Untersuchungen zur Bedeutung des Cadherin/Catenin-Tumorsuppressorsystems während der Migration von epithelialen Zellen:
Gespeichert in:
| 1. Verfasser: | |
|---|---|
| Format: | Buch |
| Sprache: | German |
| Veröffentlicht: |
München
Diss.-Verl. NG-Kopierladen
1997
|
| Schlagworte: | |
| Online-Zugang: | Inhaltsverzeichnis |
| Beschreibung: | Zugl.: München, Univ., Fak. für Biologie, Diss., 1997 |
| Beschreibung: | V, 173 S. Ill., graph. Darst. |
| ISBN: | 3928536869 |
Internformat
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INHALTSVERZEICHNIS
SEITE
1.
EINLEITUNG
1-19
1.1
ZELL-ZELLKONTAKTE
AM
BEISPIEL
EPITHELIALER
ZELLEN
1
1.2
ADHERENS
JUNCTLONS
UND
DAS
CADHERLN/CATENIN-SYSTEM
3
1.2.1
KLASSIFIKATION
VON
CADHERINEN
3
1.2.2
KLASSISCHE
CADHERINE
4
1.2.3
NICHT-KLASSISCHE
CADHERINE
5
1.2.4
INTERAKTION
ZWISCHEN
CATENLNEN
UND
E-CADHERIN
6
1.2.5
WEITERE
INTERAKTIONSPARTNER
VON
CADHERINEN
UND
CATENINEN
7
1.2.6
DAS
CADHERIN/CATENIN-SYSTEM
ALS
TUMORSUPPRESSOR
8
1.3
SIGNALTRANSDUKTION
DURCH
REVERSIBLE
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
8
1.3.1
TYROSINKINASEN
8
1.3.1.1
KLASSIFIKATION
UND
STRUKTUR
VON
REZEPTORTYROSINKINASEN
9
1.3.1.2
REZEPTORAKTIVIERUNG
UND
SIGNALTRANSDUKTION
11
1.3.2
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
13
1.3.2.1
KLASSIFIKATION
UND
STRUKTUR
VON
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
14
1.3.2.2
DIE
TRANSMEMBRANE
PROTEINTYROSINPHOSPHATASE
PTP
LAR
15
1.3.2.3
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
UND
INTERAGIERENDE
PROTEINE
17
1.4
AUFGABENSTELLUNG
19
2.
MATERIAL
UND
METHODEN
20-52
2.1
BEZUGSQUELLENNACHWEIS
20
2.2
MEDIEN
UND
PUFFER
23
2.2.1
MEDIEN
FUER
E.
COLI
BAKTERIEN
23
2.2.2
ZELLKULTURMEDIEN
FUER
SAEUGERZELL-ZELLKULTUR
23
2.2.3
STAMMLOESUNGEN
UND
VERWENDETE
PUFFER
24
2.3
BAKTERIENSTAEMME
UND
ZELLLNLEN
25
2.3.1
BAKTERIENSTAEMME
25
2.3.2
ZELLINIEN
25
2.4
PLASMIDE
UND
OLLGONUKLEOTLDE
26
2.4.1
AUSGANGSVEKTOREN
26
2.4.2
IM
RAHMEN
DIESER
ARBEIT
VERWENDETE
ODER
ERSTELLTE
VEKTOREN
27
2.4.3
PCR-KLONIERUNG
VON
CATENLN
A,
CATENIN
SS
UND
PLAKOGLOBIN
29
2.4.4
WICHTIGE
OLIGONUKLEOTIDE
30
2.5
ANTIKOERPER
31
2.6
MOLEKULARGENETISCHE
METHODEN
33
2.6.1
PLASMIDPRAEPARATION
FUER
ANALYTISCHE
ZWECKE
33
2.6.2
PLASMIDPRAEPARATION
FUER
PRAEPARATIVE
ZWECKE
33
2.6.3
ENZYMATISCHE
BEHANDLUNG
VON
DNA
33
