Charakterisierung des Mas-Protoonkogens:
Gespeichert in:
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|---|---|
| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
|
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
.
1
1.1.
IDENTIFIZIERUNG
DES
A/AS-PROTOONKOGENS
.
1
1.2.
SEQUENZVERGLEICH
.
1
1.3.
EXPRESSION
DES
MAS-GENS
.
2
1.4.
FUNKTION
DES
A/AR-GENPRODUKTS
.
3
1.5.
SIGNALTRANSDUKTION
.
5
1.6.
IMPRINTING
.
7
1.7.
RENIN-ANGIOTENSIN-SYSTEM
IM
GEHIRN
.
8
1.8.
TRANSGENE
TECHNIKEN
.
10
1.9.
ZIEL
DER
ARBEIT
.
13
2.
MATERIAL.
YYYYYYYYYYYYYYYY
14
2.1.
BAKTERIENSTAEMME
.
14
2.2.
VEKTOREN
.
14
2.2.1.
VEKTOREN
ZUR
KLONIERUNG
.
14
2.2.2.
VEKTOREN MIT
EINKLONIERTEN
FRAGMENTEN
.
14
2.3.
ZELLINIEN
.
17
2.4.
MAUSSTAEMME
.
18
2.5.
ENZYME
.
18
2.6.
OLIGONUKLEOTIDE
.
18
2.7.
RADIOCHEMIKALIEN
.
19
2.8.
MATERIALIEN
ZUR
DOKUMENTATION
.
19
2.9.
MEDIEN
.
19
2.9.1.
BAKTERIENKULTUR
.
19
2.9.2.
ZELLKULTURMEDIEN
.
20
2.10.
STAMMLOESUNGEN,
PUFFER
UND
GELE
.
21
2.10.1.
STAMMLOESUNGEN
UND
PUFFER
.
21
2.10.2.
GELE
.
23
2.11.
CHEMIKALIEN
.
24
2.12.
GEBRAUCHSFERTIGE
REAKTIONSSYSTEME
.
25
2.13.
GERAETE
.
25
2.14.
VERSUCHSANORDNUNGEN
FUER
VERHALTENSTESTS
.
25
2.14.1.
YYMORRIS
WATER
MAZE
"
.
26
2.14.2.
YYELEVATED
PLUS
MAZE
"
.
26
3.
METHODEN
.
27
3.1.
DNA
.
27
3.1.1.
TECHNIKEN
ZUR
KLONIERUNG
.
27
3.1.1.1.
RESTRIKTION
.
27
3.1.1.2.
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
.
27
3.1.1.3.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
VEKTORENDEN
.
27
3.1.1.4.
AUFFUELLEN
UEBERHAENGENDER
DNA-ENDEN
.
27
3.1.2.
BESTIMMUNG
VON
DNA-KONZENTRATIONEN
.
28
3.1.3.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
.
28
3.1.4.
DNA-TRANSFORMATION
IN
BAKTERIEN
.
28
3.1.5.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
.
28
3.1.5.1.
MINI-PRAEPARATION
.
29
3.1.5.2.
MAXI-PRAEPARATION
.
29
3.1.6.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
ES-ZELLEN
ZUR
PCR-ANALYSE.
29
3.1.7.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
ES-ZELLEN
ZUR
SOUTHEM
BLOT-ANALYSE
.
29
3.1.8.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
TIERSCHWAENZEN
.
30
3.1.9.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
OHREN
UND
EMBRYONEN
.
30
3.1.9.1.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
MAUSOHREN
.
30
3.1.9.2.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
MAUSEMBRYONEN
.
31
3.1.10.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
.
31
3.1.11.
SOUTHEM-BLOT-TECHNIK
.
31
3.1.11.1.
AUFTRENNUNG
DER
DNA
IM
AGAROSEGEL
UND
KAPILLAR-BLOT
.
31
3.1.11.2.
HYBRIDISIERUNG
.
32
3.1.12.
DNA-SEQUENZIERUNG
UND
SEQUENZANALYSE
.
32
3.1.12.1.
SEQUENZIERUNG
.
32
3.1.12.2.
SEQUENZANALYSE
.
32
3.1.13.
HERSTELLUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
.
33
3.1.13.1.
HERSTELLUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
DER
GROESSE
100-1500BP
.
