Gentransfer in Säugetierzellen:
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| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
Heidelberg [u.a.]
Spektrum, Akad. Verl.
1997
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| Schriftenreihe: | Labor im Fokus
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| adam_text | Inhalt
Vorwort 9
1. Einführung 11
1.1 Wozu braucht man Gentransfer? 11
1.2 Wahl der Marker-oder Indikatorgene 13
1.3 Transienter oder stabiler Gentransfer 14
1.4 Promotoren und andere regulatorische Elemente 15
1.5 Locus-Kontrollregionen und Isolatoren 17
1.6 Literatur 18
2. Physikalische Gentransfermethoden 19
2.1 Elektroporation 19
2.2 Mikroinjektion 20
2.3 Intramuskuläre Injektion 21
2.4 Genkanone 22
2.5 Druckluftinjektion 22
2.6 Calciumphosphatvermittelte Transfektion 23
2.7 Liposomen und Virosomen 23
2.8 Kationische Lipide 26
2.9 Ligandenvermittelter Gentransfer 28
2.10 Literatur 30
3. Retroviren 33
3.1 Der retrovirale Lebenszyklus 35
3.1.1 Anlagerung und Aufnahme 35
3.1.2 Reverse Transkription und Kerneintritt 38
3.1.3 Die Integration 38
3.1.4 Die Transkription 41
3.1.5 Die Translation und Verpackung 41
3.1.6 Die Knospung und Reifung 43
3.2 Umwandlung in Vektoren 43
3.2.1 Die erste Generation retroviraler Vektorsysteme 47
3.2.2 Die zweite Generation retroviraler Vektorsysteme 49
6 Gentransfer in Säugetierzellen
3.2.3 Die dritte Generation retroviraler Vektorsysteme 49
3.3 Produktion und Anwendung von
retroviralen Vektoren 52
3.3.1 Die Expression heterologer Gene 52
3.3.2 Erhöhung des Titers 56
3.3.3 Infektion von sich nicht teilenden (ruhenden) Zellen 58
3.4 Zielausrichtung von retroviralen Vektoren 59
3.4.1 Gewebespezifische Infektion 60
3.4.2 Gewebespezifische Expression 65
3.4.3 Induzierbare Vektoren 71
3.5 Immunologische Konsequenzen 73
3.6 Zukünftige Entwicklung 74
3.7 Literatur 74
4. Adenoviren 85
4.1 Der adenovirale Lebenszyklus 87
4.1.1 Anlagerung und Aufnahme in die Wirtszelle 87
4.1.2 Sehr frühe (immediate early) Genexpression 88
4.1.3 Verzögerte frühe (delayed early) Genexpression 88
4.1.4 Replikation 91
4.1.5 Späte (late) Genexpression 92
4.1.6 Zusammenbau und Freisetzung 93
4.2 Umwandlung in Vektoren 94
4.2.1 Die erste Generation adenoviraler Vektorsysteme 95
4.2.2 Die zweite Generation adenoviraler Vektorsysteme 98
4.2.3 Die dritte Generation adenoviraler Vektorsysteme 101
4.3 Produktion und Anwendung rekombinanter
Adenoviren 1U
4.3.1 Produktion von Wildtypvirus 105
4.3.2 Infektionsspektrum und Verweildauer 1°7
1 (XI
4.4 Zielausrichtung von adenoviralen Vektoren 1U/
4.5 Immunologische Konsequenzen 108
4.5.1 Entzündungsreaktionen *™
4.5.2 Humorale Immunantwort ^
4.5.3 Zelluläre Immunantwort ^u
4.6 Transformation
111
4.7 Zukünftige Entwicklungen *1
4.8 Literatur 114
; Inhalt 7
5. Adenoassoziierte Viren (AAV) 119
5.1 DerAAV-Lebenszyklus 119
5.1.1 Infektion 119
5.1.2 Integration 121
5.1.3 Lytischer und latenter Lebenszyklus 123
r 5.1.4 Transkription und Translation 125
5.1.5 Zusammenbau, Verpackung und Freisetzung 125
5.2 Umwandlung in Vektoren 126
5.2.1 Die erste Generation AAV-abgeleiteter Vektorsysteme 126
5.2.2 Die zweite Generation AAV-abgeleiteter Vektorsysteme 128
5.3 Produktion und Anwendung von AAV-Vektoren 130
5.3.1 Produktion von Wildtypvirus 132
5.3.2 Infektions-und Expressionsspektrum 133
5.4 Gezielte Integration von AAV-Vektoren 133
5.5 Zukünftige Entwicklungen 134
5.6 Literatur 134
6. Herpesviren 139
6.1 Herpes-simplex-Virus 1 (HSV-1) 140
6.1.1 Viraler Lebenszyklus des HSV-1 140
6.1.2 Umwandlung in Vektoren 144
6.1.3 Zukünftige Entwicklungen 152
6.2 Epstein-Barr-Virus (EBV) 152
6.2.1 Viraler Lebenszyklus des EBV 153
6.2.2 Umwandlung in Vektoren 155
6.2.3 Zukünftige Entwicklungen 160
6.3 Herpesvirus saimiri 161
6.3.1 Viraler Lebenszyklus des HVS 162
6.3.2 Umwandlung in Vektoren 163
6.3.3 Zukünftige Entwicklungen 164
6.4 Literatur 165
8 Gentransfer in Säugetierzellen
7. Vektoren zur Proteinüberproduktion und zur Impfung 171
7.1 Alphavirusvektoren 171
7.2 Pockenvirusvektoren 179
7.3 Literatur 181
8. Gentherapieversuche: Ethik, Erprobung und Probleme 185
8.1 Literatur 193
Glossar 195
Abkürzunsverzeichnis 203
Index 207
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