Transkriptionsregulation der viralen raf- und fgr-Onkogene in transformierten Rattenfibroblasten und transformationssupprimierten Zellhybriden:
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| Format: | Mikrofilm Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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| Ausgabe: | [Mikrofiche-Ausg.] |
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| Beschreibung: | Bonn, Univ., Diss., 1997. - Mikrofiche-Ausg. : 2 Mikrofiches : 24x |
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INHALTSVERZEICHNIS
I
A INHALTSVERZEICHNIS
_I
A INHALTSVERZEICHNIS I
B
ABBILDUNGSVERZEICHNIS
IV
C TABELLENVERZEICHNIS
V
D
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
VI
I EINLEITUNG
_1
II MATERIAL UND METHODEN
_14
IM. ZELUNIEN, PLASMIDE UND BAKTERIEN 14
II 1.1.
ZELUNIEN
14
II 1.2.
PLASMIDE
15
II 1.3.
BAKTERIEN
18
II 2. MEDIEN UND CHEMIKALIEN 19
II 2.1.
LOESUNGEN FUER DIE ZELLKULTUR
19
II 2.2.
MEDIEN FUER DIE BAKTERIENKULTUR
21
II 2.3.
HAEUFIG VERWENDETE PUFFER UND LOESUNGEN
21
II 3. ZELLKULTUR 22
II 3.1.
KULTIVIERUNG ADHAERENT WACHSENDER ZELLEN
22
II 3.2.
MYKOPLASMATEST
23
II 4. PROTEINBESTIMMUNG 24
II 5.
HERSTELLUNG REKOMBINANTER DNS 24
II
5.1. DNS-PRAEPARATIONEN 24
II
5.1.1.
PLASMIDPRAEPARATIONEN
24
II
5.1.2.
ISOLIERUNG ZELLULAERER DNS
25
II 5.2. RESTRIKTION UND AUFTRENNUNG VON
DNS
26
II 5.3. DNS-ELUTIONAUSAGAROSEGELEN 26
II 5.4. VORBEHANDLUNG UND LIGATION VON DNS-FRAGMENTEN UND VEKTOREN 27
II 6. TRANSFORMATION KOMPETENTER BAKTERIEN 29
II 6.1. HERSTELLUNG KOMPETENTER BAKTERIEN 29
II 6.2. TRANSFORMATION VON BAKTERIEN 30
II 7. RNS-PRAEPARATK N 30
II 8.
NUKLEINSAEURE-HYBRIDISATION 31
II 8.1. DNS/DNS-HYBRIDISATION 31
II 8.1.1. ALKALISCHER TRANSFER VON DNS 32
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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INHALTSVERZEICHNIS
II
II 8.1.2. HERSTELLUNG RADIOAKTIV MARKIERTER DNS-SONDEN 33
II 8.1.3. DNS/DNS-HYBRIDISATION 34
II 8.2.
RNS/DNS-HYBRIDISATION
34
II 8.3.
DOT-BLOT-HYBRIDISATION
35
II 8.3.1. BINDUNG GESAMTZELLULAERER DNS 35
II 8.3.2. BINDUNG VON PLASMID-DNS 36
II 8.3.3. BINDUNG GESAMTZELLULAERER RNS 36
II 9. TRANSFEKTION EUKARYONTISCHER ZELLEN 37
II
9.1.
TRANSFEKTION MIT DER KALZIUMPHOSPHAT-TECHNIK
37
II 9.2.
TRANSFEKTION MIT DEAE-DEXTRAN
38
II
9.3.
TRANSFEKTION MIT POLYKATIONEN
38
II
9.4.
TRANSFEKTION MIT LIPOSOMEN
39
II 10. ZELLFUSION 40
II 11. SELEKTIONSSYSTEME
FUER
EUKARYONTISCHE ZELLEN 40
II 11.1. SELEKTION TRANSFIZIERTER ZELLEN 40
II 11.2. SELEKTION HGPRT-DEFEKTER ZELLEN 41
II 11.3. SELEKTION VON ZELLHYBRIDEN 41
II 12. BESTIMMUNG VON TRANSFORMATIONSPARAMETERN 42
II 12.1.
VERANKERUNGSUNABHAENGIGES WACHSTUM
42
II 12.2.
