Xenobiotika und posthypoxische Reoxigenierung: vergleichende biochemische und morphologische Veränderungen von Hepatozyten
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1996
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INHALT
I. EINLEITUNG 4
1.1. PATHOGENETISCHE BEDEUTUNG FREIER RADIKALE 4
1.2. NACHWEIS RADIKALISCHER SCHAEDIGUNGEN 8
1.3. XENOBIOTIKAINDUZIERTEHEPATOPATHIEN 9
1.4. EXPERIMENTELLE MODELLE FUER DIE OXIDATIVE SCHAEDIGUNG VON 12
HEPATOZYTEN
N. PROBLEMSTELLUNG 16
M. MATERIAL UND METHODEN 18
3.1. REAGENZIEN UND CHEMIKALIEN 18
3.2. TIEREXPERIMENTELLE UNTERSUCHUNGEN 19
3.2.1. HEPATOZYTENPRAEPARATION 19
3.2.2. INKUBATION DER HEPATOZYTEN 21
3.2.3.
LN VIVO LANGZEITBEHANDLUNG MIT CYCLOSPORIN A 22
3.3. ANALYTIK VON PURINNUKLEOTIDEN, -NUKLEOSIDEN UND -NUKLEOBASEN 23
MITTELS DER HPLC
3.4. BESTIMMUNG DER CYCLOSPORIN A-KONZENTRATION MITTELS HPLC 24
3.5. BESTIMMUNG DER KONZENTRATION DES REDUZIERTEN UND 25
OXIDIERTEN GLUTATHIONS
3.6. DIREKTNACHWEIS VON RADIKALEN DURCH ELEKTRONENSPIN- 26
RESONANZSPEKTROMETRIE
3.7. MORPHOLOGISCHE CHARAKTERISIERUNG DER ZELLEN 27
3.7.1. ELEKTRONENMIKROSKOPISCHE DARSTELLUNGEN 27
3.7.2. HISTOCHEMISCHE UNTERSUCHUNGEN 27
1
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.8. BESTIMMUNG DER PROTEINGEBUNDENEN CARBONYLVERBINDUNGEN 28
3.9. MESSUNG DAR PROTEMGEBUNDENEN THIOLGRUPPEN 29
3.10. METHODE ZUR BESTIMMUNG VON MALONDIALDEHYD 29
3.11. STATISTISCHE AUSWERTUNG 30
IV. ERGEBNISSE 31
4.1. NORMOXISCHE INKUBATION VON HEPATOZYTEN 31
4.2. INKUBATION VON HEPATOZYTEN MIT TRICHLORBROMMETHAN 34
4.2.1. PURINNUKLEOTIDMESSUNG DURCH DIE 34
GRADIENTEN-IONENPAAR-UMKEHRPHASEN-HPLC
4.2.2.1 STOERUNGEN DES PURINSTOFFWECHSELS VON HEPATOZYTEN WAEHREND 36
INKUBATION MIT TRICHLORBROMMETHAN
4.2.2.2. ATP-TUMOVER 40
4.2.3. MORPHOLOGISCHE VERAENDERUNGEN 41
4.2.4. NACHWEIS RADIKALISCHER BELASTUNG MIT HILFE 42
DER ELEKTRONENSPINRESONANZ
4.3. HYPOXIE UND REOXIGENIERUNG VON HEPATOZYTEN 43
4.3.1. PROTEINGEBUNDENE THIOLGRUPPEN 43
4.3.2. DIREKTER NACHWEIS VON SAUERSTOFFRADIKALEN MITTELS 44
, ELEKTRONENSPINRESONANZ
4.3.3. CARBONYLVERBINDUNGEN 46
4.3.3.1. BIOCHEMISCHE ANALYSE 46
4.3.32. HISTOCHEMISCHE BESTIMMUNG 47
4.3.4. ULTRASTRUKTURELLE UNTERSUCHUNGEN AN HEPATOZYTEN 48
4.4.
IN VIVO UND IN VITRO WIRKUNGEN VON CYCLOSPORIN A 52
4.4.1. BESTIMMUNG VON CYCLOSPORIN A 52
4.4.2. INKUBATION VON ISOLIERTEN HEPATOZYTEN MIT CYCLOSPORIN A 53
4.4.2.1. EINFLUSS VON CYCLOSPORIN A AUF DAS NUKLEOTIDSPEKTRUM 53
2
4.4.2.2. NACHWEIS DER OXIDATIVEN BELASTUNG DURCH BESTIMMUNG DES 55
GLUTATHIONSTATUS UND VON MALONDIALDEHYD
4.4.3. LANGZEITAPPLIKATION VON CYCLOSPORIN A
IN VIVO 57
4.4.3.1. CYCLOSPORINSPIEGEL UND GEWICHTSENTWICKLUNG WAEHREND DER 57
4 WOCHEN DER UNTERSUCHUNG
4.4.3.2. PURINNUKLEOTIDE 58
4.4.3.3. GLUTATHIONSTATUS 59
4.4.3.4. ULTRASTRUKTURELLE VERAENDERUNGEN 61
V. DISKUSSION 64
5.1. ZUSAMMENHAENGE ZWISCHEN RADIKALISCHEN SPEZIES UND 64
PURINSTOFFWECHSEL
5.2. VERAENDERUNGEN AN HEPATOZYTEN DURCH TRICHLORBROMMETHAN 66
5.3. DAS HYPOXIE/ REOXIGENIERUNGSMODELL AN HEPATOZYTEN 71
5.4. CYCLOSPORIN A - EIN BEISPIEL FUER RADIKALISCHE SCHAEDIGUNG DURCH 76
MEDIKAMENTE
5.5. GEMEINSAMKEITEN UND UNTERSCHIEDE 79
5.6. ANREGUNGEN FUER WEITERFUEHRENDE STUDIEN 83
VI. ZUSAMMENFASSUNG 84
VII. LITERATUR 86
VIII. ANHANG 95
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