2.6.3.1
SCHNEIDEN
VON
DNA
MIT
RESTRIKTIONSENDONUKLEASEN
33
2.6.3.2
DEPHOSPHORYLIERUNG
VON
5
'
-ENDEN
33
2.6.3.3
VERKNUEPFUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
MIT
T4-DNA-LIGASE
34
2.6.4
AUFTRENNUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
IM
AGAROSEGEL
34
2.6.5
ISOLIERUNG
VON
DNA-FRAGMENTEN
AUS
AGAROSEGELEN
24
2.6.6
TRANSFORMATION
KOMPETENTER
E.COLI
MIT
PLASMID-DNA
34
2.6.7
SEQUENZIERUNG
35
2.7
PRAEPARATION
VON
RNA
35
2.7.1
PRAEPARATION
35
2.7.2
ELEKTROPHORETISCHE
AUFTRENNUNG
VON
RNA
35
2.8
AMPLIFIKATION
VON
DNA-FRAGMENTEN
DURCH
PCR
35
2.8.1
CDNA-SYNTHESE
35
2.8.2
PCR-AMPLIFIZIERUNG
VON
DNA
UND
CDNA-FRAGMENTEN
36
2.9
METHODEN
ZUR
CHARAKTERISIERUNG
EUKARYONTISCHER
ZELLEN
36
2.9.1
ALLGEMEINE
ZELLKULTURTECHNIKEN
36
2.9.2
MIGRATIONSASSAYS
36
2.9.2.1
/N-V/TRO-WUNDEN-ASSAY
36
2.9.2.2
SCATTER-ASSAY
37
2.9.3
MESSUNG
DER
DNA-SYNTHESE
BEI
MIGRIERENDEN
ZELLEN
38
2.9.3.1
MESSUNG
DER
DNA-SYNTHESE
AUF
EINZELZELL-EBENE
38
2.9.S.2
MESSUNG
DER
DNA-SYNTHESE
EINER
GESAMTEN
KULTURSCHALE
39
2.9.4
ZELLZYKLUS-ANALYSE
DURCH
FACS-ANALYSE
40
2.9.5
TRANSIENTE
TRANSFEKTION
VON
293
ZELLEN
MIT
PLASMID-DNA
41
2.9.6
RETROVIRALER
GENTRANSFER
IN
NAGETIER-ZELLEN
41
2.9.6.1
HERSTELLUNG
REKOMBINANTER
RETROVIREN
41
2.9.6.2
INFEKTION
VON
NAGETIER-ZELLEN
MIT
REKOMBINANTEN
RETROVIREN
41
2.9.6.3
SELEKTION
G4
18
RESISTENTER
ZELLKLONE
42
2.9.7
METABOLISCHE
[
35
S]-L-METHIONIN
MARKIERUNG
42
2.9.8
STIMULATION
VON
ZELLEN
42
2.10
PROTEINBIOCHEMISCHE
METHODEN
43
2.10.1
AUFREINIGUNG
REKOMBINANTER
GLUTATHION-S-TRANSFERASE-FUSIONSPROTEINE
43
2.10.1.1
EXPRESSION
EINES
GST-FUSIONSPROTEINS
IN
BAKTERIEN
&
LYSE
DER
BAKTERIEN
44
2.10.1.2
AFFINITAETSCHROMATOGRAPHIE
MIT
GLUTATHION-SEPHAROSE
44
2.10.2
HERSTELLUNG
VON
POLYKLONALEN
ANTISEREN
IM
KANINCHEN
44
2.10.3
LYSE
VON
ZELLEN
MIT
TRITON
X-1
00
45
2.10.4
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
46
2.10.5
IMMUNPRAEZIPITATION
VON
PROTEINEN
46
2.10.6
IN
V7TRO-ASSOZIATION
MIT
EINEM
GST-FUSIONSPROTEIN
46
2.10.7
SDS-POLYACRYLAMID-GELELEKTROPHORESE
47
2.10.8
TRANSFER
VON
PROTEINEN
AUF
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
47
2.10.9
WESTERN
BLOT
ANALYSE
47
2.10.9.1
ANTIKOERPERINKUBATIONEN
VON
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
48
2.10.9.2
DETEKTION
MIT
DEM
ECLYY-VERFAHREN
48
2.10.9.3
ENTFERNEN
