Untersuchungen zum Cadherin-Catenin-Komplex während der Embryonalentwicklung von Zebrafisch (Danio rerio):
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| Sprache: | German |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1. EINLEITUNG. 1
1.1 DIE FRUEHE EMBRYONALPHASE VON
DANIO RERIO. 8
2. MATERIAL UND METHODEN. 11
2.1 BEZUGSQUELLEN. 11
2.1.1 CHEMIKALIEN. 11
2.1.2 RADIOCHEMIKALIEN. 11
2.1.3 OLIGONUKLEOTIDE. 11
2.1.4 ENZYME. 12
2.2 VERSUCHSTIERE. 12
2.2.1 EMBRYONALSTADIEN. 12
2.3 ZIELLINIEN. 12
2.4 ANTIKOERPER. 13
2.5 HAEUFIG VERWENDETE PUFFER UND LOESUNGEN. 13
2.6 MEDIEN FUER DIE BAKTERIENZELLKULTUR. 14
2.7 VEKTOREN UND WIRTSBAKTERIEN. 14
2.8 GENBANKEN. 15
2.9 PRIMER. 15
2.10 ZELLKULTUR. 16
2.10.1 KULTURBEDINGUNGEN. 16
2.10.2 METABOLISCHE MARKIERUNG VON ZELLEN. 17
2.11 PROTEINBIOCHEMISCHE UND IMMUNCHEMISCHE METHODEN 17
2.11.1 GEWINNUNG VON KANINCHEN-ANTISEREN. 17
2.11.1.1 ANTIGEN. 17
2.11.1.2 PEPTID-KLH-KONJUGAT. 17
2.11.1.3 IMMUNISIERUNG. 18
2.11.1.4 AFFINITAETSREINIGUNG VON ANTIKOERPERN. 18
2.11.2 HERSTELLUNG VON LYSATEN. 19
2.11.2.1 LYSATE FUER DIE IMMUNPRAEZIPITATION. 19
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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SEITE
2.11.2.2 GANZZELLEXTRAKTE UND GEWEBEEXTRAKTE FUER IMMUNOBLOTANALYSEN. 19
2.11.3 IMMUNPRAEZIPITATION. 20
2.11.4 IMMUNOBLOT. 21
2.11.5 POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE VON PROTEINEN (SDS-PAGE). 22
2.11.5.1 FAERBEN VON PROTEINEN IN POLYACRYLAMIDGELEN MIT COOMASSIE-BLAU.
23
2.11.5.2 DETEKTION VON PROTEINEN IN POLYACRYLAMIDGELEN
DURCH FLUOROGRAPHIE. 23
2.11.6 PROTEINBESTIMMUNG. 24
2.11.7 INDIREKTE IMMUNFLUORESZENZ.-. 24
2.12 MOLEKULARBIOLOGISCHE METHODEN. 25
2.12.1 REINIGUNG VON DNA. 25
2.12.2 PRAEPARATION VON PLASMID-DNA. 26
2.12.2.1 ALKALISCHE PLASMID-DNA-SCHNELLPRAEPARATION. 26
2.12.2.2 GROSSANSATZ ZUR DNA-PRAEPARATION VON PLASMIDEN. 27
2.12.3 SPALTUNG VON DNA MIT RESTRIKTIONSENZYMEN. 27
2.12.4 AGAROSEGEL-ELEKTROPHORESE VON DNA-FRAGMENTEN. 27
2.12.5 ISOLIERUNG VON DNA-FRAGMENTEN AUS AGAROSEGELEN. 28
2.12.6
IN VITRO-AMPLIFIKATION VON DNA MITTELS
POLYMERASE-KETTENREAKTION. 28
2.12.7 KLONIERUNG ISOLIERTER DNA-FRAGMENTE. 29
2.12.7.1 PHOSPHATASEBEHANDLUNG LINEARER PLASMID-DNA. 29
2.12.7.2 LIGATION VON DNA-FRAGMENTEN MIT VEKTOR-DNA. 30
2.12.7.3 TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIENZELLEN. 30
2.12.8 DNA-SEQUENZIERUNG. 31
2.12.9 "SCREENING" EINER CDNA-BIBLIOTHEK IM
BAKTERIOPHAGEN-VEKTOR JTZAPII. 32
2.12.9.1 AUSPLATTIEREN EINER PHAGENSUSPENSION. 32
2.12.9.2 "SCREENING"MIT RADIOAKTIVEN DNA-SONDEN. 32
2.12.9.3 RADIOAKTIVE MARKIERUNG VON NUKLEINSAEUREN. 33
2.12.9.4 HYBRIDISIERUNG MIT RADIOAKTIVEN SONDEN. 34
SEITE
2.13 EMBRYOLOGISCHE METHODEN. 34
2.13.1 IMMUNFLUORESZENZ AN VOLLSTAENDIGEN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN. 34
2.13.2
IN
S/M-HYBRIDISIERUNG AN VOLLSTAENDIGEN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN. 35
2.13.3 HERSTELLUNG UND INJEKTION VON RNA IN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN. 37
3. ERGEBNISSE.39
3.1 NACHWEIS DIVERSER CADHERIN-TRANSKRIPTE IN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN
DES 64-ZELL-STADIUMS MITTELS RT-PCR. 39
3.2 KLONIERUNG VON ZEBRAFISCH-CADHERIN-CDNAS-. 44
3.3 KLONIERUNG DER ZEBRAFISCH-CX(E)-CATENIN-CDNA. 49
3.4 KLONIERUNG DER ZEBRAFISCH-SS-CATENIN-CDNA. 55
3.5 ANALYSE DER ZEBRAFISCH-SS-CATENINSEQUENZ. 56
3.6 RAEUMLICHE UND ZEITLICHE VERTEILUNG VON A(E)- UND SS-CATENIN
WAEHREND DER EMBRYONALENTWICKLUNG DES ZEBRAFISCHES
UND IM ADULTEN TIER. 63
3.6.1 ALPHA-UND SS-CATENIN IN ZEBRAFISCH-GEWEBEN UND ZELLYSATEN. 63
3.6.2 DIE ZELLULAERE LOKALISATION DER PROTEINE A-UND SS-CATENIN. 67
3.6.3 VERTEILUNG DER PROTEINE A-CATENIN UND SS-CATENIN
IN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN. 68
3.6.4 TRANSKRIPTION VON
A
UND SS-CATENIN IN ZEBRAFISCH-EMBRYONEN. 70
3.7 UEBEREXPRESSION VON ZEBRAFISCH-SS-CATENIN FUEHRT ZU DORSALISIERUNG
IN ZEBRAFISCH- UND
XENOPUS-EMBRYONEN. 74
4. DISKUSSION.78
5. ZUSAMMENFASSUNG. 95
6. ANHANG
(PHASEN DER EMBRYONALENTWICKUNG VON
DANIO RERIO). 97
7. LITERATURVERZEICHNIS 100 |
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