Untersuchungen zu potentiellen biologischen Markern der Alzheimer-Demenz: Quantifizierung von Tau-Protein, einem die ABeta-Sequenz enthaltenden Protein sowie die Bestimmung des ApoE-Genotyps in Probenmaterial von Patienten mit einer Alzheimer-Demenz
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
I.
ZUSAMMENFASSUNG
1
II.
EINLEITUNG
3
1.
DIE
ALZHEIMER
KRANKHEIT
2
2.
PATHOLOGIE
DER
ALZHEIMER
KRANKHEIT
5
2.1.
DIE
GENETISCHE
KOMPONENTE
5
2.2.
NEUROPATHOLOGIE
6
2.3.
NEUROCHEMIE
7
2.3.1.
DAS
ASS-PROTEIN
9
2.3.2.
TAU-PROTEIN
10
3.
FRAGESTELLUNGEN
DIESER
ARBEIT
11
III.
MATERIAL
1.
CHEMIKALIEN
12
2.
ENZYME,
ANTIKOERPER,
KITS
14
3.
MOLEKULARGEWICHTSSTANDARDS
15
4.
MEDIEN
15
5.
PUFFER
16
6.
NATURSTOFFE
UND
ANTIBIOTIKA
17
7.
ZELLEN,
ZELLINIEN
17
8.
FILTER
18
9.
FOTOMATERIAL
18
10.
GERAETE
19
11.
WEITERE
MATERIALIEN
20
IV.
METHODEN
1.
GEWEBEGEWINNUNG
UND
HISTOLOGISCHE
METHODEN
23
1.1.
GEWEBEENTNAHME
23
1.2.
BESCHICHTUNG
VON
OBJEKTTRAEGERN
23
1.3.
HISTOLOGISCHE
FAERBEMETHODE
24
2.
ZEHKULTURTECHNIKEN
25
2.1.
PRIMAERZELLKULTUR
25
2.2.
STIMULATION
VON
ML-REZEPTOREN
DURCH
CARBACHOL
UND
PHOIBOLESTER
25
3.
DNA-TECHNIKEN
26
3.1.
GEWINNUNG
GENOMISCHER
DNA
AUS
BLUT
26
3.2.
KONZENTRATIONSBESTIMMUNG
VON
NUKLEINSAEURELOESUNGEN
27
3.3.
GELELEKTRISCHE
AUFTRENNUNG
VON
DNA
27
3.4.
PCR,
POLYMERASE-CHAIN-REACTION
28
3.5.
APOE-BESTIMMUNG,
REVERSE
HYBRIDISIERUNG
(INNOGENETICS)
28
4.
PROTEINTECHNIKEN
29
4.1.
PROTEINEXTRAKTION
29
4.2.
PROTEINBESTIMMUNG
NACH BRADFORD
29
4.3.
AUFTRENNUNG
VON
PROTEINEN
IN
POLYACRYLAMIDGELEN
30
4.4.
COOMASSIEBRILLIANTBLAUFARBUNG
VON
POLYACRYLAMIDGELEN
31
4.5.
WESTEMBLOT
32
4.6.
PROTEINFAERBUNG
33
4.7.
IMMUNREAKTION
34
4.8.
ANTIKOERPEMACHWEISREAKTIONEN
34
4.8.1.
NACHWEIS
VON
SEKUNDAEREN
AN
PEROXIDASE
GEKOPPELTE
ANTIKOERPER
34
4.8.2.
NACHWEIS
VON
SEKUNDAEREN
AN
ALKALISCHE
PHOSPHATASE
GEKOPPELTE
ANTIKOERPER
35
4.8.3.
NACHWEIS
DURCH
CHETNOHIMINESZENZ
UEBER
ECL
35
4.9.
DIREKTER
ENZYME-LINKED
IMMUNOSORBENT
ASSAY
(ELISA)
36
4.9.1.
NACHWEIS
VON
HUMANEM
TAU-ANTIGEN
IN
CSF
36
4.9.2.
KOMPETITIVER
ELISA
ZUR
QUANTIFIZIERUNG
VON
ASS
36
4.10.
PROTEINISOLIERUNG
37
4.11.
SPEZIFISCHE
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIEN
3
8
5.
COMPUTER
-
UND
STATISTISCHE
ANALYSEN
39
6.
SONSTIGE
40
V.
