Untersuchungen zur Struktur und Funktion des Glykoproteins G des Respiratory Syncytial Virus (RSV):
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
1997
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| Beschreibung: | Bochum, Univ., Diss., 1997 |
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INHALTSVERZEICHNIS
1.
EINLEITUNG
1
1.1
ALLGEMEINE
EINLEITUNG
1
1.1.1
DAS
VITUS
1
1.1.2
DIE
PATHOGENITAET
3
1.1.3
DIE
VIRALE
INFEKTION
UND
DAS
IMMUNSYSTEM
5
1.1.4
DASG-PROTEIN
6
1.1.5
VIRUS-WIRTSZELL-INTERAKTIONEN
7
1.2
PROBLEMSTELLUNG
9
1.3
STRATEGIE
10
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
11
2.1
MATERIAL
11
2.1.1
CHEMIKALIEN
UND
GERAET
11
2.1.2
VERWENDETE
ZELLEN
UND
VIRUSSTAEMME
11
2.1.3
VERWENDETE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
12
2.1.3.1
RSV-SPEZIFISCHE
HYPERIMMUNSEREN
12
2.1.3.2
RSV-G-PROTEIN-SPEZIFISCHE
ANTIPEPTIDSEREN
12
2.1.3.3
RSV-SPEZIFISCHE
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
13
2.1.3.4
ANDERE
ANTIKOERPER
13
2.2
HAEUFIG
VERWENDETE
PUFFER
UND
LOESUNGEN
14
23
METHODEN
DER
ZELL
UND
VIRUSKULTIVIERUNG
16
23.1
ZELLZUCHT
16
23.2
VIRUSKULTIVIERUNG
16
23.2.1
HUMANES
RSV
16
23.2.2
BRSV
16
23.3
NACHWEIS
DER
VIRUSINFEKTION
17
23.3.1
MIKROTITRATION
17
23.3.2
ZEUE-ELISA
18
2.33.3
ATTACHMENT-ASSAY
18
23.4
ENZYMATISCHER
ANDAU
VON
ZELLEN
NACH
WUDUNN
&
SPEAR.
VERAENDERT
19
23.5
ISOLIERUNG
MONONUKFEAERER
ZELLEN
AUS
PERIPHEREM
BLUT
NACH
BOEYUM
19
2.4
PRAEPARATIVE
METHODEN
DER
PROTEINCHEMIE
20
2.4.1
PRAEPARATION
EINES
ROH-G-PROTEINS
20
2.4.2
GEWINNUNG
EINES
RPC-GEREINIGTEN
RSV-G-PROTEINS
20
2.4.3
PRAEPARATION
EINES
HOCHGEREINIGTEN
RSV-G-PROTEINS
21
2.4.4
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AN
HEPARIN-SEPHAROSE
CL-6B
21
2.5
ANALYTISCHE
METHODEN
DER
PROTEINCHEMIE
22
2.5.1
PROTEINBESTIMMUNGEN
22
2.5.1.1
BCA-ASSAY
NACH
DAVIS
&
RADKE
22
2.5.1.2
GLYFCOPROTEINBESTIMMUNG
MITTELS
DIG-OYKAN-ELISA
22
2.5.2
SDS-POLYACRYLAMIDGELELEKTROPHORESE
NACH
LAEMMH,
VERAENDERT
23
2.5.3
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROCELLULOSE
NACH
TOWBIN
ET
AL,
MODIFIZIERT
24
2.5.4
FAERBUNGEN
24
2.5.4.1
COOMASSIE
24
2.5.4.2
SILBERFAERBUNG
NACH
HEUKESHAVEN&DEMICK
25
2.5.43
PONCEAU-ROT
25
2.S.4.4
DIG-GIYKAN-ANFFLRBUNG
25
2.5.5
NACHWEIS
AUF
NITROCELLULOSE
TRANSFERIERTER
PROTEINE
MIT
HILFE
VON
26
ANTIKOERPERN
2.5.6
DIFIERENTIERUNG
DER
ZUCKERSTRUKTUREN
VON
CAEYFCOPROTEINEN
27
2.5.7
ELISA
NACH
CLEGG
&
EVANS,
MODIFIZIERT
27
3.
