Herstellung und phänotypische Analyse von IgM-defizienten Mäusen:
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| Format: | Abschlussarbeit Buch |
| Sprache: | German |
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
1
1.
EINLEITUNG
3
1.1.
DAS
IMMUNSYSTEM,
EINE
KURZE
UEBERSICHT
3
1.2.
DIE
SPEZIFISCHE
IMMUNITAET
3
1.3.
T-ZELLREIFUNG
UND
-AKTIVIERUNG
5
1.4.
B-ZELLENTWICKLUNG
5
1.5.
IMMUNOGLOBULIN-ISOTYPEN
7
1.6.
ANTIKOERPER
(IMMUNOGLOBULINE)
8
1.7.
IMMUNOGLOBULIN
M
(IGM)
9
1.8.
EXPRESSION
UND
FUNKTION
VON
IGD
1.9.
TECHNIK
DER
HOMOLOGEN
REKOMBINATION
("GENE
TARGETING")
SOWIE
DIE
ORTSPEZIFISCHE
REKOMBINATION
MITTELS
DES
CRE/LOXP-SYSTEMS
12
1.10.
ZIELSETZUNG
DER
ARBEIT
14
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
16
2.1.
MATERIAL
16
2.1.1.
CHEMIKALIEN
16
2.1.2.
RADIOAKTIV
MARKIERTE
CHEMIKALIEN
16
2.1.3.
PUFFER,
LOESUNGEN
UND
MEDIEN
16
2.1.4.
MATERIAL
FUER
ZELLKULTUR
18
2.1.5.
ENZYME
FUER
DIE
MOLEKULARBIOLOGIE
18
2.1.6.
ANTIKOERPER
18
2.1.7.
PLASMIDE
19
2.1.8.
PCR-PRIMER
UND
LINKER-OLIGONUKLEOTIDE
19
2.1.9.
BAKTERIENSTAEMME
20
2.1.10.
ZELLINIEN
21
2.1.11.
MAEUSESTAEMME
21
2.2.
METHODEN
21
2.2.1.
MOLEKULARBIOLOGISCHES
ARBEITEN
MIT
DNA
21
2.2.1.1.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
IM
ANALYTISCHEN
MASSSTAB
21
2.2.1.2.
PRAEPARATION
VON
PLASMID-DNA
IM
PRAEPARATIVEN
MASSSTAB
21
2.2.1.3.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
GEWEBEKULTURZELLEN
22
2.2.1.4.
PRAEPARATION
VON
GENOMISCHER
DNA
AUS
SCHWANZSPITZEN
UND
OHRPROBEN
VON
MAEUSE
22
2.2.1.5.
PHENOL-EXTRAKTION
ZUM
REINIGEN
VON
DNA
23
2.2.1.6.
FAELLUNG
VON
DNA
23
2.2.1.7.
VERDAU
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENZYMEN
23
2.2.1.8.
AGAROSE-GELELEKTROPHORESE
23
2.2.1.9.
ISOLIERUNG
VON
GELELEKTROPHORETISCH
AUFGETRENNTEN
DNA-FRAGMENTEN
24
2.2.1.10.
LIGATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
24
2.2.1.11.
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
DNA
MIT
ALKALISCHER
PHOSPHATASE
24
2.2.1.12.
AUFFULLEN
VON
UEBERHAENGENDEN
5
'
-ENDEN
VON
DNA-FRAGMENTEN
24
2.2.1.13.
HYBRIDISIERUNG
VON
OLIGONUKLEOTIDEN
(
ANNEALING)
25
2.2.1.14.
TRANSFORMATION
VON
BAKTERIEN
25
2.2.1.15.
KAPILLARTRANSFER
VON
DNA
AUF
NYLONMEMBRAN
(SOUTHERN-BLOT)
26
2.2.1.16.
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
VON
DNA-SONDEN
27
2.2.1.17.
HYBRIDISIERUNG
MEMBRANGEBUNDENER
DNA-FRAGMENTE
MIT
RADIOAKTIV
MARKIERTEN
DNA-SONDEN
27
2.2.1.18.
POLYMERASE-KETTENREAKTION
(PCR)
ZUR
AMPLIFIKATION
VON
DNA
28
2.2.2.
KULTIVIERUNG
UND
MANIPULATION
VON
EMBRYONALEN
STAMMZELLEN
(ES-ZELLEN)
2
9
2.2.2.1.
PRAEPARATION,
KULTIVIERUNG
UND
INAKTIVIERUNG
VON
EMBRYONALEN
FIBROBLASTEN
29
2.2.2.2.
KULTIVIERUNG
VON
EMBRYONALEN
STAMMZELLEN
30
2.2.2.3.
MANIPULATION
VON
ES-ZELLEN
31
2.2.2.4.
SELEKTION
VON
ES-ZELLEN
31
2.2.2.5.
PICKEN
VON
EINZELNEN
ES-ZELLKLONEN
UND
AUFARBEITUNG
FUER
PCR
32
2.2.2.6.
BLASTOZYSTEN-INJEKTION
UND
REIMPLANTATION
VON
BLASTOZYSTEN
32
2.2.3.
METHODEN
ZUR
PRAEPARATION
UND
ANALYSE
VON
ZELLEN
AUS
MAEUSEN
3
3
2.2.3.1.
ISOLIERUNG
VON
MILZZELLEN
33
2.2.3.2.
ISOLIERUNG
VON
LYMPHKNOTENZELLEN
34
2.2.3.3.