DER
ANTIKOERPERKOMPLEXE
VON
NITROZELLULOSEMEMBRANEN
48
2.10.10
BESTIMMUNG
DER
IN
VITRO
PHOSPHATASEAKTIVITAET
VON
PHOSPHATASEN
49
2.10.11.1
IN
VITRO
PHOSPHATASEAKTIVITAET
GEGENUEBER
PNPP
49
2.10.11.2
IN
VITRO
PHOSPHATASEAKTIVITAET
GEGENUEBER
CATENIN
SS
49
2.10.12
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCHEN
AKTIVITAET
VON
MAP-KINASE
IN
VITRO
50
2.10.13
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCHEN
AKTIVITAET
VON
CDK2
IN
VITRO
50
2.10.13.1
LYSE
DER
ZELLEN
50
2.10.13.2
BESTIMMUNG
DER
PROTEINKONZENTRATION
50
2.10.13.3
BESTIMMUNG
DER
KATALYTISCHEN
AKTIVITAET
VON
CDK2
IN
VITRO
51
2.10.14
INDIREKTE
IMMUNFLUORESZENZ
51
2.11
PRAESENTATION
DER
DATEN
52
3.
ERGEBNISSE
53-115
3.1
DIE
NBTII
ZELLLNIE
ALS
MODELLSYSTEM
DER
EPITHELIALEN
ZELLMLGRATLON
53
3.1.1
DIE
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
54
3.1.1.1
INDUKTION
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
DURCH
WACHSTUMSFAKTOREN
54
3.1.1.2
DIE
INHIBITION
DER
DNA-SYNTHESE
HAT
KEINEN
AUSWIRKUNG
AUF
DIE
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN,
DIE
INHIBITION
DER
PROTEINBIOSYNTHESE
HINGEGEN
UNTERBINDET
DIE
MIGRATION
VOLLSTAENDIG
56
3.1.1.3
DIE
AKTIVITAET
VON
TYROSINKINASEN
IST
ESSENTIELL
FUER
DIE
INDUKTION
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
58
3.1.1.4
DIE
INHIBITION
VON
PI3
KINASE,
MEK1
&
2
SOWIE
DIE
ERHOEHUNG
DES
INTRA
ZELLULAEREN
CAMP-SPIEGELS
INHIBIEREN
DIE
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
59
3.1.2
DIE
DNA-SYNTHESE
WAEHREND
DER
WACHSTUMSFAKTOR-INDUZIERTEN
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
62
3.1.2.1
DIE
INDUKTION
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
WIRD
VON
EINER
TRANSIENTEN
INHIBITION
DER
DNA-SYNTHESE
BEGLEITET
62
3.1.2.2
PARAMETER
DER
WACHSTUMSFAKTOR-INDUZIERTEN
DNA-SYNTHESEINHIBITION
64
3.1.2.3
DIE
INHIBITION
DER
DNA-SYNTHESE
MIGRIERENDER
NBT
II
ZELLEN
KORRELIERT
MIT
EINEM
BLOCK
IN
DER
G
1
-PHASE
DES
ZELLZYKLUS
66
3.1.2.4
EINE
VERRINGERTE
CDK2-AKTIVITAET
KORRELIERT
MIT
DEM
EGF-INDUZIERTEN
GL-ARREST
MIGRIERENDER
NBT
II
ZELLEN
68
3.1.2.5
MIGRATION
UND
INHIBITION
DER
DNA-SYNTHESE
SIND
VONEINANDER
UNABHAENGIGE
PROZESSE
71
3.1.3
DIE
KOMPONENTEN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
WAEHREND
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
74
3.1.3.1
