Die Zellbiologie der Tumorresistenz: Multidrug-Resistenz, genspezifische DNS-Schädigung und Apoptose
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
ZUSAMMENFASSUNG. 6
1. EINLEITUNG. 8
1.1. DAS RESISTENZPROBLEM. 8
1.2. ZIELE DER ARBEIT. 11
1.2.1. KLASSISCHE MULTIDRUG-RESISTENZ. 11
1.2.2. MULTIFAKTORIELLE MULTIDRUG-RESISTENZ. 12
1.2.3. MODULATION DER MULTIDRUG-RESISTENZ. 13
1.2.4. DNS-SCHAEDIGUNG IM MDR1 GEN BEI DER KOMBINATIONS
THERAPIE CISPLATIN UND DAUNORUBICIN. 13
1.2.5. DER PROGRAMMIERTE ZELLTOD (APOPTOSE). 14
1.2.6. HYPERSENSIBILITAET BEI GLUKOSE-6-PHOSPHATDEHYDRO-
GENASE DEFIZIENZ. 14
1.2.7. NEUE ANTINEOPLASTISCHE PFLANZENINHALTSTOFFE. 15
1.2.8. NEUE THERAPIEFORMEN:
EXTRAKORPORALE PHOTOCHEMOTHERAPIE
.
7
.
16
1.2.9. UNKONVENTIONELLE THERAPIEFORMEN:
MISTELTHERAPIE BEI SENSIBLEN UND MULTIDRUG-RESISTENTEN
LEUKAEMIEZELLEN. 16
2. MATERIAL UND METHODEN. 17
2.1. MEDIKAMENTE. 17
2.2. STRAHLENQUELLEN. 18
2.3. ZELL-UND TUMORLINIEN. 19
2.4. TUMORBIOPSIEN UND ZELLPROBEN VOM PATIENTEN. 19
2.5. VERFAHREN ZUM NACHWEIS DER ZYTOSTATIKA-RESISTENZ. 21
2.6. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE MESSUNG VON
RHODAMIN 123-AKKUMULATION UND -EFFLUX. 21
2.7. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE BESTIMMUNG DES ZELLULAEREN
GLUTATHIONGEHALTES. 22
2.8. PROTEIN-NACHWEISMETHODEN. 22
2.8.1. MONOKLONALE UND POLYKLONALE ANTIKOERPER. 22
2.8.2. PROTEIN-AUFTRENNUNG MITTELS SDS-PAGE UND
WESTERNBLOTTING. 23
2.8.3. IMMUNHISTOCHEMIE. 23
2.8.4. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHE MESSUNG DER IMMUNFLUORESZENZ. 23
2.8.5. RADIOIMMUN-ASSAY. 23
2.9. PRAEPARATION VON A-RIZIN IMMUNTOXIN-KONJUGATEN. 23
2.10. RNS-NACHWEISMETHODEN. 23
2.11. DNS-NACHWEISMETHODEN. 24
2.11.1. PRAEPARATION GENOMISCHER DNS. 24
2.11.2. SOUTHERNBLOTTING. 24
2.11.3. RADIOAKTIVER HYBRIDISIERUNGSNACHWEIS. 24
2.11.4. PCR-STOP ASSAY ZUM NACHWEIS VON GENSPEZIFISCHEN
DNS-SCHAEDIGUNGEN. 24
2.12. APOPTOSE-NACHWEISMETHODEN. 25
2.12.1. DNS-FRAGMENTATIONS-ASSAY ("DNA-IADDERING"). 25
3
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
HTTP://D-NB.INFO/951427547
SEITE
2.12.2. IN SITU TERMINALE DEOXYNUKLEOTIDYLEXOTRANSFERASE
