Mikrobiologisch-biochemisches Praktikum:
Gespeichert in:
| Vorheriger Titel: | Biochemisch-mikrobiologisches Praktikum |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Stuttgart [u.a.]
Thieme
1999
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| Ausgabe: | 2., völlig überarb. Aufl. |
| Schriftenreihe: | Flexibles Taschenbuch
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| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | XIV, 485 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 3136859022 |
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Inhaltsverzeichnis
1 Einführung in mikrobiologisches Arbeiten:
Richtlinien und allgemeine Arbeitstechniken 1
1.1 Vorsichtsmaßnahmen bei Arbeiten mit Mikroorganismen 1
1.1.1 Vermeiden von Laborinfektionen 1
1.1.2 Notfallmaßnahmen bei Laborinfektionen 3
1.2 Bedeutung sterilen und sauberen Arbeitens 4
1.2.1 Arbeitsplatz und Gerätepflege 4
1.2.2 Desinfektion und Sterilisation 5
1.3 Kultivierung von Mikroorganismen 13
1.3.1 Kulturmedien 13
1.3.2 Laboratoriums Grundausstattung und Kulturgefäße 16
1.3.3 Isolierung, Bezug und Kurzzeithaltung von Mikroorganismen ... 18
1.4 Bestimmung der Keimzahl 21
Literatur 31
2 Stammhaltung und Konservierung von Mikroorganismen 32
2.1 Stammhaltung aerober und anaerober Mikroorganismen
(Kurzzeithaltung) 34
2.2 Konservierte Kulturen (Langzeithaltung) 36
2.2.1 Trockenkonservierung 36
2.2.2 Gefrierkonservierung 44
2.2.3 Konservierung unter Paraffinöl 49
2.2.4 Konservierung in steriler Erde 50
2.3 Versand von Mikroorganismen 50
Literatur 51
3 Identifizierung von Bakterien 52
3.1 Allgemeine Bakterienidentifizierung 54
3.1.1 Morphologie 55
3.1.2 Färbungen 56
3.1.3 Wachstumsbedingungen 65
3.1.4 Verhalten gegen Sauerstoff 67
3.1.5 Stoffwechseleigenschaften 69
3.2 Identifizierung von gleitenden Bakterien 80
3.2.1 Nachweis der Gleitbewegung 80
3.2.2 Nachweis von Carotinoiden und Flexirubinen 81
3.2.3 Nachweis von bakteriolytischen Eigenschaften 81
X Inhaltsverzeichnis 3.3 Identifizierung von Mikroorganismen mit standardisierten
Testsystemen 82
3.3.1 Identifizierung von Enterobacteriaceae 83
3.4 Identifizierung von Bakterien mit chemotaxonomischen und
molekularbiologischen Methoden 88
3.4.1 Fettsäuren aus Bakterien (FAME) 89
3.4.2 Bestimmung des GC Gehaltes der DNA 92
3.4.3 DNA DNA Hybridisierung 95
3.4.4 Sequenzierung des 16S rRNA Gens 98
Literatur 107
4 Wachstum der Mikroorganismen 109
4.1 Wachstum in einer Batch Kultur 109
4.1.1 Aufnahme einer Wachstumskurve 113
4.1.2 Wachstum in Abhängigkeit von verschiedenen
Kohlenstoffquellen 115
4.1.3 Wachstum in Abhängigkeit von der Substratkonzentration 117
4.1.4 Wachstum aerober Mikroorganismen in Abhängigkeit von der
Sauerstoffversorgung 120
4.2 Wachstum der Mikroorganismen in einer kontinuierlichen
Kultur 121
4.3 Synchronisation der Zellteilung in Kulturen
von Mikroorganismen 128
4.4 Zellzyklusanalysen an Hefen 132
Literatur 136
5 Bakteriophagen 137
5.1 Anreicherungsverfahren von Bakteriophagen 141
5.2 Stufenwachstum der Phagen und Phagenzüchtung
in Flüssigkultur 143
5.2.1 Züchtung von Tl Phagen 144
5.2.2 Züchtung von Lambda Phagen 146
5.3 Versuche mit temperenten Phagen 147
5.3.1 Nachweis der Lysogenie 148
5.3.2 Isolierung von temperenten Phagen und sensitiven Bakterien¬
stämmen 150
Literatur 153
