Expression der Kapsidproteine des humanen Papillomvirus Typ 16 mit rekombinanten Baculoviren:
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1996
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INHALTSVERZEICHNIS
1
EINLEITUNG
1
1.1
EINFUEHRUNG
UND
HISTORISCHER
UEBERBLICK
1
1.2
MOLEKULARGENETIK
UND
MEDIZINISCHE
BEDEUTUNG
VON
HPV
16
4
1.3
BACULOVIREN
ALS
VEKTOREN
FUER
DIE
EUKARYONTISCHE
GENEXPRESSION
9
2
MATERIAL
UND
METHODEN
13
2.1
MATERIALIEN
13
2.1.1
E.
COLI
-
BAKTERIENSTAEMME
YY
13
2.1.2
PLASMIDE
UND
OLIGONUKLEOTIDE
13
2.1.3
ANTIKOERPER
14
2.1.4
LAENGENSTANDARDS
14
2.1.5
CHEMIKALIEN,
KITS
UND
ENZYME
15
2.1.6
MATERIALIEN
FUER
DIE
ELEKTRONENMIKROSKOPIE
16
2.1.7
INSEKTENZELLEN
16
2.1.8
ZELLKULTURMATERIALIEN
18
2.1.9
ELISA-MATERIALIEN
18
2.1.10
INSEKTENZELLMEDIEN
18
2.1.11
REZEPTE,
LOESUNGEN
UND
PUFFER
20
2.1.12
COMPUTERPROGRAMME
UND
INTERNET-ADRESSEN
25
2.2
METHODEN
26
2.2.1
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
26
2.2.2
PLASMIDPRAEPARATION
26
2.2.3
RESTRIKTIONSVERDAUUNG
VON
DNA
27
2.2.4
PHOSPHORYLIERUNG
UND
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
27
2.2.5
ERZEUGUNG
VON
GLATTEN
DNA-ENDEN
MITTELS
KLENOW-FRAGMENT
28
2.2.6
ELEKTROPHORESE
UND
GELEXTRAKTION
29
2.2.7
AUTORADIOGRAPHIE
31
2.2.8
HERSTELLUNG
KOMPETENTER
E.COLI-ZELLEN
31
2.2.9
LIGATION
UND
KLONIERUNG
32
2.2.10
TRANSFORMATION
VON
KOMPETENTEN
E.COLI
32
2.2.11
ANLEGEN
VON
E.
CO/Z-DAUERKULTUREN
33
2.2.12
WESTEMBLOT
UND
IMMUNBLOT
34
2.2.13
PCR
UND
DNA-SEQUENZIERUNG
35
2.2.14
PROTEIN-SEQUENZIERUNG
37
2.2.15
IN
V/TRO-EXPRESSION
37
2.2.16
IN
VTTRO-MUTAGENESE
38
2.2.17
DAS
BACULOVIRUSSYSTEM
41
2.2.17.1
ALLGEMEINES
ZUR
INSEKTENZELLKULTUR
41
2.2.17.2
BESTIMMUNG
DER
ZELLZAHL
41
2.2.17.3
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
INSEKTENZELLEN
42
2.2.17.4
KONSTRUKTION
VON
REKOMBINANTEN
V
IREN
43
2.2.17.5
ISOLIERUNG
EINZELNER
REKOMBINANTER
VIRUSKLONE
MITTELS
PLAQUE-ASSAY
44
2.2.17.6
CHARAKTERISIERUNG
DER
REKOMBINANTEN
VIREN
45
2.2.17.7
AMPLIFIKATION
EINES
REKOMBINANTEN
VIRUSKLONS
46
2.2.17.8
BESTIMMUNG
DES
VIRUSTITERS
46
2.2.17.9
SUSPENSIONSKULTUREN
46
2.2.17.10
GEWINNUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
AUS
DEN
INFIZIERTEN
ZELLEN
47
2.2.18
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
TECHNIKEN
48
2.2.19
ELISA-TECHNIKEN
48
2.2.20
NUMERISCHE
SEQUENZVERGLEICHE
(ALIGNMENTS)
49
3
ERGEBNISSE
51
3.1
KLONIERUNG
VON
LI
UND
L2
IN
PCR-SCRIPT
SK(+)
51
3.2
IN
VIFRO-MUTAGENESE
VON
LI
UNDL2
54
3.3
SUBKLONIERUNG
VON
LI
UND
L2
IN
PBACPAK9
57
3.4
SEQUENZIERUNG
POSITIVER
KLONE
61
3.5
ETABLIERUNG
DER
INSEKTENZELLKULTUR
UND
TRANSFEKTION
DER
INSEKTENZELLEN
66
3.6
ISOLIERUNG
UND
AUFREINIGUNG
DER
REKOMBINANTEN
PROTEINE
70
3.7
ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE
ERGEBNISSE
76
3.8
IMMUNOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
76
4
DISKUSSION
79
4.1
DIE
KLONIERTEN
GENE
79
4.2
POESTTRANSLATIONALE
MODIFIKATIONEN
80
4.3
ZUR
STRUKTUR
DER
VLPS
83
4.4
ZUR
IMMUNOLOGIE
DER
SPAETEN
PROTEINE
VON
HPV
16
86
4.4.1
DER
HPV16-L1-VLP-ELISA
86
4.4.2
EINE
IMPFUNG
GEGEN
PAPILLOMVIREN
?
90
4.5
HITZESCHOCK-PROTEINE
UND
IHRE
MOEGLICHE
ROLLE
BEIM
KAPSID-ZSSEMWY
91
5
ZUSAMMENFASSUNG
96
6
LITERATUR
ANHANG:
OLIGONUKLEOTIDE
97 |
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