ISOLIERUNG
VON
THYMUSZELLEN
34
2.2.3.4.
ISOLIERUNG
VON
KNOCHENMARKSZELLEN
34
2.2.3.5.
ISOLIERUNG
VON
ZELLEN
AUS
DER
BAUCHHOEHLE
34
2.2.3.6.
BLUTABNAHME
VON
MAEUSEN
ZUR
SERENGEWINNUNG
UND
DURCHFLUSS
ZYTOMETRISCHEN
ANALYSE
35
2.2.3.7.
ERYTHROZYTENLYSE
35
2.2.3.8.
IN
VITRO
STIMULATION
VON
LYMPHOZYTEN
AUS
DEM
BLUT
36
2.2.3.9.
DURCHFLUSSZYTOMETRIE
VON
ZELLEN
AUS
ORGANEN
UND
VON
BLUTZELLEN
36
2.2.3.10.
IMMUNOHISTOCHEMISCHE
ANFAERBUNG
VON
GEWEBESCHNITTEN
37
2.2.3.11.
MARKIERUNG
VON
PROLIFERIERENDEN
ZELLEN
DURCH
BRDU
37
2.2.4.
METHODEN
ZUR
UNTERSUCHUNG
VON
PROTEINEN
38
2.2.4.1.
KOPPLUNG
VON
DINITROPHENYLGRUPPEN
AN
PROTEINE
38
2.2.4.2.
NACHWEIS
VON
FESTPHASENGEBUNDENEN
ANTIGENEN
IM
ENZYM
GEKOPPELTEN-IMMUNTEST
(ELISA)
38
2.2.S.
IMMUNISIERUNG
UND
INFEKTION
VON
MAEUSEN
40
2.2.5.1.
PRAEZIPITATION
VON
ANTIGENEN
40
2.2.5.2.
IMMUNISIERUNG
VON
MAEUSEN
40
2.2.5.3.
INFEKTION
VON
MAEUSEN
MIT
NIPPOSTRONGYLUS
BRASILIENSIS
41
3.
ERGEBNISSE
42
3.1.
KLONIETUNG
DES
PLASMIDKONSTRUKTES
ZUR
HOMOLOGEN
REKOMBINATION
AM
GEN
DER
SCHWEREN
KETTE
VON
IMMUNOGLOBULIN
M
42
3.1.1.
STRATEGIE
42
3.1.2.
KLONIERUNG
43
3.2.
HERSTELLUNG
VON
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
45
3.2.1.
"GESCHACHTELTE"
PCR
ZUR
ANALYSE
TRANSFEKTIERTER
ES-ZELLKLONE
45
3.2.2.
MANIPULATION
DES
C|L-C8-LOCUS
IN
ES-ZELLEN
SOWIE
DEREN
GENOTYPISCHE
ANALYSE
UEBER
PCR
UND
SOUTHEMBLOT
47
3.2.3.
BLASTOZYSTENINJEKTION
UND
DIE
HERVORBRINGUNG
VON
KEIMBAHN
CHIMAEREN
49
3.3.
PHAENOTYPISCHE
ANALYSE
VON
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
51
3.3.1.
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
51
3.3.2.
IMMUNOGLOBULIN-KONZENTRATION
IM
SERUM
VON
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
59
3.3.3.
IN
VITRO
STIMULATION
VON
PERIPHEREN
LYMPHOZYTEN
60
3.3.4.
ANTIKOERPERANTWORTEN
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
NACH
IMMUNISIERUNG
MIT
EINEM
THYMUS-ABHAENGIGEN
ODER
-UNABHAEGIGEN
ANTIGEN
62
3.3.5.
HISTOLOGISCHE
UNTERSUCHUNGEN
VON
LYMPHATISCHEN
ORGANEN
IN
IMMUNISIERTEN
MAEUSEN
67
3.3.6.
INFEKTION
MIT
NIPPOSTRONGYLUS
BRASILIENSIS
70
3.3.7.
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
NACHWEIS
VON
LANG
UND
KURZLEBIGEN
B-ZELLEN
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
70
3.3.8.
AUTOANTIKOERPER
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
73
4.
DISKUSSION
76
4.1.
HOMOLOGE
REKOMBINATION
ZUR
GEZIELTEN
MUTAGENESE
DES
MAUSGENOMS
76
4.2.
DIE
TRANSKRIPTIONELLE
REGULATION
DES
CP-C8-LOCUS
77
4.3.
B-ZELLENTWICKLUNG
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
78
4.4.
DIE
ROLLE
DES
PRAE-B-ZELLREZEPTORS
IN
DER
B-ZELLENTWICKLUNG
79
4.5.
DIE
INDUKTION
DES
REARRANGEMENTS
DER
LEICHTEN
IMMUNOGLOBULINKETTE
80
4.6.
ALLELE
EXKLUSION
81
4.7.
DIE
|1MT-
UND
DIE
IGM
^-MAUS:
EIN
KONFLIKT?
81
4.8.
IGD,
EIN
REIFUNGSSIGNAL
FUER
DIE
ZELLE?
82
4.9.
B-LA
ZELLEN
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
83
4.10.
SEKRETION
VON
IGD
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
84
4.11.
IMMUNANTWORTEN
IN
IGM-DEFIZIENTEN
MAEUSEN
86
4.12.
TOLERANZINDUKTION
88
5.
ZUSAMMENFASSUNG
89
6.
LITERATURVERZEICHNIS
90
DANKSAGUNG
LEBENSLAUF |
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