Cis-Trans-Steuerung der pflanzlichen Genexpression: Funktionsstudien in transgenen Pflanzenzellen am Beispiel der RbcS-Promotoren aus Brassica napus L. (Raps)
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
I.
EINLEITUNG
1
1.
DIE
ROLLE
DER
GENREGULATION
IN
PFLANZEN
1
2.
MOEGLICHKEITEN
ZUR
IN
VIVO-UNTERSUCHUNG
DER
EXPRESSIONSREGULATION
1
3.
BLUETENENTWICKLUNG.
EIN
BEISPIEL
PFLANZLICHER
ENTWICKLUNGSSTEUERUNG
4
4.
NUKLEAERE
EXPRESSIONSREGULATION
AUF
TRANSKNPTIONELLER
EBENE
5
4.1.
DIE
BASALE
TRANSKRIPTIONSMASCHINENE
EUKARYOTISCHER
STRUKTURGENE
6
4.2.
CAAT-BOX
8
4.3.
GT-1-BINDUNGSSTELLE
(BOX
II
UND
BOX
III)
8
4.4.
1-BOX
8
4.5.
G-BOX
9
4.6.
TGACG
UND
ANDERE
ACGT-MOTIVE
10
4.7.
H-BOX
(BOX
I)
10
4.8.
AT-REICHE
SEQUENZEN
10
5.
RIBULOSE-1,5-BISPHOSPHAT-CARBOXYLASE/-OXYGENASE
(RUBISCO)
12
5.1.
FUNKTION
UND
AUFBAU
DERRIBULOSE-1,5-BISPHOSPHAT-CARBOXYLASE/-OXYGENASE
12
5.2.
STRUKTUR
UND
ORGANISATION
VON
RBCS-GENFAMILIEN
13
5.3.
REGULATION
DER
RBCS-GENE
14
II.
ZIELSETZUNG
16
III.
MATERIAL
UND
METHODEN
18
1.
MATERIAL
18
1.1.
PFLANZENMATERIAL
18
1.2.
BAKTERIENSTAEMME
18
1.3.
PLASMIDE
19
1.4.
OLIGONUKLEOTIDE
22
1.5.
FEINCHEMIKALIEN
UND
ENZYME
23
1.6.
BAKTERIELLE
UND
PFLANZLICHE
NAEHRMEDIEN 24
1.6.1.
BAKTERIELLE
KULTIVIERUNGSMEDIEN
24
1.6.2.
PFLANZLICHE
KULTIVIERUNGSMEDIEN
25
II
2.
METHODEN
27
2
1
PFLANZENANZUCHT
27
2.2.
ISOLIERUNG
VON
PLASMID-DNA
27
2.3.
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
AUS
TRANSGENEN
PFLANZEN
28
2.3.1
ISOLIERUNG
VON
GESAMT-RNA
28
2.3.2.
ISOLIERUNG
VON
DNA
28
2.4.
PROTEINGEWINNUNG
AUS
TRANSGENEN
PFLANZEN
29
2.5.
GELELEKTROPHORESE
29
2.6.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNGSVERFAHREN
30
2.6.1
"RANDOM
PRIMED"
MARKIERUNG
30
2.6.2.
3'ENDMARKIERUNG
MIT
DNA-POLYMERASE
I
30
2.6.3.
5'ENDMARKIERUNG
MIT
T4-POLYNUKLEOTIDKINASE
30
2.6.4.
IN
VRTRO-TRANSKRIPTION
31
2.7.
DNA-SEQUENZIERUNG
31
2.7.1.
DIDESOXY-KETTENABBRUCHMETHODE
31
2.7.2.
MAXAM
UND
GILBERT-METHODE
32
2.8
BLOTTING-VERFAHREN
33
2.8.1
NORTHEM-BLOTTING
33
2.8.2.
SOUTHEM-BLOTTING
33
2.8.3.
WESTEM-BLOTTRNG
33
2.9.
HYBRIDISIERUNGSVERFAHREN
34
2.9.1
DNA/DNA-HYBRIDISIERUNGEN
34
2.9.2.