(TDT)-ASSAY. 25
2.12.3. DURCHFLUSSZYTOMETRISCHER NACHWEIS FRAGMENTIERTER DNS. 25
2.13. UNTERDRUECKUNG DER GENEXPRESSION DURCH ANTISENSE
OLIGODEOXYNUKLEOTIDE. 26
2.14. BIOSTATISTISCHE VERFAHREN. 26
3. ERGEBNISSE. 27
3.1. KLASSISCHE MULTIDRUG-RESISTENZ.,. 27
3.1.1. MULTIPLE KREUZRESISTENZ. 27
3.1.1.1. S180 GEWEBEKULTURZELLEN DER MAUS. 27
3.1.1.2. S180 ASZITESTUMORZELLEN DER MAUS. 28
3.1.1.3. L1210 ASZITESTUMORZELLEN DER MAUS. 29
3.1.1.4. PRIMAERKULTUREN VON HUMANEN NIERENKARZINOMEN. 30
3.1.2. AKKUMULATION UND EFFLUX VON RHODAMIN 123. 32
3.1.3. P-GLYKOPROTEIN UND MDR1 GEN IN ASZITESTUMORLINIEN
DER MAUS. 37
3.1.3.1. NACHWEIS DES P-GLYKOPROTEINS MITTELS WESTERNBLOTTING. 37
3.1.3.2. NACHWEIS DES P-GLYKOPROTEINS MITTELS IMMUNHISTOCHEMIE. 38
3.1.3.3. NACHWEIS DES MDR1 GENS MITTELS SOUTHERNBLOTTING. 39
3.1.4. P-GLYKOPROTEIN IN HUMANEN TUMORBIOPSIEN. 40
3.2. MULTIFAKTORIELLE MULTIDRUG-RESISTENZ. 42
3.2.1. GLUTATHION S-TRANSFERASE. 42
3.2.1.1. GLUTATHION S-TRANSFERASE-P IN ASZITESTUMORZELLEN
DER MAUS. 43
3.2.1.2. GLUTATHION S-TRANSFERASE-RC IN MONONUKLEAEREN
ZELLEN VON LEUKAEMIEPATIENTEN. 43
3.2.1.3. KOEXPRESSION VON GLUTATHION S-TRANSFERASE-RC UND
P-GLYKOPROTEIN IN HUMANEN TUMORBIOPSIEN. 45
3.2.1.4. KOEXPRESSION VON GLUTATHION S-TRANSFERASE-P UND
P-GLYKOPROTEIN IN NORMALGEWEBEN DER RATTE. 46
3.2.2. ANDERE RESISTENZ- UND ONKOPROTEINE. 48
3.2.2.1. S180 GEWEBEKULTURZELLEN DER MAUS. 48
3.2.2.2. PRIMAERKULTUREN VON HUMANEN NIERENKARZINOMEN. 50
3.2.2.3. EFFEKT VON C-FOS ANTISENSE OLIGODEOXYNUKLEOTIDEN
AUF MULTIDRUG-RESISTENZ UND RESISTENZGENE BEI
K562 LEUKAEMIEZELLEN. 54
3.3. MODULATION DER MULTIDRUG-RESISTENZ. 57
3.3.1. CHEMOTHERAPEUTISCHE MODULATION. 57
3.3.1.1. MODULATION DER MULTIFAKTORIELLEN MULTIDRUG-RESISTENZ. 57
3.3.1.2. DER P-GLYKOPROTEIN MODULATOR S-9788. 58
3.3.2. IMMUNTHERAPEUTISCHE MODULATION DER MULTIDRUG-RESISTENZ. 62
3.3.2.1. WACHSTUMSHEMMUNG RESISTENTER ZELLEN DURCH DEN
MONOKLONALEN ANTI-P-GLYKOPROTEIN ANTIKOERPER
265/F4 UND 265/F4-A-RIZIN IMMUNTOXIN. 62
3.3.2.2. BLOCKIERUNG DES ZYTOSTATIKA-EFFLUXES MIT DEN MONOKLONALEN
ANTI-P-GLYKOPROTEIN ANTIKOERPERN MRK 16 UND HYB-612. 66