WACHSTUM IN NACKTMAEUSEN
43
II 13. KARYOTYPANALYSE 43
II 14. ACTINOMYCIN-D-BEHANDLUNG VON ZELUNIEN 43
II 15. YYNUCLEAR RUN-ON"-TRANSKRIPTION 44
II 15.1.
PRAEPARATION VON ZELLKERNEN
44
II 15.2.
YYNUCLEAR RUN-ON"-REAKTION UND HYBRIDISATION
45
II 16. REPORTERGENTESTS 48
II 16.1. CAT-TEST 48
II 16.1.1. RADIOAKTIVER CAT-AKTIVITAETSTEST 48
II 16.1.2. ELISA ZUR CAT-BESTIMMUNG 50
II 16.2.
COLORIMETRISCHER SS-GALAKTOSIDASE-TEST
51
II
16.3.
LUZIFERASE-TEST
52
III ERGEBNISSE
_54
III 1. ETABLIERUNG VON TRANSFORMIERTEN ZELUNIEN 54
III 2. SOMATISCHE ZELLHYBRIDE DER TRANSFORMIERTEN ZELUNIEN MIT REF-
ZELLEN 55
INHALTSVERZEICHNIS
III
3. NACHWEIS DER TRANSFIZIERTEN ONKOGENE 58
LLL 4.
BESTIMMUNG VON WACHSTUMS- UND TRANSFORMATIONSPARAMETERN 59
LLL 4.1. WACHSTUMSPARAMETER 60
LLL 4.2.
ANHEFTUNGSUNABHAENGIGES WACHSTUM 62
LLL 4.3.
WACHSTUM IN NACKTMAEUSEN 63
LLL 4.4.
KARYOTYPANALYSEN 64
LLL 5.
TRANSKRIPTION DER ONKOGEN-HVIRNS 64
LLL 6.
HALBWERTSZEITBESTIMMUNG DER ONKOGEN-MRNS 67
LLL 7.
TRANSKRIPTIONSINITIATION DER ONKOGEN-MRNS 71
LLL 8.
AKTIVITAET DER VIRALEN PROMOTOREN 75
LLL
8.1.
HERSTELLUNG VON LTR-CAT-VEKTOREN
75
LLL 8.1.1. KONSTRUKTION VON PFGRCAT 75
LLL 8.1.2. KONSTRUKTION VON PRAFCATL UNCF2 76
LLL 8.2.
OPTIMIERUNG DER TRANSFEKTIONSBEDINGUNGEN
78
LLL 8.2.1. TRANSFEKTION MIT DER KALZIUMPHOSPHAT-TECHNIK 79
LLL 8.2.2. TRANSFEKTION MIT POLYKATIONEN 79
LLL 8.2.3. TRANSFEKTION MIT DEAE-DEXTRAN 80
LLL 8.2.4. TRANSFEKTION MIT LIPOSOMEN 80
LLL 8.3.
OPTIMIERUNG DER REPORTERGENTEST-BEDINGUNGEN
81
LLL 8.3.1. VERGLEICH DER AKTIVITAET VERSCHIEDENER VIRALER PROMOTOREN 81
LLL 8.3.2. SS-GALAKTOSIDASE-VEKTOREN ZUR INTERNEN STANDARDISIERUNG 82
LLL 8.3.3. LUZIFERASE-VEKTOREN ZUR INTERNEN STANDARDISIERUNG 83
LLL 8.3.4. BEZIEHUNG ZWISCHEN TRANSFIZIERTER UND AUFGENOMMENER
PLASMID-DNS-
MENGE 83
LLL 8.3.5. DAUER DER TRANSFEKTION 85
LLL 8.3.6. CAT-MENGE UND LUZIFERASEAKTIVITAET IN ABHAENGIGKEIT VOM
EMTEZEITPUNKT 85
LLL 8.3.7. LINEARER MESSBEREICH DES LUZIFERASETESTS 87
LLL 8.3.8. KURZZEITKINETIK DER LUZIFERASEREAKTION 89
LLL 8.3.9. OPTIMALE ATP-KONZENTRATION IM LUZIFERASETEST-PUFFER 90
LLL 8.4.
LTR-TRANSKRIPTIONSAKTIVITAET IN V-RAF- UND V-FGR-TRANSFORMIERTEN
ZELLHYBRIDEN UND IHREN AUSGANGSZELLEN 91
IV DISKUSSION
_ 95
V ZUSAMMENFASSUNG
_107
VI LITERATURVERZEICHNIS
_ M
VII LEBENSLAUF
_ |
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