RNA/RNA-HYBRIDISIERUNGEN
34
2.9.3.
DNA/RNA-HYBRIDISIERUNG
34
2.10.
RNASE-SCHUTZKARTIERUNG
35
2.11
S1-KARTIERUNG
36
2.12.
PROTOPLASTEN-PRAEPARATION
UND
DIREKTER
GENTRANSFER
36
2.12.1.
PRAEPARATION
VON
NICOTIANA
TABACUM
SR1-MESOPHYLLPROTOPLASTEN
36
2.12.2
DIREKTER
POLYETHYLENGLYKOL
(PEG)-VERMITTELTER
GENTRANSFER
38
2.12.3.
MCP-EXTRAKTION
39
2.13.
NACHWEIS
DER
GIJS-REPORTERGENAKTIVITAET
39
2.14.
GENTRANSFER
MITTELS
PARTIKELKANONE
39
2.14.1.
PARTIKEL-PRAEPARATION
39
2.14.2.
VORBEREITUNG
DES
PFLANZLICHEN
ZIELGEWEBES
40
2.14.3.
AUFBAU
DER
HELIUM-BETRIEBENEN
PARTIKELKANONE
40
2.14
4.
DURCHFUEHRUNG
DER
BESCHUESSE
41
2.15.
HISTOCHEMISCHER
NACHWEIS
DER
GUS-EXPRESSION
41
2.16
SICHERHEITSMASSNAHMEN
42
II!
IV.
ERGEBNISSE
43
1.
STRUKTURELLE
EIGENSCHAFTEN
VERSCHIEDENER
ROECS-PROMOTOREN
AUS
BRASSICA
NAPUS
43
2.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
ROCS-PROMOTOREN
AUS
RAPS
48
2.1.
KLONIERUNG
VERSCHIEDENER
RBCS-PROMOTOR::REPORTERGENKONSTRUKTE
50
2.2.
OPTIMIERUNG
DES
PEG-VERMITTELTEN
GENTRANSFERS
IN
NICOTIANA
FABACUM-PROTOPLASTEN
51
2.3.
FUNKTIONELLE
ANALYSE
VERSCHIEDENER
CIS-ELEMENTE
DES
RBCS3-PROMOTORS
52
2.4
FUNKTIONELLE
ANALYSE
DES
RBCS4-PROMOTORS
54
3.
CIS/TRANS-INTERAKTIONSSTUDIEN
IN
PFLANZLICHEN
ZELLEN
56
3.1.
ALLGEMEINE
VERSUCHSSTRATEGIE
57
3.2.
ANTAGONISTISCHE
REGULATIONSEFFEKTE
IN
TRANS-AKTIVIERUNGSEXPENMENTEN
MIT
GBF2A
UND
GSBF1
60
4.
ANALYSE
DER
REGULATORISCHEN
FUNKTION
EINZELNER
"BASIC/LEUCINE
ZIPPER
"
(BZIP)-DOMAENEN
62
5.
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
TRANSKRIPTIONSREGULATION
DER
RAPS
RBCS-GENE
IM
HOMOLOGEN
PFLANZENSYSTEM
65
V.
DISKUSSION
68
1.
ANALYSE
VON
CIS-ELEMENTEN
IN
VERSCHIEDENEN
RBCS
PROMOTOREN
AUS
BRASSICA
NAPUS
68
2.
FUNKTIONELLE
CHARAKTERISIERUNG
VON
DNA-PROTEIN-WECHSELWIRKUNGEN
AM
RBCS4-PROMOTOR
71
3.
DETERMINATION
FUNKTIONELLER
BZIP-DOMAENEN
DURCH
IN
VIVO-ANALYSEN
MIT
MUTIERTEN
EFFEKTOR
KONSTRUKTEN
73
4.
INTERPRETATION
DES
BIOLISTISCHEN
ANSATZES
IM
HOMOLOGEN
SYSTEM
74
VI.
ZUSAMMENFASSUNG
76
VII.
LITERATUR
78 |
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| topic_facet | Differentielle Genexpression Genfamilie Ribulosebisphosphat-Carboxylase Promotor Genetik Raps Hochschulschrift |
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