33
3.1.13.2.
HERSTELLUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
DER
GROESSE
1
500-20000BP
.
33
3.1.13.3.
CYCLE-PCR
.
34
3.1.14.
KLONIERUNG
VON
PCR-FRAGMENTEN
.
36
3.2.
RNA
.
36
3.2.1.
RNA-EXTRAKTION
AUS
ORGANEN
UND
EMBRYONEN
.
36
3.2.2.
REVERSE
TRANSKRIPTION
.
36
3.2.3.
A/AR-CDNA-ISOLIERUNG
.
37
3.2.4.
RNASE-PROTEKTION-ASSAY
.
37
3.3.
ZELLKULTUR
.
39
3.3.1.
ALLGEMEINES
ZUR
ZELLKULTUR
.
39
3.3.2.
ISOLIERUNG
VON
PRIMAEREN
EMBRYONALEN
FIBROBLASTEN
.
39
3.3.3.
MITOMYCIN
C-BEHANDLUNG
EMBRYONALER
FIBROBLASTEN
.
40
3.3.4.
KULTIVIERUNG
VON
ES-ZELLEN
AUF
EMBRYONALEN
FIBROBLASTEN
.
40
3.3.5.
EINFRIEREN
UND
AUFTAUEN
VON
ZELLEN
.
40
3.3.6.
ELEKTROPORATION
UND
SELEKTION
DER
ES-ZELLEN
.
41
3.3.7.
VEREINZELUNG
DER
ES-ZELLKLONE
.
41
3.3.8.
VORBEREITUNG DER
ES-ZELLEN
ZUM
TRANSFER
.
41
3.3.9.
BESTIMMUNG
DER
LUZIFERASE-AKTIVITAET
.
42
3.4.
BLASTOCYSTEN-MANIPULATION
.
42
3.4.1.
ISOLATION
DER
BLASTOCYSTEN
.
42
3.4.2.
MANIPULATION
DER
BLASTOCYSTEN
.
43
3.4.3.
RETRANSFER
DER
BLASTOCYSTEN
.
43
3.5.
PHYSIOLOGISCHE
PARAMETER
.
43
3.5.1.
BLUTDRUCK-MESSUNG
.
43
3.5.2.
VARIANZUNTERSUCHUNGEN
.
44
3.5.3.
BESTIMMUNG
DER
SPERMIENZAHL
.
45
3.5.4.
LANGZEIT-POTENZIERUNG
.
46
3.6.
VERHALTENSSTUDIEN
.
46
3.6.1.
YYMORRIS-WATER-MAZE
"
.
46
3.6.1.
YYELEVATED
PLUS-MAZE
"
.
46
3.7.
STATISTISCHE
AUSWERTUNG
.
47
4.
ERGEBNISSE.YYYY.
-
.YY.YY.YY.YY.
.
48
4.1.
STRUKTUR
UND
REGULATION
DES
MAS-GENS
.
48
4.1.1.
MRNA
.
48
4.1.1.1.
5
'
-ENDE
DER
AFOR-MRNA
.
48
4.1.1.2.
3
'
-ENDE
DER
A/AS-MRNA
.
51
4.1.2.
EXON-LNTRON-STRUKTUR
.
52
4.1.2.1.
5
'
-UNTRANSLATIERTER
BEREICH
DER
RNA
.
52
4.1.2.2.
3
'
-UNTRANSLATIERTER
BEREICH
DER
RNA
.
54
4.1.2.3.
ZUSAMMENFASSUNG
DER
AFAR-GENSTRUKTUR
.
56
4.1.3.
PROMOTOR-STUDIEN
.
57
4.1.3.1.
ANZAHL
DER
PROMOTOREN
.
57
4.1.3.2.
AKTIVITAET
DER
PROMOTOREN
.
58
4.1.4.
AFAR-EXPRESSION
.
59
4.I.4.I.
AFAR-EXPRESSION
IN
DEN
ORGANEN
.
60
4.1.4.2.
RELATIVE
KONZENTRATIONEN
EINZELNER
AFAR-TRANSKRIPTE
.
61
4.1.4.3.
AFAR-EXPRESSION
IM
VERLAUF
DER
ONTOGENESE
.
63
4.1.4.4.