ERGEBNISSE
29
3.1
VORVERSUCHE
29
3.1.1
ETABLIERUNG
EINES
RSV-SPEZIFISCHEN
ZELL-ELLSAS
29
3.1.2
ETABLIERUNG
EINES
NICHT-RADIOAKTIVEN
RSV-ATTACHMENT-ASSAYS
31
3.2
CHROMATOGRAPHISCHE
AUFREINIGUNG
DES
G-PROTEINS
32
3.2.1
LYSE
DER
INFIZIERTEN
ZELLEN
32
3.2.2
PRAEPARATION
VON
HOCHREINEM
G-PROTEIN
33
3.2.2.1
QAE-SEPHADEX
A-50
33
3.2.2.2
LENTUE-LEKTIN
SEPHAROSE
4B
33
3.2.2.3
SOURCE
Q
35
3.2.3
PRAEPARATION
VON
RPC-GEREUNGTEM
G-PROTEIN
35
3.2.4
PRAEPARATION
VON
RSV-G-PROTEIN
AUS
INFIZIERTEN
CV-1
ZEILEN
37
3.3
UNTERSUCHUNGEN
ZUR
GLYKOSTRUKTUR
DES
G-PROTEINS
38
3.3.1
BESTIMMUNG
DES
ZUCKERGEHALTS
DES
G-PROTEINS
38
3.3.2
QUALITATIVE
BESTIMMUNG
DER
GLYKOSTRUKTUR
DES
G-PROTEINS
38
33.3
VERSUCH
ZUM
NACHWEIS
DES
LEWIS*-OKGOSACCHARIDS
SOWIE
DES
H-ANTIGENS
39
3.3.4
LOKALISATION
DER
N-OJKSOYHERUNGEN
40
3.4
IMMUNANTWORT
GEGEN
GEREINIGTES
G-PROTEIN
42
3.4.1
EINFLUSS
VON
G-PROTEIN
AUF
DIE
IL-10
UND
TNF-ALPHA-PRODUKTION
PERIPHERER
BHITMONOCYTEN
42
3.4.2
NEUTRALISATION
DER
G-PROTEIN-INDUZIERTEN
IL-10
SEZEMIERUNG
DURCH
MONOKLONALE
ANTIKOERPER
44
3.4.3
DOMINANZ
NEURAMMSAEURE-HALTIGER
EPITOPE
45
3.5
REAKTIONEN
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
48
3.5.1
REAKTIONEN
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
MIT
GEREINIGTEM
RSV
G-PROTEIN
48
3.5.2
REAKTIONEN
MONOKLONALER
ANTIKOERPER
UND
ANTISEREN
MIT
BRSV-PROTEINEN
50
3.6
UNTERSUCHUNGEN
ZUM
ZELLULAEREN
G-PROTEIN-REZEPTOR
53
3.6.1
INHIBITION
DER
INFEKTION
DURCH
HEPARIN
53
3.6.1.1
INHIBITION
DER
RSV-INFEKTION
AUF
UNTERSCHIEDLICHEN
ZELLEN
53
3.6.1.2
ZEFIABHAENGIGKEIT
53
3.6.1.3
KONZENTRATIONSABHAENGIGKEIT
54
3.6.1.4
KINETIK
DES
ATTACHMENTS
56
3.6.1.5
VORBEHANDLUNG
DER
ZIELZELLEN
MIT
GHIKANASEN
57
3.6.1.6
INHIBITION
DER
BRSV-INFEKTION
AUF
BT-ZEHEN
59
3.6.2
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
AN
HEPARIN-SEPHAROSE
CL-6B
60
3.6.3
INHIBITION
DER
INFEKTION
DURCH
WEITERE
FAKTOREN
62
4.
DISKUSSION
63
4.1
REINIGUNG
DES
RSV-G-PROTEINS
63
4.2
ANALYSE
DER
GLYKOSTRUKTUR
DES
G-PROTEINS
64
4.2.1
ZUSAMMENSETZUNG
DER
TERMINALEN
KOHLENHYDRATE
64
4.2.2
LOKALISATION
DER
N-GLYKOSYLIENMGEN
65
4.2.3
ZELLABHAENGIGKEIT
DER
GLYKOSYLIERUNG
65
4.3
WIRKUNG
DES
RSV-G-PROTEINS
AUF
DAS
IMMUNSYSTEM
66
4.3.1
IMMUNMODULATHRE
WIRKUNG
VON
GEREINIGTEM
RSV-G-PROTEIN
66
4.3.2
HUMORALE
IMMUNANTWORT
69
4.4
IDENTIFIKATION
UND
CHARAKTERISIERUNG
EINES
ZELLULAEREN
REZEPTORS
FUER
H
G
PROTEIN
70
5.
ZUSAMMENFASSUNG/SUMMARY
74
6.
LITERATUR
76
7.
ANHANG
84 |
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