Charakterisierung des Glukosetransportes in Rattenherz-Endothelzellen: Einfluß von Insulin und Diabetes mellitus
Gespeichert in:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
VERZEICHNIS
DER
VERWENDETEN
ABKUERZUNGEN
I
1.
EINLEITUNG
1
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
8
2.1
VERWENDETE
GERAETE
UND
CHEMIKALIEN
8
2.2
ISOLIERUNG
KARDIALER
ENDOTHELZELLEN
1
1
2.2.1
GEWINNUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
AUS
EINEM
HERZPERFUSAT
11
2.2.2
GEWINNUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
AUS
DEM
GESAMTEN
HERZEN
13
2.2.2.1
AUFTRENNUNG
DER
HERZZELLEN
NACH
IHRER
DICHTE
13
23
ZCLLKULTIVICRUNG
15
2.4
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZELLEN
16
2.4.1
MORPHOLOGIE
16
2.4.2
AUFNAHME
VON
AZETYLIERTEM
LDL
(DIL-FAERBUNG)
16
2.4.3
NACHWEIS
VON
FAKTOR
VIII
(VON
WILLEBRAND
FAKTOR)
16
2.4.4
FAERBUNG
DER
ZELLEN
MIT
RECA-L
17
2.5
VORBEHANDLUNG
DER
ZELLEN
17
2.6
NACHWEIS
VON
DIAPHORASE
18
2.7
BESTIMMUNG
VON
ZYKLISCHEM
GUANOSINMONOPHOSPHAT
19
2.8
LAKTATBESTIMMUNG
20
2.9
GLUKOSETRANSPORT
20
2.10
WESTERN
BLOT
21
2.10.1
PRAEPARATION
VOM
GESAMTMEMBRANEN
21
2.10.2
BEHANDLUNG
DER
ROHMEMBRANFRAKLIONEN
MIT
ENDOGLYCOSIDASE
F
22
2.10.3
PROTEINBESTIMMUNG
MIT
BICINCHONINSAEURE
(BCA)
22
2.10.4
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
23
2.10.4.1
GELFAERBUNG
25
2.10.5
PROTEINTRANSFER
(WESTERN
BLOT,
SEMI-DRY
VERFAHREN)
26
2.10.6
INKUBATION
DER
BLOTMEMBRANEN
MIT
DEM
ERSTEN
ANTIKOERPER
27
2.10.7
DETEKTION
DES
ERSTEN
ANTIKOERPERS
MIT
,25
L-PROTEIN
A
27
2.11
NORTHERN
BLOT
28
2.11.1
ISOLIERUNG
VON
RNA
28
2.11.2
ELEKTROPHORETISCHE
A
UFTRENNUNG
DER
RNA
29
2.11.3
RNA-TRANSFER
UND
RNA-FIXIERUNG
30
2.11.4
CDNA-GEWINNUNG
31
2.11.4.1
TRANSFORMATION
31
2.11.4.2
PLASMIDPRAEPARATION
33
2.11.4.3
ISOLIERUNG
VON
CDNA-FRAGMENTEN
33
2.11.4.4
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
CDNA-FRAGMCNTEN
35
2.11.4.5
TRENNUNG
DER
MARKIERTEN
FRAGMENTE
VON
NICHTINKORPORIERTEN
PLASMIDEN
35
2.11.5
HYBRIDISIERUNG
36
2.11.5.1
PRAEHYBRIDISIERUNG
36
2.11.5.2
HYBRIDISIERUNG
37
2.12
DIABETISCHES
TIERMODELL
(STRCPTOZOTOCIN-DIABETCS)
37
3.
ERGEBNISSE
38
3.1
ISOLIERUNG
KARDIALER
ENDOTHELZELLEN
38
3.1.1
GEWINNUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
AUS
EINEM
HERZPERFUSAT
38
3.1.2
GEWINNUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
AUS
DEM
GESAMTEN
HERZEN
39
3.2
CHARAKTERISIERUNG
DER
ZEILEN
42
3.2.1
MORPHOLOGIE
42
3.2.2
DIL-FAERBUNG
44
3.2.3
NACHWEIS
VON
FAKTOR
VIH
(VON
WILLEBRAND
FAKTOR)
45
3.2.4
FAERBUNG
DER
ZELLEN
MIT
RECA-1
46
3.2.5
NACHWEIS
VON
NO-SYNTHASE-AKTIVITAET
47
A)
NACHWEIS
VON
DIAPHORASC
47
B)
NACHWEIS
VON
CGMP
48
3.3
STOFFWECHSEL
DER
ZELLEN
49
3.3.1
LAKTATBILDUNG
49
3.3.2
GLUKOSETRANSPORT
50
3.4
IDENTIFIZIERUNG
DES
GLUKOSETRANSPORTERS
53
3.4.1
WESTERN
BLOT
54
3.4.2
NORTHERN
BLOT
57
3.5
EINFLUSS
VON
GLUKOSE
AUF
RATTENHERZ-ENDOTHELZELLEN
59
3.6
EINFLUSS
VON
DIABETES
MELLITUS
AUF
RATTENHERZ-ENDOTHELZELLEN
63
3.6.1
DIABETES
MELLITUS
63
3.6.2
WESTERN
BLOT
,
64
3.6.3
NORTHERN
BLOT
65
3.6.4
GLUKOSETRANSPORT
66
4.
DISKUSSION
69
4.1
ISOLIERUNG
UND
CHARAKTERISIERUNG
VON
ENDOTHELZELLEN
70
4.2
GLUKOSEAUFNAHME
UND
IDENTIFIZIERUNG
DES
GLUKOSETRANSPORTERS
74
4.2.1
GLUKOSEAUFNAHME
IN
RHEC
75
4.2.2
IDENTIFIZIERUNG
DES
GLUKOSETRANSPORTERS
75
43
EINFLUSS
VON
DIABETES
MELLITUS
AUF
RATTENHERZ-ENDOTHELZELLEN
83
5.
ZUSAMMENFASSUNG
88
6.
LITERATURVERZEICHNIS
90 |
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