Charakterisierung, intrazelluläre Lokalisierung und mögliche Funktion membranassoziierten Phytochroms:
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1996
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ABKUERZUNGEN
ZUSAMMENFASSUNG.
V
VI
1.
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1.3.
1.4.
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1.7.
1
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8
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1.9.
1
.
10
.
EINLEITUNG .
PHYSIOLOGIE VON PHYTOCHROM.
PHOTOREVERSIBILITAET VON PHYTOCHROM.
PHYTOCHROMMOLEKUEL.
MULTIPLES PHYTOCHROM.
DIE PHYTOCHROM-GENFAMILIE.
SYNTHESE UND DESTRUKTION VON PHYTOCHROM
INTRAZELLULAERE LOKALISIERUNG.
PHYTOCHROM SIGNALTRANSDUKTION.
WIRKUNGSDICHROISMUS.
FRAGESTELLUNG DER ARBEIT.*.
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14
2
. MATERIAL UND METHODEN.
2.1. VERWENDETE CHEMIKALIEN.
2.2. PFLANZENMATERIAL UND ANZUCHT DER KEIMLINGE.
2.3. PRAEPARATION VON MIKROSOMEN.
2.4. PRAEPARATION VON ERYTHROZYTEN-MEMBRANEN.
2.5. HERSTELLUNG VON INSIDE-OUT-VESIKELN.
2.6. SOLUBILISIERUNG VON MEMBRANEN.
2.7. PHOTOMETRISCHE MESSUNG VON PHYTOCHROM.
2.8. PROTEINBESTIMMUNG.
2.9. ACETONFAELLUNG.TT.;.
2.10. PHYTOCHROM-REINIGUNG.
2.10.1. REINIGUNG VON ZUCCHINI-PHYTOCHROM.
2.10.2. REINIGUNG VON HAFER-PHYTOCHROM.
2.11. MARKIERUNG VON PHYTOCHROM MIT BIOTIN.
2.12. MEMBRANFRAKTIONIERUNG.
2.12.1. SACCHAROSE-DICHTEGRADIENT.
2.12.2. METRIZAMID - DICHTEGRADIENT.
2.12.3. PEG/DEXTRAN-PHASENTRENNUNG.
2.12.3.1. PEG/DEXTRAN-ZWEIPHASENTRENNUNG.
2.12.3.2. GEGENSTROMVERTEILUNG IM PEG/DEXTRAN-SYSTEM
(COUNTER CURRENT
).
2.13. TRITON X-L 14 PHASENTRENNUNG.
2.14. GELFILTRATION.
2.15. MESSUNG VON ENZYMAKTIVITAETEN.
2.15.1. CYTOCHROM C-REDUKTASE.
2.15.2. CYTOCHROM C-OXIDASE.
2.15.3. MALIC-ENZYM.
2.15.4. GLUCOSE 6-PHOSPHAT DEHYDROGENASE.
2.15.5. MALAT-DEHYDROGENASE.
2.16. NPA-BINDUNG.
2.17. GELELEKTROPHORESE (PAGE).
2.17.1. DENATURIERENDE SDS-PAGE.
2.17.2. NATIVE GELELEKTROPHORESE.
2.18. PROTEINFAERBUNG IM POLYACRYLAMID-GEL.
2.19. WESTERN-BLOT.
2.19.1. PROTEINTRANSFER.
2.19.2. IMMUNOMARKIERUNG AUF WESERN-BLOT.
2.19.3. FAERBEREAKTIONEN FUER WESTERN-BLOTS.
2.19.3.1, ALKALISCHE PHOSPHATASE.
2.19.3.2. ECL - ENHANCED CHEMILUMINESCENCE.
2.20. NATIVE ISOEIEKTRISCHE FOKUSSIERUNG (IEF).
2.21. CROSSLINKING.
2.22. IMMUNOPREZIPITATION.
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.35
.36
.37
.37
BIBLIOGRAFISCHE INFORMATIONEN
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3.
ERGEBNISSE.39
3.1. MEMBRANASSOZIATION VON PHYTOCHROM.39
3.1.1. PELLETIERBARKEIT VON PHYTOCHROM.39
3.1.2. STABIJITAET DER MEMBRAN-ASSOZIATION .43
3.1.2.1. OEFFNEN DER VESIKEL IM ULTRASCHALL.43
3.1.2.2. EINFLUSS VON LICHT AUF DIE PHYTOCHROMASSOZIATION.45
3.1.2.3. PHYTOCHROMASSOZIATION AN INSIDE-OUT-VESIKEL
DER PLASMAMEMBRAN.46
3.1.3. INTRAZELLULAERE LOKALISIERUNG.49
3.1.3.1. SACCHAROSE-DICHTEGRADIENT.50
3.1.3.2. METRIZAMID-GRADIENT.50
3.1.3.3. PEG/DEXTRAN PHASENTRENNUNG.53
3.2. SOLUBILISIERUNG VON PHYTOCHROM.56
3.3. KREUZREAKTION ZWISCHEN ZUCCHINI-PHYTOCHROM UND MAP5-ANTIKOERPER:
VERSUCHE ZUR IMMUNPRAEZIPITATION.59
3.4. REINIGUNG VON LOESLICHEM PHYTOCHROM AUS ZUCCHINI-KEIMLINGEN.61
3.5. UNTERSUCHUNGEN ZUR PHYTOCHROM-BINDUNG IN VITRO.65
3.6. VERTEILUNG VON PHYTOCHROM IM TRITON X-L 14-PHASENSYSTEM.72
3.7. VERGLEICHENDE CHARAKTERISIERUNG VON LOESLICHEM UND PELLETIERTEM
PHYTOCHROM.79
3.7.1. LAUFVERHALTEN VON PHYTOCHROM IN POLYACRYLAMID-GELELEKTRO
PHORESE (PAGE). 79
3.7.1.1. SDS-PAGE.'.79
3.7.1.2. NATIVE PAGE.84
3.7.2. NATIVE ISOELEKTRISCHE FOKUSSIERUNG (IEF).88
3.7.3. GELFILTRATION.~.90
4.
DISKUSSION.10I
4.1. DIE PLASMAMEMBRAN ALS ORT DER PHYTOCHROM-ASSOZIATION."!"."".101
4.2. NATUR DER PHYTOCHROM-ASSOZIATION.104
4.3. HINWEISE AUF ZWEI TYPEN DER MEMBRAN-ASSOZIATION VON PHYTOCHROM.110
4.4. CHARAKTERISIERUNG DER MEMBRANASSOZIATION.111
5
. LITERATURVERZEICHNIS.
IV |
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