Phosphorylierung des humanen Bradykinin-B 2 -Rezeptors: strukturelle und funktionelle Implikationen
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1997
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INHALTSVERZEICHNIS
1
ZUSAMMENFASSUNG
.
1
2
SUMMARY
.
3
3
EINLEITUNG
.
5
3.1
KININE
.
5
3.2
PHYSIOLOGISCHE
WIRKUNG
.
5
3.3
KININ-REZEPTOREN
.6
3.4
SIGNALTRANSDUKTION
DES
B
2
-REZEPTORS
.
7
3.5
REGULATION
DER
SIGNALTRANSDUKTION
.
9
4
AUFGABENSTELLUNG
.
12
5
MATERIALIEN
UND
METHODEN
.
13
5.1
GERAETE
.
13
5.2
MATERIALIEN
.
14
5.3
COMPUTER-PROGRAMME
.
14
5.4
CHEMIKALIEN
UND
SPEZIALREAGENZIEN
.
15
5.5
RADIOCHEMIKALIEN
.
15
5.6
ENZYMAKTIVATOREN
.
16
5.7
ENZYMINHIBITOREN
.
16
5.8
HORMONE
.
17
5.9
B
S
-REZEPTOR-ANTAGONISTEN
.
17
5.10
PROTEINE
UND
ENZYME
.
18
5.11
PEPTIDE
.
18
5.12
ANTIKOERPER
.
18
5.13
PROTEIN-MOLEKULARGEWICHTSMARKER
.
19
5.14
ZELLEN
.
19
5.15
MEDIEN
UND
LOESUNGEN
FUER
DIE
ZELLKULTUR
.
19
5.16
BAKTERIEN
.
20
5.17
GEWINNUNG
POLYKLONALER
ANTI-PEPTID-ANTIKOERPER
.
20
5.18
KULTIVIERUNG
VON
ZELLEN
.
20
5.19
RADIOAKTIVE
MARKIERUNG
ZELLULAERER PROTEINE
.
21
5.20
IMMUNPRAEZIPITATION
RADIOAKTIV
MARKIERTER
PROTEINE
.
22
5.21
SDS-GELELEKTROPHORESE
ZUR
TRENNUNG
VON
PROTEINEN
.
23
5.22
VISUALISIERUNG
VON
PROTEINEN
DURCH
FAERBUNG,
AUTORADIOGRAPHIE
ODER
FLUOROGRAPHIE
.
24
5.23
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
MEMBRANEN
(WESTERN
BLOT)
UND
IMMUNDETEKTION
DER
IMMOBILISIERTEN
PROTEINE
(IMMUNOPRINT)
.
25
5.24
PROTEINBESTIMMUNG
.
26
5.25
PHOSPHOAMINOSAEURE-ANALYSE
.
27
INHALTSVERZEICHNIS
II
5.26
RADIOLIGANDEN-BINDUNG
.
27
5.27
INOSITOLPHOSPHAT-BESTIMMUNG
.
29
5.28
BESTIMMUNG
DER
ZYTOPLASMATISCHEN
CALCIUMKONZENTRATION
.
30
5.29
MESSUNG
VON
PHOSPHATASE-AKTIVITAETEN
.
31
5.30
BIOMOLEKULARE
INTERAKTIONSANALYSE
(BIAIRTEYY).
32
5.31
KULTIVIERUNG
UND
TRANSFORMATION
VON
E.
COLI
.
32
5.32
PRAEPARATION
BAKTERIELLER
PLASMID-DNA.
33
5.33
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
COS-ZELLEN
MITTELS
LIPOFEKTION
.
33
5.34
PRAEPARATION
EUKARYONTISCHER
RNA
AUS
KULTIVIERTEN
ZELLEN
.
33
5.35
NORTHERN
BLOT
.
34
6
ERGEBNISSE
.
36
6.1
CHARAKTERISIERUNG
DER
ANTIKOERPER
GEGEN
DEN
B
2
-REZEPTOR
.
36
6.2
IMMUNPRAEZIPITATION
DES
B
2
-REZEPTORS
AUS
BACULOVIRUS-INFIZIERTEN
(
"
SJMARKIERTEN
SF9-ZELLEN
.
37
6.3
IMMUNPRAEZIPITATION
DES
REKOMBINANTEN
UND
ENDOGENEN
B
2
-REZEPTORS
AUS
SAEUGERZELLEN
-
POSTTRANSLATIONALE
MODIFIKATIONEN
.
40
6.4
PHOSPHORYLIERUNG
DES
ENDOGENEN
B
2
-REZEPTORS
IN
HUMANEN
VORHAUTFIBROBLASTEN
(HF-15)
.
45
6.5
PHOSPHOAMINOSAEURE-ANALYSE
UND
IDENTIFIZIERUNG
DER
PHOSPHORYLIERTEN
REZEPTORDOMAENE
.
48
6.6
DOSIS-ABHAENGIGKEIT
UND
KINETIK
DER
BRADYKININ-INDUZIERTEN
B
2
-REZEPTOR-PHOSPHORYLIERUNG
.
51
6.7
HOMOLOGE
PHOSPHORYLIERUNG
DES
B
2
-REZEPTORS
UND
BETEILIGTE
KINASEN
.
53
6.8
DEPHOSPHORYLIERUNG
UND
RESENSITISIERUNG
DES
B
2
-REZEPTORS
.
59
6.9
ZUSAMMENHANG
ZWISCHEN
DER
B
2
-REZEPTOR-INTERNALISIERUNG
UND
DER
DEPHOSPHORYLIERUNG
-
BETEILIGTE
PROTEINPHOSPHATASEN
.
61
6.10
DER
EFFEKT
DER
INHIBITION
DER
DEPHOSPHORYLIERUNG
AUF
DIE
FUNKTION
DES
B
2
-REZEPTORS
.
67
6.11
HOMOLOGE
REGULATION
DER
B
2
-REZEPTOR-EXPRESSION
.
72
7
DISKUSSION
.
77
7.1
IMMUNPRAEZIPITATION
DES
B
2
-REZEPTORS
.
77
7.2
PHOSPHORYLIERUNG
DES
B
2
-REZEPTORS
.
79
7.3
HOMOLOGE
B
2
-REZEPTOR-PHOSPHORYLIERUNG
.
81
7.4
VERBINDUNGEN
ZWISCHEN
DER
DEPHOSPHORYLIERUNG,
INTERNALISIERUNG
UND
RESENSITISIERUNG
DES
B
2
-REZEPTORS
.
83
7.5
REGULATION
DER
B
2
-REZEPTOR-EXPRESSION
.
87
8
AUSBLICK
.
89
9
LITERATURVERZEICHNIS
.
90
10
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
.
99
11
ANHANG
.
101
12
LEBENSLAUF
.
102 |
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