Darstellung von Varianten bei HPV 6b in spitzen Kondylomen und Buschke-Löwenstein Tumoren mit Hilfe der Temperaturgradientengelektrophorese und single-strand conformation polymorphism:
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1997
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1.
EINLEITUNG
I
2.
THEORETISCHE
GRUNDLAGEN
2.1
HISTORISCHES
3
2.2
STRUKTUR
UND
KLASSIFIKATION
VON
HUMANPATHOGENEN
PAPILLOMVIREN
(HPV)
4
2.3
GENETISCHE
VARIABILITAET
UND
VARIANTENDARSTELLUNG
BEI
HUMANPATHOGENEN
PAPILLOMVIREN
8
2.4
HPV
IN
DER
ONKOGENESE
12
2.5
GENOMORGANISATION
VON
HPV
6B
14
2.6
DIE
GENPRODUKTE
VON
E6
UND
E7
17
2.7
HPV
6
INDUZIERTE TUMOREN
19
2.7.1
CONDYLOMATA
ACUMINATA
19
2.7.2
BUSCHKE-LOEWENSTEIN
TUMOR
22
2.7.3
INFEKTIONSEWEGE
22
2.8
DNA-NACHWEIS
BEI
VIRUSINFEKTIONEN
25
2.8.1
HYBRIDISIERUNG
25
2.8.2
POLYMERASEKETTENREAKTION
(PCR)
25
2.9
METHODEN
ZUR
DARSTELLUNG
VON
VARIANTEN
26
2.9.1
SEQUENZIERUNG
26
2.9.2
RESTRIKTIONSENZYMANALYSE
26
2.9.3
TEMPERATURGRADIENTENGELEKTROPHORESE
(TGGE)
27
2.9.4
SINGLE-STRAND
CONFORMATION
POLYMORPHISM
(SSCP)
27
3.
PROBLEMSTELLUNG
29
4.
MATERIAL
UND
METHODEN
30
4.1
MATERIAL
30
4.1.1
GEWEBEMATERIAL
UND
HPV
6B
DNA
30
4.1.2
GERAETE,
LOESUNGEN,
PUFFER
30
4.2
METHODEN
31
4.2.1
DNA
EXTRAKTION
AUS
GEFRORENEM
GEWEBE
32
4.2.2
PCR
33
4.2.3
GELELEKTROPHORESE
37
4.2.4
SILBERFAERBUNG
39
4.2.5
SSCP:
SINGLE-STRAND
CONFORMATION
POLYMORPHISM
40
4.2.6
TGGE:
TEMPERATURGRADIENTENGELELEKTROPHORESE
44
4.2.7
RESTRIKTIONSENSENYMANALYSE
48
4.2.8
SEQUENZIERUNG
50
ERGEBNISSE
56
5.1
ERGEBNISSE
DER
PCR
56
5.2
RESTRIKTIONSENZYMREAKTION
58
5.3
VARIANTENDARSTELLUNG
MIT
DER
SSCP
61
5.3.1
VORVERSUCHE
61
5.3.2
ERGEBNISSE
DER
VARIANTENDARSTELLUNG
MIT
DER
SSCP
69
5.4
VARIANTENDARSTELLUNG
MIT
DER
TGGE
78
5.4.1
THEORETISCHE
ERGEBNISSE
DER
POLANDPROGRAMMANALYSE
78
5.4.2
EXPERIMENTELLE
ERGEBNISSE
DER
TGGE
79
5.5
ERGEBNISSE
DER
SEQUENZIERUNG
VON
FUENF
VARIANTEN
94
6.
DISKUSSION
96
6.1
VERGLEICHENDE
DARSTELLUNG
DER
ERGEBNISSE
UND
DER
REPRODUZIERBARKEIT
VON
TGGE
UND
SSCP
96
6.2
BEWERTUNG
DER
SSCP
IM
TEMPERATURGRADIENTEN
100
6.3
HETEROGENITAET
VON
HPV
6
IN
SPITZEN
KONDYLOMEN
UND
BUSCHKE-LOEWENSTEIN
TUMOREN:
EIN
VERGLEICH
VON
MUTATIONEN
IN
DER
E6
REGION
MIT
MUTATIONEN
IN
DER
NICHT
KODIERENDEN
REGION
101
6.4
KORRELATION
ZWISCHEN
VARIANTEN
UND
KLINISCHER
MANIFESTATION
105
7.
SCHLUSSBEMERKUNGEN
106
8.
ZUSAMMENFASSUNG
109
ANHANG
LITERATURVERZEICHNIS
AL
SEQUENZ
VON
HPV
6B
A2
VERWENDETE
MATERIALIEN,
LOESUNGEN
UND
GERAETE
A3
ABKUERZUNGEN
A4 |
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