6 Untersuchungen mit anaerob wachsenden Bakterien 155
Literatur 165
7 Antibakterielle Wirkstoffe
(Synthetische Wirkstoffe, Antibiotika) 166
7.1 Produktion durch Mikroorganismen 167
7.2 Identifizierung eines antibakteriellen Wirkstoffes 171
Inhaltsverzeichnis XI
7.3 Resistenz gegen antibakterielle Stoffe 175
7.4 Bestimmungsmethoden für antibakterielle Aktivitäten 179
7.4.1 Verdünnungstest 179
7.4.2 Agardiffusionstest 182
7.4.3 Kinetische Meßmethoden für antibakterielle Wirkungen 188
7.4.4 Konzentrationsbestimmungen von antibakteriellen Stoffen 190
7.5 Interaktionen zwischen verschiedenen Antibiotika 196
Literatur 204
8 Erzeugung von Mutanten und Photoreparatur 206
8.1 Mutationsauslösung mit N Methyl N nitro N nitrosoguanidin
(MNNG) 208
8.1.1 Behandlung einer Bakterienkultur mit Mutagen
und Bestimmung der Inaktivierung 210
8.1.2 Isolierung und Bestimmung von Mutanten nach Mutagen¬
behandlung 213
8.1.3 Mutantenanreicherungsverfahren 213
8.1.4 Stempeltest 215
8.1.5 Strichtest 220
8.1.6 Blättchentest 220
8.1.7 Deutung von auxotrophen Mutantentypen 222
8.1.8 Isolierung verschiedener Mutantentypen 226
8.2 Mutationsauslösung durch Transposition 227
8.2.1 Transposonmutation mit dem Phagen Mu 230
8.3 Photoreparatur bei Bakterien 235
Literatur 240
9 Mutagenitäts und Toxizitätsprüfung mit bakteriellen
Systemen 242
9.1 Mutagenitätsprüfung mit bakteriellen Systemen 243
9.1.1 Mutagenitätstest mit metabolischer Aktivierung
von Testverbindungen (Arnes Test) 247
9.1.2 Arnes Test mit Hefemikrosomen 254
9.1.3 Repair Test 256
9.2 Toxizitätstest mit Bakterien 258
9.2.1 Der Leuchthemmtest mit Leuchtbakterien 258
9.2.2 Der Schwärmhemmtest mit Proteus mirabilis 261
Literatur 263
10 Untersuchungen von Biosynthesen mit Hilfe von Mutanten .. 265
10.1 Untersuchungen von Biosynthesen mit Mangelmutanten 266
10.1.1 Kreuzfütterungstest mit Mangelmutanten 270
10.1.2 Lokalisierung eines Biosyntheseblocks von Mangelmutanten
durch einen Wachstumstest 271
l
%
i
XII Inhaltsverzeichnis 10.2 Akkumulation von Biosynthesezwischenprodukten der
Tryptophan Biosynthese, Isolierung und erste Charakterisierung . 273
Literatur 278
11 Regulation von Stoffwechselvorgängen 279
11.1 Einfacher Nachweis einer Regulation bei intakten Zellen 284
11.2 Versuche mit der biosynthetischen Threonindesaminase
(Repression, allosterische Hemmung und Aktivierung) 287
11.2.1 Herstellung der Enzymrohextrakte mit verschiedenen
Aufschlußverfahren 293
11.2.2 Bestimmung der spezifischen Aktivität der biosynthetischen
Threonindesaminase im Rohextrakt 293
11.2.3 Abhängigkeit des Threoninumsatzes von verschiedenen
Parametern 295
11.3 Induktion und Katabolitrepression der ß Galactosidase
von E.coli 298
Literatur 302
12 Proteinbiosynthese in vitro und in vivo bei Escherichia coli... 303
12.1 Zellfreie Proteinsynthese 306
12.2 Proteinsynthese in vivo 314
12.3 Untersuchungen an Ribosomen 316
Literatur 321
13 Isolierung und Charakterisierung von Desoxyribonuklein¬
säuren 322
13.1 Sedimentationsverfahren zur Stofftrennung 326
13.2 Isolierung von Plasmid DNA 329
13.3 Isolierung von Phagen DNA 334
13.4 Isolierung von genomischer DNA 337
13.5 Charakterisierung von Plasmid , Phagen und genomischer DNA
durch Spaltung mit Restriktionsenzymen 339
Literatur 347
14 Cenklonierung in Escherichia coli 349
14.1 Richtlinien zum Schutz vor Gefahren durch in vitro
