Die Pheromonantwort in Ustilago maydis: Kontrolle von Zellfusion und Pathogenität
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2.
EINLEITUNG
.
2
2.1.
USTILAGO
MAYDIS
.
2
2.2.
AUFBAU
DER
KREUZUNGSTYPLOCI
.
4
2.3.
DIE
PHEROMONANTWORT
IN
U.MAYDIS
.
7
2.4.
DIE
PHEROMONANTWORT
IN
S.CEREVISIAE
.
8
2.5.
DIE
PHEROMONANTWORT
IN
S.POMBE
.
9
2.6.
ZIELSETZUNG
.
12
3.
ERGEBNISSE
.
13
3.1.
CDNA
SUCHE
IN
EXPRESSIONSBANKEN
.
14
3.2.
DIE
ISOLIERUNG
DES
PRFL
-GENS
.
15
3.3.
PRFL
-MUTANTEN
SIND
STERIL
.
21
3.4.
PRFL
-MUTANTEN
SIND
APATHOGEN
.
22
3.5.
PRFL
REGULIERT
DIE
EXPRESSION
DER
PAARUNGSTYPGENE
.
25
3.6.
WIEDERHERSTELLUNG
DER
PATHOGENITAET
VONPZ/I-MUTANTEN
.
27
3.7.
UEBEREXPRESSION
VON
PRFL
IN
U.MAYDIS
.
29
3.8.
UEBEREXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
PRFL
AUS
E.COLI
.
29
3.9.
PRFL
BINDET
AN
PRE'S
IM
AL
UND
Z 2-LOCUS
.
31
3.10.
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
VON
PRFL
.
33
3.11.
PROMOTORANALYSE
VON
PRFL
.
35
3.12.
C-TERMINALE
DELETIONSANALYSE
VON
PRFL
.
39
3.13.
UNTERSUCHUNG
EINER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
PRFL
.
41
4.
DISKUSSION
.
43
4.1.
DIE
ISOLIERUNG
VON
PRFL
.
43
4.2.
PRFL
BINDET
AN
DIE
"PHEROMONE
RESPONSE
ELEMENTS"
.
46
4.3.
PRFL
REGULIERT
DIE
EXPRESSION
DER
PAARUNGSTYPGENE
.
48
4.4.
REGULATION
VON
PRFL
.
50
4.4.1.
PHEROMONINDUKTION
.
51
4.4.2.
AKTIVIERUNG
DURCH
CAMP
.
53
4.4.3.
REPRESSION
DURCH
DAS
B-HETERODIMER
.
54
4.4.4.
INDUKTION
DURCH
GLUCOSE
.
55
4.5.
REGULATION
VON
DIMORPHISMUS
UND
PATHOGENITAET
IN
U.MAYDIS
.
57
4.6.
AUSBLICK
.
60
INHALTSVERZEICHNIS
_
UE
5.
MATERIAL
UND
METHODEN
.
61
5.1,
CHEMIKALIEN
UND
ENZYME
.
61
5.2.
STAEMME
UND
KULTIVATIONSBEDINGUNGEN
.
61
5.3.
PLASMIDE
UND
PLASMIDKONSTRUKTIONEN
.
63
5.3.1.
ALLGEMEINE
VEKTOREN
.
63
5.3.2.
GENOMISCHE
SUBKLONE
VON
PRFL
.
64
5.3.3.
KONSTRUKTE
ZUM
GENAUSTAUSCH
.
64
5.3.4.
VEKTOREN
ZUR
REINIGUNG
VON
PRFL
AUS
E.COLI
.
65
5.3.5.
KONSTRUKTE
ZUR
EXPRESSION
VON
PRFL
IN
U.MAYDIS
.
65
5.3.6.
SG/P-REPORTERGENKONSTRUKTE
.
67
5.3.7.
HERSTELLUNG
VON
EXPRESSIONSBANKEN
IN
XZAPII
.
67
5.3.8.
OLIGONUKLEOTIDE
.
68
5.4.
MIKROBIOLOGISCHE
UND
GENETISCHE
METHODEN
.
68
5.4.1.
MIKROSKOPIE
.
68
5.4.2.
TRANSFORMATION
VON
E.COLI
.
68
5.4.3.
TRANSFORMATION
VON
U.
MAYDIS
.
69
5.4.4.
"IN
VIVO-EXCISION"
VON
XZAPII-PHAGEN
.
69
5.5.
MOLEKULARBIOLOGISCHE
STANDARDTECHNIKEN
.
70
5.6.
ISOLIERUNG
VON
NUKLEINSAEUREN
.
70
5.6.1.
PLASMID-PRAEPARATION
AUS
E.COLI'.
.
70
5.6.2.
PRAEPARATION
VON
CHROMOSOMALER
DNA
AUS
U.MAYDIS'.
.
70
5.6.3.
PRAEPARATION
VON
GESAMT-RNA
AUS
U.MAYDIS
.
71
5.6.4.
ANREICHERUNG
VON
POLYA
+
-RNA
.
71
5.7.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
72
5.7.1.
NICK-TRANSLATION
.
72
5.7.2.
AUFFUELLEN
UEBERSTEHENDER
3'-ENDEN
.
72
5.7.3.
PHOSPHORYLIERUNG
VON
5
'-ENDEN
.
72
5.7.4.
ELUTION
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
POLYACRYLAMID
GELEN
.
72
5.8.
TRANSFER
VON
NUKLEINSAEUREN
AUF
NYLON-MEMBRANEN
.
73
5.8.1.
SOUTHERN-BLOT
.
73
5.8.2.
DURCHMUSTERUNG
EINER
PHAGEN-BANK
.
73
5.8.3.
NORTHERN-BLOT
.
73
5.8.4.
GENSONDEN
DIE
BEI
DEN
NORTHERN
ANALYSEN
VERWENDET
WURDEN
.
74
5.9.
ISOLIERUNG
DES
PR/7-GENS
.
74
5.9.1.
SEQUENZIERUNG
DES
PRFL-LOCAS
.
74
5.9.2.
PRIMER
EXTENSION
.
75
5.10.
UEBEREXPRESSION
UND
REINIGUNG
VON
PRFLI-289AUS
E.COLI
.
75
5.11.
PROTEINBIOCHEMISCHE
METODEN
.
76
5.11.1.
GEWINNUNG
VON
PROTEINEXTRAKTEN
AUS
U.MAYDIS
.
76
5.11.2.
HEPARIN-SEPHAROSE
CHROMATOGRAPHIE
.
76
5.11.3.
WESTERN
BLOT
.
76
5.11.4.
IMMUNOLOGISCHER
NACHWEIS
VON
PROTEINEN
IM
WESTERN
BLOT
.
77
5.11.4.
IMMUNOPRAEZIPITATION
VON
PROTEINEN
.
77
5.12.
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEIN-DNA
INTERAKTIONEN
.
77
5.12.1.
"IN
VIVO
FOOTPRINTING"
.
77
5.12.2.
GEL-RETARDATION
.
78
5.12.3.
DNASEL-PROTEKTIONSEXPERIMENTE
.
78
5.12.4.
SOUTH-WESTERN
ANALYSE
.
79
5.12.5.
ISOLIERUNG
VON
CDNA-KLONEN
AUS
EXPRESSIONSBANKEN
.
79
6.
LITERATURVERZEICHNIS
.
81 |
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