1.3.
ENZYME
.
13
2.1.4.
RADIOCHEMIKALIEN
.
13
2.1.5.
GEBRAUCHSWAREN
.
13
2.1.6.
WASSER
.
14
2.1.7.
PUFFER
UND
LOESUNGEN
.
14
2.1.8.
SYNTHETISCHE
OLIGONUKLEOTIDE
.
19
2.1.9.
ORGANISMEN
.
19
2.1.10.
BAKTERIEN
.
19
2.1.11.
MEDIEN
UND
ZUSAETZE.
20
2.1.12.
PLASMIDE
UND
BAKTERIOPHAGEN
.
22
2.1.13.
FERTIGE
LAMBDA
CDNA-BANKEN
.
22
2.2.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
.
23
2.2.1.
KONZENTRATIONS
UND
REINHEITSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
23
2.2.2.
AGAROSEGELEKTROPHORESE
VON
DNA
.
23
2.2.3.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
24
2.2.3.
REINIGUNG
VON
DNA
DURCH
PHENOL/CHLOROFORMEXTRAKTION
.
24
2.2.4.
PRAEZIPITATION
VON
DNA
.
25
2.2.5.
RESTRIKTIONSVERDAU
VON
DNA
.
25
2.2.6.
LIGATIONSREAKTIONEN
.
26
2.2.7.
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
ZELLEN
UND
TRANSFORMATION
.
26
2.2.8.
ANALYTISCHE
PLASMIDISOLIERUNG
.
27
2.2.9.
PRAEPARATIVE
PLASMIDISOLIERUNG
.
28
2.2.10.
ISOLIERUNG
VON
GENOMISCHER
DNA
.
28
2.2.11.
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
.
29
2.2.12.
ISOLIERUNG
VON
A
+
-RNA
.
30
2.2.13.
CDNA-SYNTHESE
.
31
2.2.14.
ERSTELLEN
VON
LAMBDA-BANKEN
.
33
2.2.15.
LAMBDA-KOMPETENTE
BAKTERIEN
.
34
2.2.16.
PLATTIEREN
VON
LAMBDA-BANKEN
.
34
2.2.17.
DNA-SCREENING
VON
LAMBDA-BANKEN
.
34
2.2.18.
ANTIKOERPER-SCREENING
VON
LAMBDA-BANKEN
NACH
YOUNG
&
DAVIS.
35
2.2.19.
IN
VIVO
EXZISION
AUS
LAMBDA-PHAGEN.
36
2.2.20.
AUSPLATTIEREN
UND
DURCHMUSTERN
VON
PLASMIDBANKEN
.
37
2.2.21.
HERSTELLUNG
VON
M13
EINZELSTRANG-DNA
FUER
DIE
SEQUENZIERUNG
.
38
2.2.22.
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
.
38
2.2.23.
KLONIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
.
42
2.2.24.
HERSTELLUNG
VON
DNA-SONDEN
.
42
2.2.25.
AUFREINIGUNG
VON
MARKIERTEN
DNA-FRAGMENTEN
.
43
2.2.26.
HYBRIDISIERUNGEN
MIT
DNA-SONDEN
.
43
2.2.27.
TRANSFER
VON
DNA
AUF
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
(SOUTHERN
BLOTTING)
.
45
2.2.28.
TRANSFER
VON
RNA
AUF
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
(NORTHERN
BLOTTING)
.
46
2.2.29.
SEQUENZIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
47
2.3.
PROTEINCHEMISCHE
METHODEN
.
50
2.3.1.
PROTEIN-PRAEPARATION
.
50
2.3.2.
SDS-POLYACRYLAMID
GELELEKTROPHORESE
(SDS-PAGE).
51
2.3.3.
PROTEINTRANSFER
UND
IMMUNOBLOTTING
(WESTERN-BLOT)
.
52
2.3.4.
SDS-EXTRAKTION
.
53
2.3.5.
PROTEINFAELLUNG
MIT
CHLOROFORM/METHANOL
.
53
2.3.6.
CHEMISCHE
SPALTUNG
AN
METHIONINRESTEN
MIT
BROMCYAN
.
54
2.3.7.
ENZYMATISCHE
SPALTUNG
MIT
TRYPSIN
.
54
2.3.8.
HPLC
TRENNUNG
VON
PEPTIDEN
.
55
2.3.9.
MIKROSEQUENZIERUNG
VON
PEPTIDEN
.
55
3.
ERGEBNISSE
.
56
3.1.
LUMBRICUS
TERRESTRIS
.
56
3.1.1.
PROTEINCHEMIE
.
56
3.1.2.
CDNA
KLONIERUNG
.
61
3.1.3.
DAS
IF-1
PROTEIN
VON
LUMBRICUS
BESTAETIGT
EINEN
PROTOSTOMISCHEN
BAUPLAN
.
63
3.2.
LINEUS
SANGUINEUS
UND
L.
VIRIDIS
.
68
3.2.1.
DER
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
IFA
DETEKTIERT
REKOMBINATES
IF
PROTEIN
VON
LINEUS
.
68
3.2.2.
DIE
IF
PROTEINE
BEIDER
NEMERTEA
SIND
AEHNLICH
ABER
NICHT
IDENTISCH
.
70
3.2.3.
DIE
IF
PROTEIN-SEQUENZDATEN
UNTERSTUETZEN
EINE
NEUGRUPPIERUNG
DER
NEMERTEA
.
77
3.3.
GLOTTIDIA
PYRAMIDATA
.
81
3.3.1.
DIE
KLONIERUNG
DER
IF-1
CDNA
ERFOLGTE
MITTELS
RT-PCR.
81
3.3.2.
DAS
SEQUENZ
DES
IF-1
PROTEINS
VON
GIOTTIDIA
ZEIGT
HOMOLOGIEN
ZU
PROTO
UND
DEUTEROSTOMISCHEN
IF
PROTEINEN
.
86
3.3.3.
WENIGSTENS
ZWEI
IF
PROTEINE
SCHEINEN
DURCH
ALTERNATIVES
SPLEISSEN
ZU
ENTSTEHEN
.
90
3.4.
DIE
EVOLUTION
VON
AKTINEN
BEI
DEUTEROSTOMIERN
.
92
3.4.1.
A-AKTINE
AUS
BRANCHIOSTOMA
BESITZEN
N-TERMINAL
YYDIAGNOSTISCHE"
AMINOSAEUREN
.
93
3.4.2.
DAS
A-AKTIN
VON
BRANCHIOSTOMA
I.
BESITZT
EINIGE
UNGEWOEHNLICHE
AMINOSAEURERESTE
.
98
3.4.3.
EIN
SARKOMERES
AKTIN
AUS
SACCOGIOSSUS
KONNTE
NICHT
IDENTIFIZIERT
WERDEN
.
99
3.4.4.
DAS
VORKOMMEN
YYDIAGNOSTISCHER"
AMINOSAEURERESTE
TRENNT
CHORDATEN
VON
HEMICHORDATEN
.
102
4.
DISKUSSION
.
104
5.
ZUSAMMENFASSUNG
.
118
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
120
7.
ANHANG |
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