KOMPONENTEN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
WERDEN
WAEHREND
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
UMVERTEILT
74
3.1.3.2
DIE
EXPRESSION
DER
KOMPONENTEN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
BLEIBT
WAEHREND
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
KONSTANT
76
3.2
TYROSIN-PHOSPHORYLIERUNG
VON
KOMPONENTEN
DES
CADHERIN/CATENIN
KOMPLEXES
DURCH
TYROSINKINASEN
77
3.2.1
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
KOMPONENTEN
DES
CADHERIN/CATENIN
KOMPLEXES
IM
UEBEREXPRESSIONSSYSTEM
DER
293
ZELLEN
77
3.2.1.1
CATENIN
SS
WIRD
NUR
DURCH
TYROSINKINASEN
PHOSPHORYLIERT,
DIE
EINE
FUNKTION
BEI
DER
MIGRATION
EPITHELIALER
ZELLEN
HABEN
78
3.2.1.2
PHOSPHORYLIERUNG
VON
PLAKOGLOBIN
DURCH
TYROSINKINASEN
81
3.2.1.3
E-CADHERIN
UND
CATENIN
A
WERDEN
DURCH
TYROSINKINASEN
NICHT
PHOSPHORYLIERT
82
3.2.2
ASSOZIATION
VON
CATENIN
SS
MIT
DEM
HER1/GRB2-KOMPLEX
IN
A431
ZELLEN
82
3.2.3
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
IN
ZUR
MIGRATION
INDUZIERTEN
EPITHELIALEN
NBTII
ZELLEN
84
3.2.4
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
IN
WEITEREN
EPITHELIALEN
ZELLINIEN
86
3.2.4.1
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENIN
KOMPLEXES
IN
HACAT
ZELLEN
86
3.2.4.2
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENIN
KOMPLEXES
IN
HT29
ZELLEN
88
3.2.5
AUSWIRKUNGEN
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CATENIN
SS
IN
NBT
II
ZELLEN
90
3.2.5.1
DIE
MENGE
AN
FREIEM,
UNKOMPLEXIERTEN
CATENIN
SS
KORRELIERT
MIT DER
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
CATENIN
SS
IN
NBT
II
ZELLEN
90
3.2.5.2
HINWEISE
AUF
EINE
MOEGLICHE
ROLLE
DES
FREIEN,
UNKOMPLEXIERTEN
CATENIN
SS
BEI
DER
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
92
3.3
INTERAKTION
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
MIT
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
94
3.3.1
MITGLIEDER
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
COLOKALISIEREN
MIT
DER
PROTEINTYROSINPHOSPHATASE
LAR
AN
ZELL-ZELL-KONTAKTEN
94
3.3.2
MITGLIEDER
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
ASSOZIIEREN
IN
VIVO
MIT
PTP
LAR
97
3.3.2.1
CATENIN
SS
ASSOZIIERT
IN
VIVO
IN
MCF7
ZELLEN
MIT
PTP
LAR
97
3.3.2.2
PLAKOGLOBIN
ASSOZIIERT
IN
VIVO
IN
MCF7
ZELLEN
MIT
PTP
LAR
99
3.3.3
MITGLIEDER
DES
