Untersuchungen zur Positionsklonierung des Gurke-Gens und Charakterisierung der Centromerregion von Arabidopsis thaliana:
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
2.
ERGEBNISSE
2.1.
ERGEBNISSE
ZUR
POSITIONSKLONIERUNG
DES
GK-GENS
2.1.1.
DAS
GK-GEN
KARTIERT
AUF
DAS
1.
CHROMOSOM
2.1.2.
IDENTIFIZIERUNG
VON
RAPD-MARKERN
IM
RFLP-INTER
VALL
UM
DAS
GK-GEN
2.1.3.
DAS
GK-GEN
KARTIERT
IN
DIE
CENTROMERREGION
DES
1.
CHROMOSOMS
2.1.4.
KARTIERUNG
VON
VIER
ALLELEN
DES
GK-GENS
GEGEN
DIE
CAPS-MARKER
GAPB
UND
NIA2
2.1.5.
DIE
YACS
DER
GI/KKE-REGION
2.1.6.
IDENTIFIZIERUNG
UND
ANORDNUNG
VON
NIA2-BACS
2.1.7.
EIN
CDNA-"SCREEN"
MIT
DEN
NIA2-BACS
IDENTIFIZIERT
KEINE
WEITEREN
GENE
2.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
CENTROMERREGION
2.2.1.
DER
PAT12-MARKER
2.2.2.
RAPD-FRAGMENTE
DES
GAPB-YACS
YUP19G10
SIND
REPETITIVER
NATUR
2.2.3.
NIA2
UND
GAPB-YAC-ENDEN
STELLEN
REPETITIVE
CEN
TROMERE
ELEMENTE
DES
CHROMOSOMS
1
UND
ANDERER
CHROMOSOMEN
DAR
2.2.4.
DIE
REPETITIVEN
SEQUENZEN
DER
NIA2-BACS
DEFINIEREN
DIE
PERICENTROMERISCHEN
BEREICHE
ALLER
FUENF
CHROMO
SOMEN
VON
ARABIDOPSIS
THALIANA
2.3.
ERGEBNISSE
DER
HETEROLOGEN
EN/SPM-TRANSPOSONMUTA
GENESE
3.
DISKUSSION
3.1.
POSITIONSKLONIERUNG
DES
GK-GENS
3.2.
CHARAKTERISIERUNG
DER
CENTROMERREGION
3.3.
HETEROLOGE
EN/SPM-TRANSPOSON-MUTAGENESE
4.
ZUSAMMENFASSUNG
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
5.1.
ARABIDOPSIS
THALIANA
-LINIEN
5.2.
KLONE
5.3.
YAC-BIBLIOTHEKEN
5.4.
CDNA-BIBLIOTHEK
5.5.
BAC-BIBLIOTHEK
OS
OS
OS
OS
OS
OS
UI
(
J
I
4^
A
LP
LP
LP
TQ
TP
NJ
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H
-
M
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O
O
00
OS
O
TP
TP
00
LA
O
SO
SO
SO
00
OS
LP
I
-
6.
5.6.
GENETISCHE
METHODEN
61
5.6.1.
GENOTYPISIERUNG
VON
GK
61
5.6.2.
GENETISCHE
MARKER
61
5.6.2.1.
RFLP-MARKER
61
5.6.2.2.
RAPD-MARKER
61
5.6.3.
F2-KARTIERPOPULATION
62
5.6.4.
BERECHNUNG
GENETISCHER
ABSTAENDE
62
5.6.5.
"SCREEN"
AUF
EN-TRANSPOSON-INDUZIERTE
EMBRYONAL
MUTANTEN
63
5.7.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
METHODEN
64
5.7.1.
DNA-PRAEPARATIONEN
64
5.7.1.1.
GENOMISCHE
DNA
AUS
ARABIDOSIS
THALIANA
64
5.7.1.1.1.
DNA-MAXI-PRAEPARATION
64
5.7.1.1.2.
DNA-PCR-MINIPRAEPARATION
64
5.7.1.2.
PLASMID
UND
COSMID-DNA
AUS
E.
COLI
65
5.7.1.3.
BAC-DNA-PRAEPARATION
65
5.7.1.4.
PHAGEN-DNA-PRAEPARATIONEN
65
5.7.1.5.
YAC/HEFE-DNA
65
5.7.1.6.
YAC-DNA
FUER
PULS-FELD-GEL-ELEKTROPHORESE
66
5.7.2.
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEINKUBATION
66
5.7.3.
SOUTHERN-BLOTS
66
5.7.4.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA
67
5.7.5.
HYBRIDISIERUNGEN
67
5.7.6.
SEQUENZIERUNG
MITTELS
FLUORESZENZ-MARKIERTER
DIDES
OXINUKLEOTIDE
67
5.7.7.
COMPUTER-GESTUETZTE-SEQUENZANALYSEN
68
5.7.8.
PULS-FELD-GEL-ELEKTROPHORESE
68
5.7.9.
"PLASMID-RESCUE"
VON
YAC-ENDEN
68
5.7.10.
PCR
68
5.7.10.1.
N/SPM-TRANSPOSON-PCR
68
5.7.10.2.
INVERSE
PCR
VON
YAC-ENDEN
69
5.7.11.
KLONIERUNG
VON
PCR-PRODUKTEN
71
5.7.12.
TRANSFORMATION
DURCH
ELEKTROPORATION
71
5.7.13.
"SCREENING"
DER
YAC-BIBLIOTHEK
71
5.7.14.
"SCREENING"
DER
BAC-BIBLIOTHEK
72
5.7.15.
"SCREENING"
DER
CDNA-BIBLIOTHEK
72
LITERATUR
73
ANHANG
A
RFLP-KARTIERUNGSERGEBNISSE
8
1
ANHANG
B
CAPS-KARTIERUNGSERGEBNISSE
8
5
ANHANG
C
SEQUENZEN
DER
NIA2-YAC-ENDEN
9
5
ANHANG
D
CAPS
UND
PCR-MARKER
9
7
1.
CAPS-MARKER
235
9
7
2.
CAPS-MARKER
PAT12
9
8
3.
CAPS-MARKER
GAPB
9
9
4.
CAPS-MARKER
NIA2
100
5.
PCR-MARKER
9B61I
101
6.
PCR-MARKER
2G81I
102
7.
PCR-MARKER
LOGLLI
103
8.
PCR-MARKER
LOGLRE
104
9.
PCR-MARKER
5C9-EST
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