ERGEBNISSE
41
1.
APOE4
ALS
POTENTIELLER
MARKER
DER
ALZHEIMER
DEMENZ
41
1.1.
TESTPRINZIP
41
1.2.
PCR
DER
GENOMISCHEN
DNA
MIT
APOE
SPEZIFISCHEN
PRIMERN
42
1.3.
REVERSE
HYBRIDISIERUNG
43
1.4.
ANALYSE
DER
FAD-PATIENTEN
43
1.4.1.
ANALYSEDATEN
43
1.4.2.
AUSWERTUNG
44
1.5.
ANALYSE
VON
PATIENTEN
MIT
SPORADISCHER
AD
UND
KONTROLLEN
44
1.5.1.
ANALYSEDATEN
44
1.5.2.
AUSWERTUNG
46
2.
PROTEIN
TAU
ALS
BIOLOGISCHER
MARKER
DER
AD
47
2.1.
QUANTIFIZIERUNG
VON
TAU
IM
CSF
BEI
ALZHEIMER
PATIENTEN
UND
KONTROLLEN
49
2.2.
VERGLEICH
DER
GEMESSENEN
TAU-WERTE
MIT
MINI-MENTAL-TEST-WERTEN
51
2.3.
TMMUNHISTOCHEMISCHE
UNTERSUCHUNGEN MIT
MONOKLONALEN
TAU-ANTIKOERPERN
AN
NASENSCHLEIMHAUT-BIOPSIEN
VON
AD-PATIENTEN
52
3.
QUANTIFIZIERUNG
EINES
DIE
ASS-SEQUENZ
ENTHALTENEN
PROTEIN(EN)
56
3.1.
METHODISCHER
ANSATZ
UND
TESTPRINZIP
DES
KOMPETITIVEN
ELISA
57
3.2.
VORBEREITENDE
MASSNAHMEN
UND
VORVERSUCHE
58
3.2.1.
UEBERPRUEFUNG DER
ANTIKOERPER
58
3.2.1.
ERMITTLUNG
DER
OPTIMALEN
ANTIGENKONZENTRATION
59
3.2.2.
ERMITTLUNG
DES
OPTIMALEN
PH-BEREICHS
59
3.3.
AUFSTELLEN
DER
STANDARDKURVE
60
3.4.
QUANTIFIZIERUNG
VON
ASS
IM
CSF
BEI
ALZHEIMER
PATIENTEN
UND
KONTROLLEN
61
3.4.1.
ANALYSE
DER
ERSTEN
STICHPROBE
62
3.4.2.
ERHOEHUNG
DER
STICHPROBE
UND
DOPPEL-BLIND
EXPERIMENTE
ZUR
ABSICHERUNG
DER
ELISA-DATEN
64
3.4.3.
MESSUNG
VON
CSF-PROBEN
VON
PATIENTEN
VOR
UND
NACH
EINER
BEHANDLUNG
MIT
PHYSOSTIGMIN
67
3.5.
UEBERPRUEFUNG DER
ANTIKOERPER
BMI
UND
BM2
IM
WESTEMBLOT
68
3.6.
VERAENDERUNG
DES
APP/ASS-PROCESSINGS
DURCH
STIMULATION
VON
ML-REZEPTOREN
IN
TRANSFIZIERTEN
NIERENZELLEN
MIT
CARBACHOL
UND
PHORBOLESTER
70
3.7.
MESSUNG
VON
ZELLKULTURUEBERSTAENDEN
AUS
DEN
STIMULATIONSVERSUCHEN
IM
ELISA
74
VI.
DISKUSSION
76
1.
APOE4
ALS
BIOLOGISCHER
MARKER
DER
ALZHEIMER
DEMENZ
76
2.
PROTEIN
TAU
ALS
BIOLOGISCHER
MARKER
DER
AD
78
3.
EIN
DIE
ASS-SEQUENZ
ENTHALTENDES
70
KD-PROTEIN
ALS
DIAGNOSTISCHER
MARKER
DER
AD
81
4.
VALIDIERUNG
DER
BIOLOGISCHEN
TESTUNG
UND
SCHLUSSFOLGERUNG
85
VII.
LITERATUR
86
VIII.
ABKUERZUNGEN
98
1.
AMINOSAEUREN
98
2.
WEITERE
ABKUERZUNGEN
100 |
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