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEXES
ASSOZIIEREN
IN
VITRO
MIT
PTP
LAR
100
3.3.3.1
CATENIN
SS
UND
PLAKOGLOBIN,
NICHT
ABER
CATENIN
A
UND
E-CADHERIN,
ASSOZIIEREN
IN
VITRO
MIT
EINEM
GST/PTP
LAR
ZYTOPL.-FUSIONSPROTEIN
101
3.3.3.2
DIE
KOMPLETTE
ZYTOPLASMATISCHE
DOMAENE
VON
PTP
LAR
IST
NOETIG,
UM
CATENIN
SS
ODER
PLAKOGLOBIN
IN
VITRO
EFFIZIENT
ZU
BINDEN
103
3.3.4
CATENIN
SS
IST
IN
VITRO
EIN
SUBSTRAT
VON
PTP
LAR
105
3.3.5
HINWEISE
AUF
EINE
BIOLOGISCHE
RELEVANZ
FUER
DIE
ENZYM-SUBSTRAT-INTERAKTION
VON
PTP
LAR
UND
CATENIN
SS
107
3.3.5.1
EKTOPISCHE
UEBEREXPRESSION
VON
HPTP
LAR
IN
NBT
II
RATTEN
EPITHELZELLEN
108
3.3.5.2
EINFLUSS
DER
EKTOPISCHEN
EXPRESSION
VON
HPTP
LAR
AUF
DIE
AKTIVIERTOARKEIT
DES
EGF-REZEPTORS
IN
NBTII
ZELLEN
109
3.3.5.3
DIE
EKTOPISCHE
UEBEREXPRESSION
VON
HPTP
LAR
INHIBIERT
DIE
MIGRATION
VON
NBT
II
ZELLEN
111
3.3.5.4
AUSWIRKUNGEN
DER
EKTOPISCHEN
EXPRESSION
VON
HPTP
LAR
IN
NBT
II
ZELLEN
AUF
DEN
FREIEN,
UNKOMPLEXIERTEN
POOL
VON
CATENIN
SS
UND
DESSEN
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
113
4.
DISKUSSION
116*141
4.1
MIGRATION
UND
SIGNALTRANSDUKTLON
117
4.1.1
REGULATION
DER
ZELL/ECM-KONTAKTE
WAEHREND
DER
MIGRATION
117
4.1.2
MIGRATION
UND
DIE
REGULATION
DER
PROTEASENSEKRETION
120
4.1.3
MIGRATION
UND
DER
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEX
122
4.2
PHOSPHORYLIERUNG
DES
CADHERIN/CATENLN-KOMPLEXES
DURCH
TYROSIN
KINASEN
123
4.2.1
TYROSINPHOSPHORYLIERUNG
VON
MITGLIEDERN
DES
CADHERIN/CATENLN
KOMPLEXES
123
4.2.2
MOEGLICHE
FUNKTIONEN
DER
PHOSPHORYLIERUNG
VON
CATENIN
SS
UND
PLAKOGLOBIN
126
4.3
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
UND
DER
CADHERIN/CATENIN-KOMPLEX
128
4.3.1
INTERAKTION
VON
PROTEINTYROSINPHOSPHATASEN
MIT
DEM
CADHERIN/CATENIN
KOMPLEX
129
4.3.2
FUNKTION
DER
ASSOZIATION
VON
PHOSPHATASEN
UND
CATENIN
SS
BZW.
PLAKOGLOBIN
131
4.4
CATENIN
SS
ALS
SIGNALMOLEKQI
134
4.4.1
MITGLIEDER
DER
ARMADILLO-FAMILIE
BEI
DER
ENTWICKLUNG
VON
DROSOPHILA
UND
XENOPUS
134
4.4.2
CATENIN
SS
BEI
DER
ENTWICKLUNG
VON
SAEUGETIERORGANISMEN
136
4.4.3
CATENIN
SS
ALS
SIGNALMOLEKUEL
IN
DER
EPITHELIALEN
ZELLMIGRATION
138
5.
ZUSAMMENFASSUNG
142-143
6.
LITERATURVERZEICHNIS
144-169
7.
ANHANG
170-174
7.1
ABKUERZUNGSVERZEICHNIS
170
7.2
ABBBILDUNGSVERZELCHNLS
172
7.3
LEBENSLAUF
174 |
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