neukombinierte Nukleinsäuren 353
14.1.1 Laborsicherheitsmaßnahmen 353
14.1.2 Biologische Sicherheitsmaßnahmen 355
14.2 Arbeitsschritte der Genklonierung 356
14.2.1 Präparative Spaltung von pBR322 Plasmid DNA
und Lambda Phagen DNA 356
14.2.2 Ligierung von Plasmid und Phagen DNA 359
14.2.3 Isolierung von kompetenten E. coli Zellen
und Plasmidtransformation 360
j Inhaltsverzeichnis XIII
I 14.2.4 Charakterisierung von rekombinanten Bakterienklonen 363
| 14.3 Klonierung und Expression des Luziferasegens von Vibrio fischen
i in Escherichia coli 366
Literatur 372
15 Erregerdetektion durch die Polymerasekettenreaktion (PCR) . 374
: 15.1 Nachweis der Methicillinreststenz von Staphylokokken durch
DNA Diagnostik mit der Polymerasekettenreaktion 374
Literatur 379
16 Transformation von chromosomaler DNA in Bacillus subtilis . 380
Literatur 388
17 Stoffbestimmungen mit Mikroorganismen 389
17.1 Aminosäurebestimmung durch Trübungsmessung 390
17.2 Vitaminbestimmung durch Trübungsmessung oder Messung
gebildeter Milchsäure 392
Literatur 395
18 Isolierung von Farbstoffen aus Bakterien 396
18.1 Cytochrom c 556 398
18.2 Prodigiosin 400
Literatur 402
19 Mikrobieller Abbau 403
19.1 Isolierung toluolabbauender Mikroorganismen aus Wasser¬
proben 404
19.2 Abwasseranalytik 409
19.2.1 Bestimmung des biochemischen Sauerstoffbedarfs
(Verdünnungs BSB nach DIN 38409 Teil 51) 410
19.3 Respirometrische Untersuchungen von Abbauvorgängen 416
19.3.1 Atmungsaktivität von Belebtschlamm beim Abbau verschiedener
Substanzen 416
19.3.2 Respirometrische BSB Bestimmung 419
19.3.3 Respirometrischer Abbaunachweis 422
19.4 Anaerober Abbau 423
Literatur 427
20 Stoffumwandlungen durch Mikroorganismen
(Biotransformationen) 429
20.1 Hydroxylierung von Progesteron mit Calonectria decora 429
20.2 Gewinnung von L Asparaginsäure mit immobilisierten
Escherichia coli Zellen 432
Literatur 435
XIV Inhaltsverzeichnis 21 Gewinnung von Metallen durch bakterielle Laugung
(Leaching Verfahren) 436
21.1 Perkolator Leaching 438
21.2 Submersleaching 441
21.2.1 Submersleaching mit chemolithotrophen Bakterien 441
21.2.2 Submerslaugung mit heterotrophen Mikroorganismen 443
Literatur 443
22 Mikrobiologische Trinkwasseruntersuchung nach der
Trinkwasserverordnung 444
22.1 Bestimmung der Koloniezahl 446
22.2 Nachweis von Escherichia coli und coliformen Bakterien 448
22.2.1 Flüssiganreicherung in Laktosebouillon 448
22.2.2 Isolierung von Escherichia coli und coliformen Keimen 449
22.2.3 Identifizierung von Escherichia coli und coliformen Keimen 450
22.3 Nachweis von sulfitreduzierenden sporenbildenden
Anaerobiern 452
22.4 Nachweis von Pseudomonas aeruginosa 455
22.5 Nachweis von Fäkalstreptokokken (Enterokokken) 456
22.6 Nachweis von Legionella pneumophila 457
22.7 Nachweis von atypischen Mykobakterien 459
22.8 Viren im Trinkwasser 460
Literatur 461
23 Pflanzenpathogene Pilze 463
23.1 Infektion von Äpfeln mit pilzlichen Erregern und
Kochsche Postulate 463
23.1.1 Isolierung und Bestimmung von Erregern der Apfelfruchtfäule .. 464
23.1.2 Infektion von Äpfeln 465
23.2 Biologische Bekämpfung von Gurkenmehltau mit einem
Hyperparasiten 466
Literatur 470
Medienanhang 471
Anhang: Empfehlungen zur Entsorgung von Abfällen 475
Sachverzeichnis 477
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