ALTERNATIVES
SPLICEN
.
64
4.I.4.4.I.
ENTDECKUNG
VON
EXON
9B
.
64
4.1.4.4.2.
VERHAELTNIS
DER
TRANSKRIPTE
MIT
EXON
2
ODER
EXON
3
.
64
4.1.4.4.3.
SPLICE-PRODUKTE
MIT
EXON
7
.
66
4.1.5.
SEQUENZANALYSE
DER
MRNA
.
66
4.I.5.I.
HOMOLOGIE
ZU
BEKANNTEN
GENEN
.
66
4.1.5.L1.
EXONSEQUENZEN
.
66
4.1.5.1.2.
INTRONSEQUENZEN
.
66
4.1.5.2.
TRANSLATIONSSTART
.
67
4.1.5.3.
OFFENE
LESERASTER.
.
68
4.2.
HERSTELLUNG
DES
AFOR-KNOCK
OUT
.
69
4.2.1.
HERSTELLUNG
DES
KONSTRUKTS
.
69
4.2.2.
HOMOLOGE
REKOMBINATION
IN
ES-ZELLEN
.
71
4.2.2.1.
ELEKTROPORATION
.
71
4.2.2.2.
ES-KLON-SELEKTION
.
72
4.2.2.3.
PCR-ANALYSE
DER
ES-ZELLEN
.
73
4.2.2.3.
1.
PCR-OPTIMIERUNG
.
73
4.2.2.3.2.
PCR-ANALYSE.
.
74
4.2.2.4.
4.2.3.
4.2.4.
4.2.4.I.
4.2.4.2.
4.2.5.
4.2.5.1.
4.2.5.1.1.
4.2.5.1.2.
4.2.5.I.3.
4.2.5.2.
4.2.5.2.1.
4.2.5.2.2.
4.2.S.3.
4.2.5.3.I.
4.2.5.3.2.
4.2.5.4.
4.2.5.S.
4.2.5.6.
4.2.5.6.I.
4.2.5.6.2.
4.2.5.7.
4.2.5.7.I.
4.2.5.7.2.
4.2.5.7.3.
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
DER
ES-ZELLEN
.
76
HERSTELLUNG
CHIMAERER
TIERE
.
77
ANALYSE
HETEROZYGOTER
TIERE
.
78
IDENTIFIZIERUNG
HETEROZYGOTER
TIERE
.
78
IMPRINTING
DES
AFAR-GENS
.
79
ANALYSE
HOMOZYGOTER
TIERE
.
81
IDENTIFIZIERUNG
HOMOZYGOTER
TIERE
.
81
PCR-ANALYSE
.
81
SOUTHEM-BLOT-ANALYSE
.
82
RPA-ANALYSE
.
83
FERTILITAET
.
.
.
84
WURFGROSSEN
.
84
SPERMIENZAHLEN
.
85
GEWICHTSKURVEN
.
85
KOERPERGEWICHT
.
85
VERHAELTNIS
ZWISCHEN
ORGAN
UND
KOERPERGEWICHT.
.
86
HISTOLOGIE
.
88
MORTALITAET
.
88
KARDIOVASKULAERE
PARAMETER
.
88
BLUTDRUCK
UND
HERZFREQUENZ
.
88
REGULATION
DES
BLUTDRUCKS
.
89
VERHALTENSSTUDIEN
UND
ELEKTROPHYSIOLOGIE
.
92
LANGZEIT-POTENZIERUNG
.
92
"
MORRIS
WATER
MAZE
"
.
94
"
ELEVATED
PLUS
MAZE
"
.
96
5.
5.1.
5.1.1.
5.1.2.
5.2.
5.2.1.
5.2.2.
DISKUSSION
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
-
YYYYYYYYYYYYYY YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
YYYYYY
98
DAS
AFAS-PROTOONKOGEN
.
98
GENSTRUKTUR
.
98
SPLICEN,
PROMOTOREN
UND
EXPRESSION
.
102
DER
AFAS-KNOCK
OUT
.
105
HETEROZYGOTE
TIERE
.
105
HOMOZYGOTE
TIERE
.
107
6.
ZUSAMMENFASSUNG
112
7.
LITERATUR
YYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYY
114
8.
ANLAGEN
YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY*YYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYYY
128 |
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