3.3.3. ANTI-GENTHERAPEUTISCHE MODULATION DER MULTIDRUG-RESISTENZ
DURCH ANTISENSE-OLIGODEOXYNUKLEOTIDE GEGEN DAS
MDR1 GEN. 67
4
SEITE
3.3.4. MODULATION VON P-GLYKOPROTEIN EXPRIMIERENDEN
NORMALGEWEBEN. 69
3.4. DNS-SCHAEDIGUNG IM MDR1 GEN BEI DER KOMBINATIONS
THERAPIE CISPLATIN UND DAUNORUBICIN. 71
3.5. RESISTENZ UND APOPTOSE. 76
3.5.1. NACHWEIS DER APOPTOSE UND CHEMOTHERAPEUTISCHE
MODULATION DURCH COFFEIN. 76
3.5.2. IMMUNTHERAPEUTISCHE MODULATION DURCH DEN
MONOKLONALEN ANTI-FAS ANTIKOERPER CH-11. 86
3.6. HYPERSENSIBILITAET BEI GLUKOSE-6-PFIOSPHATDEHYDRO-
GENASE DEFIZIENZ. 91
3.7. NEUE ANTINEOPLASTISCHE PFLANZENINHALTSTOFFE. 95
3.8. NEUE THERAPIEFORMEN: EXTRAKORPORALE PHOTOCHEMOTHERAPIE. 98
3.9. UNKONVENTIONELLE THERAPIEFORMEN: MISTELTHERAPIE
BEI SENSIBLEN UND MULTIDRUG-RESISTENTEN LEUKAEMIEZELLEN. 103
4. DISKUSSION. 104
4.1. KLASSISCHE MULTIDRUG-RPSISTENZ.R. 104
4.1.1. MULTIPLE KREUZRESISTENZ. 104
4.1.2. AKKUMULATION UND EFFLUX VON RHODAMIN 123. 105
4.1.3. P-GLYKOPROTEIN IN ASZITESTUMORZELLEN DER MAUS. 106
4.1.4. P-GLYKOPROTEIN IN HUMANEN TUMORBIOPSIEN. 108
4.2. MULTIFAKTORIELLE MULTIDRUG-RESISTENZ. 113
4.2.1. GLUTATHION S-TRANSFERASE. 113
4.2.2. ANDERE RESISTENZ- UND ONKOPROTEINE. 114
4.3. MODULATION DER MULTIDRUG-RESISTENZ. 122
4.3.1. CHEMOTHERAPEUTISCHE MODULATION. 122
4.3.2. IMMUNTHERAPEUTISCHE MODULATION. 123
4.3.3. ANTI-GENTHERAPEUTISCHE MODULATION. 124
4.3.4. MODULATION DES NORMALGEWEBES. 125
4.4. DNS-SCHAEDIGUNG IM MDR1 GEN BEI DER KOMBINATIONS
THERAPIE CISPLATIN UND DAUNORUBICIN. 125
4.5. RESISTENZ UND APOPTOSE. 127
4.5.1. NACHWEIS DER APOPTOSE UND CHEMOTHERAPEUTISCHE
MODULATION DURCH COFFEIN. 127
4.5.2. IMMUNTHERAPEUTISCHE MODULATION DURCH DEN
MONOKLONALEN ANTI-FAS ANTIKOERPER CH-11. 129
4.6. HYPERSENSIBILITAET BEI GLUKOSE-6-PHOSPHATDEHYDRO-
GENASE DEFIZIENZ. 130
4.7. NEUE ANTINEOPLASTISCHE PFLANZENINHALTSTOFFE. 131
4.8. NEUE THERAPIEFORMEN: EXTRAKORPORALE PHOTOCHEMOTHERAPIE. 132
4.9. UNKONVENTIONELLE THERAPIEFORMEN: MISTELTHERAPIE
BEI SENSIBLEN UND MULTIDRUG-RESISTENTEN LEUKAEMIEZELLEN. 133
4.10. AUSBLICK. 134
5. LITERATURVERZEICHNIS. 137
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